Tarimin autiomaasta peräisin olevan 17 komponentin karakterisointi viljelykasveissa Herba HPLC-MS:n avulla

[Abstrakti]Tavoite: Tunnistaa 60 % metanoliuutteen kromatografiset komponentitCistanches deserticola Herbaviljelty Tarimin autiomaassa HPLC-MS:llä.

Menetelmä: HPLC-MS-analyysi suoritettiin Agilent ZOＲBAX Eclipse Plus C18 -kolonnilla (6 mm × 250 mm, 5 μm). Liikkuva faasi oli asetonitriili-0. 1-prosenttinen muurahaishapon vesiliuos gradienttieluoimalla virtausnopeudella 1 ml·min-1, ja havaitsemisaallonpituus oli 254 nm. Kolonnin lämpötila asetettiin 25 asteeseen ja injektiotilavuus oli 10 µl. Tulos: Kuusitoista kromatografista piikkiä / seitsemäntoista komponenttia tunnistettiin tarkasti vertaamalla eristämiemme ja tunnistamiemme yhdisteiden retentioaikaa, molekyylipainoa ja fragmentti-ioneja. Nämä kromatografiset komponentit määritettiin seuraavasti: havuferiini, demetyylisyringiini, syringiini, ekinakosidi, cistanosidi A, verbaskosidi (tubulosidi A), sistanosidi B, isoverbaskosidi, 2'-asetyylikistanosidi A, tistanosidi C, isosistanosidi C, 2'-asetyyliverbaskosidi, tsistanosidi B, tsistanosidi B, tsistanosidi B, J.

Johtopäätös: HPLC-MS-menetelmä soveltuu 60 % metanoliuutteen kromatografisten komponenttien tunnistamiseen Cistanches Herbassa. Tämä tutkimus tarjoaa tieteellistä näyttöä tämän lääkekasvin kemiallisten ainesosien kattavaan analysointiin.

［Avainsanat］ Cistanches deserticolaHerba; Cistanche; HPLC-MS; metanoliuute

Cistanche deserticola YCMa

Cistanche deserticola, joka tunnetaan myös nimellä "aavikon ginseng",on kuuluisa tonic kiinalainen lääketiede, jota jaetaan Sisä-Mongoliassa, Ningxiassa, Gansussa ja Kiinan Xinjiangissa [1].Sillä on munuais-yangin virkistysvaikutus, veri-esanssia hyödynnettävä, suolistoa kostuttava ja ulostaminen. Sitä käytetään yleisesti klinikoilla miesten impotenssin, naisten hedelmättömyyden, vyötärön ja polven kylmäkivun, veren pysähdyksen ummetuksen hoitoon.jne. [2-3].Cistanche deserticola, joka onKiinan farmakopean (2015 painos) ensimmäiseen osaan sisältyy Cistanche deserticolan ja Cistanche tubulosan kuivattu mehevä varsi (4). Tutkimusryhmämme on tehnyt systemaattista ja syvällistä tutkimusta Cistanche-kasveista useiden vuosien ajan.Cistanche-kasvien kemialliset komponentit ovat pääasiassa fenyylietanoliglykosideja, iridoidien ja niiden glykosidien lisäksi lignaaneja ja niiden glykosideja, bentsyylialkoholiglykosideja jne.[5]. Nykyaikaiset farmakologiset tutkimukset osoittavat, että fenyylietanoliglykosideilla, suvun pääkomponenteilla, on hermostoa suojaavia, antioksidantteja, maksaa suojaavia, antibakteerisia, viruksia estäviä, kasvaimia estäviä, tulehdusta ehkäiseviä ja muita vaikutuksia [6-11].

