CD8- ja CD4-T-solupopulaatiot ihmisen munuaisissa

edmund.chen@wecistanche.com

Abstrakti:Tausta: Raja-alueilla ja sisäelimissä kudoksissa asuvat muisti-T-solut (TRM) vaikuttavat immuuniesteeseen patogeenejä, kuten viruksia, bakteereja, sieniä ja syöpää vastaan. Tietoa näiden solujen läsnäolosta ja toiminnasta ihmisen munuaisissa on kuitenkin vähän. Ymmärtääksemme paremmin T-soluvälitteistä immunologista puolustusta tässä elimessä pyrimme määrittämään terveissä ja allograftissa esiintyvien CD8- ja CD4-T-solujen fenotyyppiset ja toiminnalliset näkökohdat.munuainen kudosta. Menetelmät: Arvioimme T-solujen fenotyypin ja toiminnan terveissä munuaiskudosnäytteissä (n=5) käyttämällä monikanavaista stipendiaattisytometriaa.munuainenallograftikudos (n=7) ja vertasi näitä näkökohtia T-soluihin perifeerisessä veressä terveistä kontrolleista (n=13). Tulokset:Munuainenkudosnäytteet sisälsivät huomattavia määriä CD8- ja CD4-T-soluja. Toisin kuin kiertävät solut,munuainenT-solut ilmensivät usein CD69:ää ja CD103:a ja pyöräilivät useammin aktiivisemmin. Lisäksi lähes kaikkimunuainenT-solut ilmensivät CXCR3:a ja ilmensivät usein CXCR6:ta verrattuna T-soluihin verenkierrossa. Selvästi,munuainenT-solut tuottivat suurempia määriä IFN:ää kuin kiertävät solut ja olivat usein polyfunktionaalisia. Johtopäätös: Funktionaaliset T-solut, joilla on TRM:lle ominaiset piirteet, sijaitsevat ihmisessämunuainenkudoksia. Nämä solut kiertävät useammin aktiivisesti ja ilmentävät usein CXCR3:a ja CXCR6:ta.

Avainsanat:kudoksessa asuvat lymfosyytit; T-solut; CD8; CD4; CD69; CD103; munuaiset; allograft

CISTANCHE PARANTAA MUNUAIS-/munuaissairauksia

1. EsittelyResident memory T -solut (TRM) säilyvät kudoksissa tarjotakseen pitkäaikaisen paikallisen suojan taudinaiheuttajia vastaan. Toisin kuin kierrättävät T-solut, TRM-populaatioita ei voida havaita ääreisverestä, ja ne eroavat merkittävästi kiertävistä T-solupopulaatioista fenotyypin, toiminnan ja aineenvaihdunnan suhteen [1]. Tämä ei todellakaan ole yllättävää, kun otetaan huomioon se tosiasia, että eri elinjärjestelmät, kuten keuhkot, altistuvat suuremmille eri patogeenien kuormituksille kuin verenkierto, joka on yleensä eristetty ulkomaailmasta [2].TkM:n retentio kudoksissa säilyy vuosia, ja sitä välittävät mekanismit, joihin liittyy sfingosiini-1-fosfaattireseptori1 (S1PR1)-sfingosiini1-fosfaatti (SP1) -akseli. S1PR1 on T-solujen ekspressoima reseptori, joka välittää ulostuloa sekundaarisista imusoluelimistä sitoutuessaan bioaktiiviseen signalointimolekyyliin SP1, joka on tärkeä T-solukaupan välittäjä. Tämän akselin voi keskeyttää CD69, kalvoon sitoutunut c-tyypin lektiini, joka antagonisoi S1PR1-ekspressiota ja välittää siten retentiota. Lisäksi hiirissä S1PR1:n ilmentymistä indusoi transkriptiotekijä Krüppel-like Factor 2 (KLF2), jonka todettiin vähentyneen TRM:ssä, mikä myös estää lymfosyyttien poistumista [3]. KLF2:n alasäätelyn osoitettiin puolestaan ​​välittävän Blimplin transkriptiotekijähomologin T-soluissa (Hobit), joka ekspressoituu TpM-spesifisellä tavalla hiiren T-soluissa [4]. Lisäksi osa TRM:stä ilmentää myös CD103:a (integriini E), jolloin TRM voidaan tunnistaa käyttämällä CD69- ja CD103-ilmentymistä [1].