Aavikon ginseng

Kiinassa Cistanche deserticolaa levitetään Länsi-Sisä-Mongoliassa, Pohjois-Xinjiangissa ja Qinghain Qaidam-altaassa, mutta ei Etelä-Xinjiangin Tarim-altaassa.. 1990-luvun lopulla öljykentän päämaja toi Tazhongin öljykentän suojelemiseksi ja aavikon hallitsemiseksi käyttöön suuren määrän Haloxylon-ammodendroneja Tazhongin öljykentän ympärille ja aavikon valtatien molemmille puolille ja rokotti Haloxylon-ammodendronin säiliöllä, mikä on kestänyt yli 10 vuotta. Etelä-Xinjiangin lämpimän ilmaston ja öljypohjan hyvien tippakasteluolosuhteiden vuoksi cistanche deserticolan saanto on erittäin korkea, ja tuoreen cistanche deserticolan saanto per mu on yli 500 kg [8]. Monet Cistanche deserticolan kemialliset komponentit ovat tuottaneet suuren määrän isomeerejä substituenttien erilaisten kytkentäasemien vuoksi. Tämä tuo suuria vaikeuksia tämän lääkemateriaalin kromatografisen piikin tunnistamisessa. On vaikeaa tunnistaa tarkasti kromatografisen piikin komponentit, jos luotetaan vain LC-MS:ään ilman monomeeriyhdisteitä kontrollina. Siksi tästä työstä on alkuvaiheessa vain vähän kirjallisuusraportteja. Kirjoittaja eristi monia monomeeriyhdisteitä [9-11] Tazhongin autiomaassa varhaisessa vaiheessa viljellystä Cistanche deserticolasta. Näiden alkuvaiheessa saatujen monomeeriyhdisteiden avulla Cistanche deserticolan 60 % metanoliuutteen HPLC-osittaiset kromatografiset piikit tunnistettiin tarkasti. Tämä ei ainoastaan ​​välttää joidenkin tunnettujen yhdisteiden toistuvaa tunnistamista Cistanche deserticolan kemiallisista aineosista, vaan tarjoaa myös viitteitä lääkemateriaalin laadunvalvontaa koskevalle lisätutkimukselle. Tässä artikkelissa HPLC-MS:llä tunnistettiin 17 komponenttia Cistanche deserticolan 0 % metanoliuutteesta.

Cistanche deserticola -viipale

Napsauta tästä nähdäksesi Cistanche-tuotteet

【Kysy lisää】 Sähköposti: xue122522@foxmail.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1.Materiaali

Inova-500 ydinmagneettinen resonanssilaite (Varian, USA); 6320IonTrap LC-MS-massaspektrometri, EclipseXDB-C18-kolonni (4,6 mm × 250 mm, 5 μm) (Agilent, USA); QUINTIX313-1CN tyyppi 1/10000 elektroninen vaaka (Sedaris-divisioona); KQ-500DV ultraäänipuhdistin (Jiangsu Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); KMUP - Ⅰ Trace Analytical Ultra Pure Water Generation System (Chengdu Haochun Instrument Equipment Co., Ltd.).

Kirjoittaja eristi varhaisessa vaiheessa tässä kokeessa käytetyt 39 kontrolliainetta Tazhongissa sijaitsevasta autiomaassa viljellystä Cistanche deserticolasta, ja niiden rakenteet määritettiin NMR:llä ja muilla spektroskopiatekniikoilla. 39 kontrollinäytteen rakenteet tunnistettiin Cistanche deserticoside J, Cistanche deserticoside K, Cistanche deserticoside L, Cistanche deserticoside M, Cistanche deserticoside N, epimeridinosideA, Isocistancheside C, angiosyanin B, Cistanche deserticoside, Cistanche deserticoside, Cistanche deserticoside, Cistanche deserticoside, isocornicin Cistanche cymosiini, 2 '- asetyyli Cistanche deserticoside A, 2' - asetyyli Cistanche deserticoside A, Cistanche deserticola B, Cistanche deserticola A, Echinoside A, Cistanche deserticola glykosidi E, Salidroside, juperni, syperini, syperiini, syperiini, syperiini, salidrosidirengas (2E, 6E) - 3, 7-dimetyyli-8-hydroksiktadien-1-O- - D-glukosidi, (+) - syringiini, (+) - syringin-4'- O- - D-glukopyranosidi, (+) - isoeucomminA, (+ metyyli) -{0} rosiini D-glukosidi, toukkia tuhoava-4 '- O- - D-glukosidi, toukkia tuhoava-4-O- - D-glukosidi- - D-glukopyranosidi, hesperidiini A, pinta-ala A, 6-deoksikatapoli. Kaikkien edellä mainittujen vertailuaineiden puhtaus on yli 98,0 %. Asetonitriili on kromatografisesti puhdasta (DikmaPure, USA), vesi on ultrapuhdasta vettä ja muut testiprosessissa käytetyt reagenssit ovat analyyttisesti puhtaita reagensseja, joita valmistaa Beijing Chemical Plant.

Tässä kokeessa käytetty lääkeaine, Cistanche deserticola, kerättiin Tazhongin aavikkoalueelta Xinjiangista marraskuussa 2010. Professori Tu Pengfei Pekingin yliopiston farmasian korkeakoulusta tunnisti sen Leobaceae-kasvin Cistanche deserticola kuivatuksi meheväksi varreksi. Näyte säilytettiin Pekingin yliopiston perinteisessä kiinalaisen lääketieteen modernissa tutkimuskeskuksessa (näytteen numero: CD201011).

Cistanche deserticola -viipale

2.Menetelmät ja tulokset

2.1 Vertailuliuoksen valmistaminen

Ota noin 1 mg kutakin Cistanche deserticolasta alkuvaiheessa saaduista 39 kontrollinäytteestä, punnita ne tarkasti, laita ne vastaavasti 5 ml:n mittapulloon, liuotetaan ne metanoliin ja tilavoidaan vaakaan ja hanki sitten yksittäinen kontrolliliuos.

2.2 Testiliuoksen valmistaminen

Kiinan farmakopean 2015 painokseen viitaten ota noin 1g tuotejauhetta (neljännen siivilän läpi), punnita tarkasti, laita 100 ml ruskeaan pulloon, lisää tarkasti 50 ml 60 % metanolia, tiivistä, ravista hyvin, punnita massa, liota 30 min, punnita uudelleen jäähdytykseen, 40 min. 50 % metanolia pelkistyneen massan täydentämiseksi, ravista hyvin, seiso, ota supernatantti ja käytä 0,45 μM mikrohuokoista kalvosuodatusta, ota jatkuva suodos testiliuoksen saamiseksi.

2.3 Kromatografiset olosuhteet

AgilentEclipse XDB-C18 kromatografinen kolonni (4,6 mm × 250 mm, 5 μm), detektioaallonpituus 254 nm, kolonnin lämpötila 25 astetta; Käyttämällä asetonitriiliä (A) - 0.1% muurahaishapon vesiliuosta (B) liikkuvana faasina, gradienttieluointi (0 - 20min, 5% - 15% A; 20 - 50min, 15% - 30% A; 50 - 60min, 30% - 50% A}, - 50% A}; Virtausnopeus: 1,0 ml · min-1, injektiotilavuus: 10 μL.

2.4 Massaspektriolosuhteet

Kapillaarilämpötila 350 astetta; Kapillaarijännite 3500V; Vaippakaasun (typpi) virtausnopeus 12,0L · min-1; Apukaasun (typpi) paine 206,8 kPa; Massaspektrometrian koko pyyhkäisyalue on m/z 50-1000; Törmäyskaasu helium, törmäysenergia valitaan automaattisesti testin aikana; Kerää 1 neula kutakin positiivista ja negatiivista ionitilaa kohti.

2.5 Vertailuaineen testi

Kohdan 2.1 mukaisesti valmistettuja 39 vertailuliuosta testattiin 2,3 kromatografisissa olosuhteissa ja 2,4 massaspektrometrisissa olosuhteissa ja niiden retentioaika ja suhteellinen molekyylipaino kirjattiin (taulukko 1).

2.6 Testiliuoksen määrittäminen

Otetaan Xinjiangin Tazhongin aavikkoalueelta kerätty lääkeaine Cistanche deserticola ja valmistetaan testiliuos kohdassa 2.2 kuvatun menetelmän mukaisesti. Suorita sitten määritys kohdassa 2.3 kuvattujen kromatografisten olosuhteiden ja kohdassa 2.4 kuvattujen massaspektrometrian olosuhteiden mukaisesti ja määritä sen HPLC-kromatogrammi ja massaspektrometria positiivisessa ja negatiivisessa ionimoodissa (kuvat 1-3).