Vaikka tieto TRM-fenotyypistä ja -toiminnasta lisääntyy eri ihmiskudosten osalta, näistä näkökohdista tiedetään vain vähänmunuainen. Täällä T-solut altistuvat erillisille patogeeneille, kuten alemmista virtsateistä nouseville bakteereille ja renotrooppisille viruksille, kuten polyomavirus BK (BKPyV). Kuvasimmekin äskettäin, kuinka ihmisen munuaiset sisältävät T-solujen alajoukon, jotka ekspressoivat CD69:ää ja/tai CD103:a, joiden joukossa on CD8 T-soluja, jotka kohdistuvat spesifisesti BKPyV-proteiineihin virioniproteiini 1 (VP1) ja suuri T-antigeeni (LTAG) -proteiini [5]. Me ja muut osoitimme myös limakalvoon liittyvien invarianttien T (MAIT)-solujen esiintymisen CD69/CD{7}}munuainenkudos [6,7].

Ymmärtääksemme paremmin, millaiset T-solut muodostavat paikallisen immuunivasteen tässä elimessä, käytimme monikanavaista virtaussytometriaa tutkiaksemme sen fenotyyppiä ja toimintaa.munuainenTRM:t, eristetty luovuttajastamunuainenmunuaisensiirron saajien (RTR:t) ja terveiden henkilöiden materiaaliamunuainenmunuaiskirkkaiden solukarsinoomien viereistä kudosta nähdäksesi, miten nämä populaatiot verrataan verenkierrossa oleviin T-solupopulaatioihin.Löysimme sen ihmisenmunuainenkudoksessa on huomattavia määriä CD4- ja CD8-T-soluja, jotka ilmentävät vain CD69:ää, CD69:ää ja CD103:a tai ei mitään näistä markkereista. Huomasimme, että CD69-CD103- solutmunuainenkudos eroaa olennaisesti T-soluista verenkierrossa ja voi edustaa TRM-populaatiota, josta puuttuu kanoniset TRM-markkerit. Lisäksi osoitamme, että munuaisten T-solut kiertävät useammin aktiivisemmin Ki-67:n lisääntyneen ilmentymisen perusteella verrattuna vereen. Huomasimme myös, että CD8- ja CD4-T-solut sisällämunuainenkudos ilmentää lähes aina CXCR3:a ja usein ekspressoi CXCR6:ta. Nämä havainnot viittaavat näiden kemokiinireseptorien rooliin munuaisissa asuvien muisti-T-solupopulaatioiden houkuttelemisessa ja ylläpidossa.

2. Materiaalit ja metodit

2.1. Potilaat ja näytteetNäytteet saatiin Biobank Renal Diseasesista Amsterdamin UMC:n toimipaikasta AMC. Tässä Biopankissa potilasnäytteet, kuten veri- jamunuainenkudosta, kerätään ja varastoidaan terveellisistä elämäntavoistamunuainenluovuttajat ja RTR:t, joita seurataan ennen munuaisensiirtoa ja sen jälkeen. Tämä tutkimus tehtiin Helsingin ja Istanbulin julistuksissa esitettyjen periaatteiden mukaisesti ja kaikki osallistujat antoivat kirjallisen tietoisen suostumuksen ennen Biopankkiin ilmoittautumista. Lisäksi patologian osasto lahjoitti jäännöskudosta potilailta, joille tehtiin tuumorin nefrektomia (munuaiskudos, joka on kaukana kasvaimesta), ja se säilytettiin myös Biopankkiin. Näitä kudoksia käsiteltiin anonyymisti Federation of Dutch Medical Scientific Societies' Code of Conduct (Human Tissue and Medical Research: Code of Conduct for Responsible Use, 2011 www.federa.org) mukaisesti.

2.2. Perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMC:t)Verinäytteet otettiin sytomegaloviruksen (CMV) seronegatiivisilta terveiltä kontrolleilta (eläviltämunuainenluovuttajat ennen leikkausta, n= 13). Tämän tutkimuksen osallistujien ominaisuudet on esitetty taulukossa 1. PBMC:t eristettiin natriumhepariiniverestä standarditiheysgradienttisentrifugoinnilla ja sen jälkeen kylmäsäilytettiin analyysipäivään asti.