Kuva. 1 HPLC-kromatogrammi Cistanches Herban 60 % metanoliuutteesta

Kuva. 2 positiivinen TIC MS -kromatogrammi Cistanches Herban 60 % metanoliuutteesta

Kuva. 3 Cistanches Herban 60 % metanoliuutteen negatiivinen TIC MS -kromatogrammi

2.7 Lääkemateriaalien HPLC-kromatogrammin tunnistaminen

Samoissa olosuhteissa (2,3 kromatografiaolosuhteet ja 2,4 massaspektrometriaolosuhteet) komponentit tunnistettiin vertaamalla testinäytteen ja kontrollinäytteen retentioaikaa ja suhteellista molekyylipainoa. Testinäytteen kromatogrammipiikin spesifinen tunnistusprosessi (kuva 1) on seuraava.

2.7.1 Kromatografisen piikin tunnistus 1

Kromatografisen piikin 1 retentioaika on 16,67 minuuttia. Positiivisessa ionimoodissa eksimeeri-ionin huippu m/z365 annetaan muodossa [M+Na]+, kun taas negatiivisessa ionimoodissa eksimeeri-ionihuippu m/z387 [M+COOH] - annetaan. Piikin 1 suhteelliseksi molekyylipainoksi määritetään 342. Esitetään myös fragmentti-ioni m/z179, joka on peräisin 1 glukoosimolekyylin, 163 D, häviämisestä glykosidisidoksen katkeamisen vuoksi. Retentioajan ja vertailuaineen suhteellisen molekyylipainon mukaan kromatografinen piikki 1 tunnistettiin havupuuksi.

2.7.2 Kromatografisen piikin tunnistus 2

Kromatografisen piikin 2 retentioaika on 17,36 minuuttia. Negatiivinen ionimoodissa annetaan eksimeeri-ionihuiput m/z357 [M – H] -, 393 [M+Cl] - ja piikin 2 suhteelliseksi molekyylipainoksi määritetään 358. Samalla fragmentti-ioni m/z195 johdetaan 16 glukoosimolekyylin menetyksestä, joka johtuu 16 hajoavasta glykoosista. Kromatografinen piikki 2 tunnistettiin demetyylisyringiiniksi viiteaineen retentioajan ja suhteellisen molekyylipainon mukaan.

2.7.3 Kromatografisen piikin tunnistus 3

Kromatografisen piikin 3 retentioaika on 19,04 min, eksimeeri-ionihuippu m/z395 [M+Na] on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionihuippu m/z417 [M+HCOO] - negatiivisessa ionimoodissa ja fragmentin 3 suhteelliseksi molekyylipainoksi määritetään ionin 3 ajalla 7. m/z209 on peräisin 1 glukoosimolekyylin, 163 Da, häviämisestä glykosidisidoksen katkeamisen vuoksi. Kromatografinen piikki 3 tunnistettiin syringiiniksi viiteaineen retentioajan ja suhteellisen molekyylipainon mukaan.

2.7.4 Kromatografisen piikin tunnistus 4

Kromatografisen piikin 4 retentioaika on 27,66 min. Eksimeeri-ionihuippu m/z804 [M+NH4] annetaan positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionin huippu m/z785 [M–H] - negatiivisessa ionimoodissa. Piikin 4 suhteelliseksi molekyylipainoksi määritetään 786. Samanaikaisesti fragmentti-ioni m/z623 on johdettu yhden kofeiinimolekyylin, 163 Da, esterisidoksen katkaisemisesta. Yhdessä viiteaineen retentioajan ja suhteellisen molekyylipainon kanssa kromatografinen piikki 4 tunnistettiin echinaceaksi.

2.7.5 Kromatografisen piikin tunnistus 5

Kromatografisen piikin 5 retentioaika on 31,48 min, eksimeeri-ionihuippu m/z818 [M+NH4 on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionihuippu m/z799 [M–H] - negatiivisessa ionimoodissa, ja piikin 5 suhteellinen molekyylipaino samassa ajassa 5, 6 määritetään ioniksi 7 m/z80. on peräisin yhden kofeiinimolekyylin, 163Da, esterisidoksen katkaisemisesta. Yhdistämällä viiteaineen retentioaika ja suhteellinen molekyylipaino vahvistettiin, että kromatografinen piikki 5 oli cistanche-glykosidi A.

Taulukko 1 39 standardiyhdisteen molekyylipaino ja retentioaika (tＲ)

2.7.6 Kromatografisen piikin tunnistus 6

Kromatografisen piikin 6 retentioaika on 34,17 minuuttia. Kaksi eksimeeri-ionihuippua m/z846642 [M+NH4] + on annettu positiivisessa ionimoodissa ja kaksi eksimeeri-ionihuippua m/z827623 [M–H] - myös negatiivisessa ionimoodissa. Spekuloidaan, että huippu 6 voi sisältää kaksi yhdistettä, joiden suhteellinen molekyylipaino on 828624. Samanaikaisesti fragmentti-ioni m/z665461 on peräisin 163 Da:n kofeiinimolekyylin esterisidoksen katkeamisesta ja fragmentti-ioni m/z622 on peräisin bond-asetyyliesteristä. Nämä kaksi yhdistettä eristettiin ja yhdistettiin viiteaineen retentioajan ja suhteellisen molekyylipainon kanssa; kromatografinen piikki 6 oli Cimicifugarinin ja antosyaniini A:n seos.

2.7.7 Kromatografisen piikin tunnistus 7

Kromatografisen piikin 7 retentioaika on 35,34 min. Eksimeeri-ionihuippu m/z832 [M+NH4]+, 837 [M+Na]+ on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionin piikki m/z813 [M–H] - negatiivisessa ionimoodissa, ja piikin 7 suhteellinen molekyylipaino on 814. Samalla m/z6 esterin katkeamisesta7 johdetaan m/z6. 1 ferulihappomolekyylin menetys, 177 Da. Yhdessä viiteaineen retentioajan ja suhteellisen molekyylipainon kanssa kromatografinen piikki 7 tunnistettiin cistanche-glykosidiksi B.

2.7.8 Kromatografisen piikin tunnistus 8

The retention time of chromatographic peak 8 is 36.17min, the excimer ion peak m/z647 [M+Na] is given in the positive ion mode, and the excimer ion peak m/z623 [M–H] - is given in the negative ion mode, and the relative molecular weight of peak 8 is determined to be 624. At the same time, the fragment ion m/z461 annetaan, joka on peräisin esterisidoksen katkeamisesta ja 1 molekyylin kofeiiniryhmästä, 163 Da, häviämisestä. Combined with the retention time and relative molecular weight of the reference substance, chromatographic peak 8 was identified as heterocoenoside.

2.7.9 Kromatografisen piikin tunnistus 9

Kromatografisen piikin 9 retentioaika on 38,20 minuuttia. Eksimeeri-ionihuiput m/z860 [M+NH4]+, 865 [M+Na] on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionihuiput m/z841 [M–H] -, 877 [M+Cl] - negatiivisessa ionimoodissa. Piikin 9 suhteelliseksi molekyylipainoksi määritetään 842. Samanaikaisesti fragmentti-ioni m/z679636 on johdettu esterisidoksen katkaisemisesta 1 molekyylissä kofeiinia, 163 Da, ja 1 molekyylissä asetyyliä, 43 Da. Vertailuaineen retentioaika ja suhteellinen molekyylipaino ovat yhdenmukaiset, ja tunnistuspiikki 9 on 2- 2'-asetyylikistansiglykosidi A.

2.7.10 Kroman tunnistaminentoografinen seak 10

Kromatografisen piikin 10 retentioaika on 39,04 minuuttia. Eksimeeri-ionihuippu m/z656 [M+NH4]+, 661 [M+Na] on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionihuippu m/z637 [M–H] -, 673 [M+Cl] - negatiivisessa ionimoodissa. Piikin 10 suhteelliseksi molekyylipainoksi määritetään 638. Samanaikaisesti fragmentti-ioni m/z475 on johdettu yhden kofeiinimolekyylin, 163 Da, esterisidoksen katkeamisesta. Vertailuaineen retentioaika ja suhteellinen molekyylipaino ovat yhdenmukaiset, ja tunnistuspiikki 10 on Cistanche C.