2.3. MunuaiskudosTerveet munuaiskudosnäytteet (n {{0}}) saatiin munuaisista, jotka poistettiin kirurgisesti munuaissyövän (kaukainen ei-kasvainkudos munuaisen kontralateraalisesta navasta) ja munuaissiirteen (n {{1) vuoksi. }}) saatiin eksplantoiduista munuaisallografteista transplantaation epäonnistumisen jälkeen. Näihin näytteisiin viitataan vastaavasti terveinä munuaisnäytteinä ja siirrännäisnäytteinä. Munuaiskuoren viipaleet leikattiin 1- mm:n kuutioiksi McElwain Tissue Chopperilla (Ted Pella, Redding, CA, USA), siirrettiin 50 ml:n putkiin ja pestiin kylmällä PBS:llä, kunnes verta ei tullut näkyvästi läsnä ja supernatantti oli kirkas. Esilämmitetty (37 astetta) digestioväliaine lisättiin, 40 ml 10 g kudosta kohti (DNAse Type IV (50 KU/ml) (Sigma Aldrich, Zwiindrecht, Alankomaat), kollagenaasi tyyppi IV (0,5 mg/ml) (Worthington Biochemical, Lakewood, NJ, USA), BSA (60 mg/ml) (Sigma Aldrich), 20 ul/ml vasikan sikiön seerumia (FCS, VWR International BV, Amsterdam, Alankomaat), TRIS (0,025 M) (Merck BV, Amsterdam, Alankomaat), penisilliini-streptomysiini (Biochrom GMBH, Berliini, Saksa) HBSS:ssä (Westburg BV, Leusden, Alankomaat)) ja inkuboitiin ravistimessa 20 minuuttia 37 asteessa. Lämmin suspensio siirrettiin C-putkeen (Miltenvi, Bergisch Gladbach, Saksa) ja sille suoritettiin M_spleen_04.01-ohjelma GentleMacsissa (Miltenyi). Digestointialusta deaktivoitiin kylmällä PBS:llä ja saatu solususpensio vietiin solusiivilä läpi, jolloin saatiin yksisoluinen suspensio, jolle suoritettiin standarditiheysgradienttisentrifugointi valmistajan ohjeiden mukaisesti (Lymphoprep, Abbott Diagnostics Technologies AS, Oslo, Norja). ). Eristetyt mononukleaariset solut (munuaisen MNC:t) olivatkylmäsäilytetty analyysipäivään asti IMDM:ssä, johon oli lisätty 20 % FCS, 000036 tilavuus/tilavuus- merkaptoetanoli, 5 % DMSO, penisilliini ja streptomysiini.

2.4. VirtaussytometriaMittaukset suoritettiin LSRFortessa-virtaussytometrillä (BD Biosciences). Jokaiselle näytteelle analysoitiin 2 × 106 PBMC:tä tai 0,5 × 106 - 106 × 106 munuaisen MNC:tä. Kunkin värjäysreaktion tilavuus oli suhteessa solujen lukumäärään ja vasta-ainepitoisuudet pysyivät vakioina. Soluja inkuboitiin pintavasta-aineiden kanssa (lisätaulukko S1) 30 minuuttia 4 asteessa pimeässä. Kuolleet solut suljettiin pois käyttämällä kiinnitettävää elinkykyistä väriainetta eFluor455UV (eBioscience Inc., Thermo Fisher Scientific, San Diego, CA, USA). Monoklonaaliset vasta-aineet, joissa oli solunsisäisiä kohteita (lisätaulukko S1), lisättiin sen jälkeen, kun solut oli kiinnitetty ja permeabilisoitu käyttämällä FoxP3/Transcription Factor Staining Setiä (eBioscience Inc.). Noudatettiin julkaistuja menetelmiä virtaussytometriaa ja solujen lajittelua varten immunologisia tarkoituksia varten [8]. Fenotyyppianalyysiin käytetty avainnusstrategia löytyy lisäkuvasta S1. Olemme aiemmin osoittaneet, että munuaisten MNC:iden eristämiseen käytetty digestiomenetelmä ei vaikuttanut mihinkään analysoiduista markkereista [7].

Kudosnäytteiden rajoitukset johtivat näytteiden poissulkemiseen verhopaneeleista. CD3 plus -solumäärät, jotka on analysoitu näytettä kohti terveissä PBMC:issä, terveissä munuaisten MNC:issä ja TX-munuaisissa, löytyvät kuvasta S3. MNC:t Näytteet analysoitiin vain, kun ne sisälsivät yli 50 prosenttia eläviä soluja lymfosyytissä elinkelpoisuus-dve:n perusteella, ja CD69/CD103-pohjaisia ​​T-solualaryhmiä karakterisoitiin edelleen vain, jos niiden kokonaissolumäärä ylitti 50.

CISTANCHE PARANTAA MUNUAIKAISTEN/MUUNAISTEN VAATTOA

2.5. StimulaatiomääritysPBMC ja munuaisten MNC stimuloitiin aiemmin kuvatulla tavalla [7,9]. PBMC:t ja munuaisten MNC:t sulatettiin DNAase I:n (200 KU/ml) läsnä ollessa, pestiin ja annettiin toipua yön yli käsittelemättömillä pyöreäpohjaisilla 96-kuoppalevyillä (Corning) viljelyalustassa (RPMI, jota oli täydennetty 10 % FCS ja penisilliini-streptomysiini) pitoisuudella 20 × 106/ml (100 μl/kuoppa).