2.7.11 Kromatografisen piikin 11 tunnistaminen

Kromatografisen piikin 11 retentioaika on 40,82 min. Eksimeeri-ionihuippu m/z661 [M+Na]+, 677 [M+K + on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionin huippu m/z637 [M–H] -, 673 [M+Cl] - negatiivisessa ionimoodissa. Voidaan määrittää, että piikin 11 suhteellinen molekyylipaino on 638. Samanaikaisesti fragmentti-ioni m/z475 on johdettu yhden kofeiinimolekyylin, 163 Da, esterisidoksen katkaisemisesta. Yhdistämällä viiteaineen retentioaika ja suhteellinen molekyylipaino, kromatografinen piikki 11 tunnistettiin isosistaaniglykosidiksi C.

2.7.12 Kromatografisen piikin 12 tunnistaminen

Kromatografisen piikin 12 retentioaika on 41,48 min. Eksimeeri-ionin huippu m/z684 [M+NH4]+, 689 [M+Na + on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionin huippu m/z665 [M–H] - negatiivisessa ionimoodissa. Voidaan määrittää, että piikin 12 suhteellinen molekyylipaino on 666. Samanaikaisesti osoitetaan, että fragmentti-ioni m/z503460 tulee esterisidoksen katkeamisesta 1 molekyylissä kofeiinia, 163 Da, ja 1 molekyylissä asetyyliä, 43 Da. Retentioajan ja vertailuaineen suhteellisen molekyylipainon mukaan kromatografinen piikki 12 tunnistettiin a2'-asetylyyliceliaosidiksi.

Cistanche deserticola -koe

2.7.13 Kromatografisen piikin 13 tunnistaminen

Kromatografisen piikin 13 retentioaika on 44,29 min, eksimeeri-ionihuippu m/z689 [M+Na] on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionihuippu m/z665 [M–H] - negatiivisessa ionimoodissa, ja piikin 13 suhteellinen molekyylipaino on sama, kun 66 ioni on samassa ajassa. m/z503460 tulee yhden kofeiinimolekyylin (163 Da) ja 1 asetyylimolekyylin (43 Da) esterisidoksen katkeamisesta. Yhdessä viiteaineen retentioajan ja suhteellisen molekyylipainon kanssa kromatografinen piikki 13 tunnistettiin antosyaniini B:ksi.

2.7.14 Kromatografisen piikin 14 tunnistaminen

Kromatografisen piikin 14 retentioaika on 46,67 min. Eksimeeri-ionin huippu m/z675 [M+Na] annetaan positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionin huippu m/z651 [M–H] - negatiivisessa ionimoodissa. Piikin 14 suhteellinen molekyylipaino on 652. Samanaikaisesti fragmentti-ioni m/z475 on johdettu ferulihapporyhmän 177Da-molekyylin esterisidoksen katkaisemisesta. Yhdessä viiteaineen retentioajan ja suhteellisen molekyylipainon kanssa kromatografinen piikki 14 tunnistettiin epimeridinosidiksi A.

2.7.15 Kromatografisen piikin 15 tunnistaminen

Kromatografisen piikin 15 retentioaika on 49,90 min. Eksimeeri-ionin piikki m/z698 [M+NH4]+, 703 [M+Na + on annettu positiivisessa ionimoodissa ja eksimeeri-ionin huippu m/z679 [M–H] -, 715 [M+Cl] - negatiivisessa ionimoodissa. Piikin 15 suhteellinen molekyylipaino on 680. Samanaikaisesti fragmentti-ioni m/z517474 on johdettu esterisidoksen katkaisemisesta 1 molekyylissä kofeiinia, 163 Da, ja 1 molekyylissä asetyyliä, 43 Da. Kromatografinen piikki 15 tunnistettiin kiistanklykosidiksi K perustuen viiteaineen retentioaikaan ja suhteelliseen molekyylipainoon.