Seuraavana aamuna lisättiin forboli-12-myristaatti13--asetaattia (PMA, 10 ng/ml; Sigma Aldrich) ja ionomysiiniä (1 ug/ml; Sigma Aldrich) solujen stimuloimiseksi. Pelkästään elatusaine lisättiin negatiiviseksi kontrolliksi. Kaikki inkubaatiot suoritettiin elatusaineessa CD28:n (klooni 15E8; 2 ug/ml), CD29:n (klooni TS 2/16; 1 ug/ml), brefeldiini A:n (10 ug/ml, Invitrogen) ja GolgiStopin ( BD Biosciences) lopullisessa tilavuudessa 200 ul 4 tunnin ajan 37 asteessa ja 5 prosentin CO2:ssa.

Sen jälkeen soluja inkuboitiin 30 minuuttia pintavasta-aineiden kanssa (lisätaulukko S2). Kuolleet solut suljettiin pois käyttämällä kiinnitettävää elinkykyistä väriainetta eFluor780 (bioscience Inc., Thermo Fisher Scientific, San Diego, CA, USA). Monoklonaaliset vasta-aineet solunsisäistä värjäystä varten (taulukko S1) lisättiin solujen kiinnittämisen ja permeabilisoinnin jälkeen käyttämällä Cytofix/Cytoperm-reagenssisarjaa (BD Biosciences). Solut pestiin kahdesti ja analysoitiin LSRFortessa-virtaussytometrillä. Funktionaalisessa analyysissä käytetty porttistrategia löytyy lisäkuvasta S2. Kunkin T-solualajoukon polyfunktionaalisuuden määrittämiseksi laskettiin kunkin populaation toimintojen keskimääräinen määrä käyttämällä seuraavaa kaavaa:((prosenttiosuus soluista, jotka tuottavat 1 sytokiinia]*1) plus ([prosenttiosuus soluista, jotka tuottavat 2 sytokiinia]*2) plus ([prosenttiosuus soluista, jotka tuottavat 3 sytokiinia]*3) plus ([prosenttiosuus soluista, jotka tuottavat 4 sytokiinia]*4) plus ([prosenttiosuus soluista, jotka tuottavat kaikkia 5 sytokiinia]*5))/100.

2.6.Tietojen analyysi

Tiedot analysoitiin käyttämällä FlowJo-versiota 10 (FlowJo, Ashland, OR, USA). Kaikki kaaviot ja kuviot luotiin Graphpad Prism -versiolla 8.00 Windowsille (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA). Samaa ohjelmaa käytettiin myös aineiston tilastollisiin analyyseihin. Ei-parametrista Mann-Whitney-U-testiä käytettiin määrittämään parittomien näytteiden merkitys. Parillisten näytteiden vertailuun käytettiin Wilcoxonin signed-rank-testiä. p-arvot<0.05 were="" considered="" statistically="">

3. Tulokset

3.1. T-solujen CD8:n ja/tai CD4:n ja kudosten asuinalueen markkerien selkeä ilmentyminen terveessä munuaiskudoksessaEnsin vertailimme CD3-positiivisten T-solujen CD4- ja CD8-ilmentymistä perifeerisestä verestä terveestä munuaiskudoksesta havaittuihin soluihin. CD4-CD8 plus (CD8) T-soluja havaittiin merkitsevästi useammin munuaiskudoksessa kuin veressä ((mediaani)25 prosenttia vs. 38 prosenttia )(kuvio la). Sitä vastoin CD4*CD{{9} }(CD4)T-soluja havaittiin korkeammalla tiheydellä veressä kuin munuaiskudoksessa ((70 prosenttia vs. 52 prosenttia) Kuva la). Kaiken kaikkiaan CD4 T-soluja havaittiin useammin terveessä munuaiskudoksessa kuin CD8 T-soluissa (kuvio 1b).