2.7.16 Kromatografisen piikin 16 tunnistaminen

Kromatografisen piikin 16 retentioaika on 55,36 minuuttia. Positiivisessa ionimoodissa annetaan eksimeeri-ionin huippu m/z717 [M+N, kun taas negatiivisessa ionimoodissa eksimeeri-ionihuiput m/z693 [M–H] -, 729 [M+Cl] -, jolloin piikin 16 suhteellinen molekyylipaino on 694. Samalla esitetään, että fragmentti5 on ionista5 7, esterisidoksen katkaisuhäviö 1 ferulihapporyhmän molekyylistä, 177 Da, ja 1 molekyylistä asetyyliryhmästä, 43 Da. Yhdessä viiteaineen retentioajan ja suhteellisen molekyylipainon kanssa kromatografinen piikki 16 tunnistettiin cistanche-glykosidiksi J. Cistanche deserticolan 60-prosenttisen metanoliuutteen kromatografiset piikit tunnistettiin HPLC-MS:llä yhdistettynä erotetun vertailuaineen suhteelliseen molekyylipainoon, retentioaikaan ja fragmentti-ioniin. Tulokset osoittivat, että 16 kromatografisen piikin 17 komponenttia tunnistettiin tarkasti (taulukko 2).

Taulukko 2: Cistanches Herban ja vertailustandardiyhdisteiden tunnistetut kromatografiset piikit

3  . Keskustelu

3.1 Testituotteen valmistusmenetelmän valinta

Tämän tutkimuksen päätarkoituksena on tunnistaa Cistanche deserticolan HPLC-piikit. Siksi uuttoliuottimen ja uuttomenetelmän valinta perustuu kykyyn saada lisää HPLC-piikkejä. Tutkimusryhmä on tehnyt pitkäaikaista Cistanche deserticola -tutkimusta ja tehnyt paljon työtä laatuanalyysin parissa. Tässä artikkelissa Cistanche deserticolan uuttoliuotin ja uuttomenetelmä valittiin myös tutkimusryhmän aiemman analyysityön ja Kiinan farmakopean (2015 painos) perusteella. Lopuksi uuttomenetelmäksi valittiin 60-prosenttinen metanoli-ultraääniuutto 40 minuutin ajan.

3.2 HPLC-MS-olosuhteiden valinta

Tässä artikkelissa kromatografisen kolonnin valinta perustuu Cistanche deserticolan laatuanalyysiin tutkimusryhmän alkuvaiheessa sekä AgilentZORBAXEclipsePlusC18 (4,6mm × 250mm,5 μm), DionexC18 (4,6mm × 250mm,5 μmm × 5 μ5 m), μ m) Kromatografiakolonni, valitse lopuksi AgilentZORBAXEclipsePlusC18-kromatografinen kolonni (4,6 mm × 250 mm, 5 μm) Sillä on hyvä erotusvaikutus Cistanche deserticolaan; 39 vertailuainetta sisältävät fenyylietanoidin, lignaanit ja fenyylipropanoidin, joten havaitsemisaallonpituus on 254 nm; Samalla tutkittiin liikkuvan faasin, kuten metanoli-vesi, asetonitriili-vesi, metanoli-0,1 % fosforihappovesi, asetonitriili-0,1 % muurahaishappovesi, vaikutuksia kromatografiseen erotukseen ja massaspektrometriseen detektioon ja lopuksi valittiin asetonitriili-0,1 % muurahaishappovedeksi.

3.3 Yhteenveto

Tässä tutkimuksessa luotu menetelmä tunnisti tarkasti 17 komponenttia 60 % metanolin 16 kromatografisesta huipusta.ote/Cistanche deserticola.

Tutkimustuloksilla ei ole vain tietty viitearvo lääkemateriaalin laadun jatkoanalyysille, vaan niillä voidaan välttää toistuva työ lääkeaineen tunnettujen yhdisteiden rakennetunnistuksessa. Yleensä tunnistettuja kromatografisia huippuja on kuitenkin suhteellisen vähän, ja monia kromatografisia huippuja ei ole tunnistettu, koska niitä ei ole osoitettu vertailuaineelle. Useimmat tunnistetut komponentit ovat fenyylietanoidiglykosideja, kun taas lignaanit ovat harvinaisia. Tämä voi johtua siitä, että Kiinan farmakopean vuoden 2015 painoksessa viitattu uuttomenetelmä on suunnattu pääasiassa fenyylietanoidiglykosideille tai siitä, että tämän lääkeaineen uutteessa on liian korkea ekinakosidi- ja koliformisten yhdisteiden pitoisuus, mikä vaikeuttaa muiden vähäpitoisten yhdisteiden havaitsemista. Erityisiä syitä on selvennettävä.

[Referenssit]

[1] Toimituskomitea Flora of China. Kiinan kasvisto [M]. Peking: Science Press, 1990: 86

[2] Yang Junshan. Aavikon ginseng -- Cistanche deserticola [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46( 12): 881.

[3] Tu Pengfei, Jiang Yong, Guo Yuhai ym. Tutkimus Cistanche deserticolasta ja sen teollisesta kehityksestä[J]. Chinese Journal of Pharmacy, 2011, 46 (12): 882-887

[4]Kansallinen farmakopeakomissio. Kiinan kansantasavallan farmakopea. Osa I [M]Peking: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015: 135

[5] JIANG Y, TU PF. Kemiallisten aineosien analyysi Cistanche-lajeissa ［J］． J Chromatogr A, 2009, 1216 (11): 1970-1979.

[6] PAN J, YUAN CS, LIN CJ, et al. Luonnollisten fenyylipropanoidiglykosidien farmakologiset vaikutukset ja mekanismit［J］． Pharmazie, 2003, 58( 11): 767-775.

[7] FU GM, PANG HH, Wong Y. Luonnossa esiintyvät fenyylietanoidiglykosidit: mahdollisia johtolankoja uusille lääkkeille［J］． Curr Med Chem, 2008, 15 (25): 2592-2613.

[8] Rhode Mei, Long Mei, Du Wenjing, et ai. Cistanche deserticola -uutteen osteoporoosin vastaisen vaikutuksen mekanismi M KOOPG -hiirillä ［ J ］. Chinese experiment Journal of Prescriptions, 2016, 22 (10): 138-142

[9] Ma Hui, Yin Ruoxi, Guo Min, et ai. Cistanche deserticola -polysakkaridin vaikutus D-galaktoosin aiheuttamaan ikääntymiseen. CREB-ilmentymisen vaikutus vanhan mallin hiirissä ［ J ］. Chinese Experimental Prescriptions Journal, 2014, 20 (20): 137-141

[10] Tao Yicun, Li Jianying, Xu Yonghua et al. Cistanche deserticolan fenyylietanosidin vaikutukset rotille: Korkean merenpinnan keuhkopöhön ehkäisy ja hoito ［ J ］. Chinese Journal of Experimental Prescriptions, 2014, 20( 15): 134-138.

[11] Zhou Haitao, Cao Jianmin, Lin Qiang. Cistanche deserticola rottien uupuneesta uintikyvystä ja sydänlihaksen mitokondrioiden antioksidanttikapasiteetista ［ J ］. Kiinalainen kokeellinen kaava Journal of Science, 2012, 18 (6): 229-233

[12] NAN ZD, ZHAO MB, ZENG KW jne. Anti-inflammatoriset iridoidit Tarimin autiomaassa viljellyn Cistanche deserticolan varresta ［J］． Chin J Nat Med, 2016, 14(1): 61-65.

[13] NAN ZD, ZENG KW, SHI SP jne. Tarimin autiomaassa viljellyn Cistanche deserticolan varresta peräisin olevat fenyylietanoidiglykosidit, joilla on tulehdusta ehkäiseviä vaikutuksia ［J］． Fitoterapia,2013,89: 167-174.

[14] Nan Zedong, Zhao Mingbo, Jiang Yong ym. Tazhongissa viljellyn autiomaahan kemia: Koostumustutkimus ［ J ］. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2013, 38 (16): 2665-2670.

[15] Nan Zedong, Zhao Mingbo, Jiang Yong ym.Lignans [J]. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2015, 40 (3): 463-468.