Seuraavaksi tutkimme kudosresidenssimarkkerien, CD69 ja CD103, ilmentymistä CD8- ja CD4--määritetyissä T-solualaryhmissä. Kuten odotettiin, perifeerisen veren solut eivät käytännössä ilmentäneet CD69:ää ja CD103:a (kuva 1c). Terveessä kudoksessa CD69-CD103-, CD69 plus CD103-, CD69tCD103 plus ja CD69-CD103 plus fenotyypit ilmenivät 46 prosentilla , 45 prosentilla 6,6 prosenttia ja 1,8 prosenttia CD8T-soluista, 61 prosenttia, 38 prosenttia, 0,44 prosenttia ja 0,43 prosenttia CD4T-soluista, vastaavasti (kuvio lc). Yhteenvetona voidaan todeta, että CD8-, mutta erityisesti CD4-T-soluja havaittiin huomattavia määriä terveestä ihmisen munuaiskudoksesta. Lisäksi CD69:n ja CD103:n, kudosresidenssimarkkereiden, ilmentyminen havaittiin ensisijaisesti T-soluista, joita löydettiin terveestä kudoksesta, ei verestä.

3.2. Erilaiset ilmaisumallit yhteisten osajoukkoa määrittävien markkerien T-solujen ja munuaiskudoksen mukaan

CD45RA, tyrosiinifosfataasi, CCR7, kemokiinireseptori, jonka tiedetään välittävän T-solujen kuljetusta sekundäärisiin imusoluelimiin, ja CD28 ja CD27, molemmat kostimulatoriset reseptorit, jotka osallistuvat voimakkaasti T-solujen aktivaatioon, ovat kaikki markkereita, joita perinteisesti käytetään tunnistamaan toiminnallisia T-solualaryhmiä J1{ {53}},1l. Halusimme selvittää, missä määrin näiden alaryhmien jakautuminen veressä eroaa jakautumisesta munuaiskudokseen. Kuten odotettiin, suurimmat verenkierrossa havaitut CD8 T-solujen alajoukot (eli ne, jotka koskevat vähintään 5 prosenttia koko populaatiosta) olivat CD45RA plus CCR7 plus CD28 plus CD27 plus (naiivit T-solut tai TN, ( mediaani) 13 prosenttia), CD45RA-CCR7 plus CD28 plus CD27 plus (keskusmuistin T-solut tai TcM, 6 prosenttia), CD45RA-CCR7-CD28 plus CD27 plus (TEv1,3{56}} prosenttia), CD45RA-CCR7-CD28 plus CD27-(Tau2,10 prosenttia ), CD45RA-CCR7-CD28-CD27*(TEy3,6 prosenttia ) , CD45RA-CCR7-CD28-CD27-(TM4,6 prosenttia )ja CD45RA plus CCR7-CD28-CD27-(TEMRA) ,10 prosenttia) fenotyyppi. Terveessä kudoksessa lähes yhtään (0,6 prosenttia) CD8-T-solua ei havaittu TN-fenotyypin kanssa ja vain muutamalla (0,8 prosenttia) oli Tax-fenotyyppi. Sitä vastoin terveestä munuaiskudoksesta havaitut CD8-T-solut koostuivat huomattavasta TEv1-(22 prosenttia), TEM2-(12 prosenttia), Tpx3-(18 prosenttia), TEx{ {65}} (23 prosenttia) ja TEyRA (11 prosenttia) T-solupopulaatiot (kuvio ld ja kuva S4). Tarkasteltaessa CD4 T-soluja veressä, suurimmat populaatiot olivat Ty-(35 prosenttia), TcM- (25 prosenttia), TEMl- (16 prosenttia), TFM2-(9 prosenttia) ja populaatio, jonka CD45RAtCCR7-}CD28 plus CD27* fenotyyppi (0,4 prosenttia) (0,4 prosenttia) (kuvio 1d ja kuva S4). Terveessä munuaiskudoksessa muutama CD4 T-solu ilmensi TN- (3 prosenttia ) tai TcM:tä -(3 prosenttia) fenotyyppi. Sen sijaan terveestä kudoksesta havaittiin huomattava määrä soluja, joilla oli TEM1-(22 prosenttia), TEM2-(40 prosenttia) tai TEM4(14 prosenttia) fenotyyppi (kuva ld ja kuva S4). . Yhteenvetona voidaan todeta, että CD45RA/CCR7/CD28/CD{101}}määriteltyjen CD8- ja CD4-T-solujen alaryhmien jakautuminen vaihtelee huomattavasti veren ja terveen munuaiskudoksen välillä.

3.3. CD8- ja CD4-T-solut terveessä ihmisen munuaiskudoksessa käsittävät useammin aktiivisesti pyöräileviä solujaSeuraavaksi tutkimme, onko sytotoksiselle efektori-muistiprofiilille tyypillisten markkerien ilmentymisessä eroja CD8- ja CD4-T-solupopulaatioiden välillä veressä ja munuaiskudoksessa. Ensin tarkastelimme T-box-transkriptiotekijöiden T-bet ja eomeso-dermin (Eomes) ilmentymistä. Nämä transkription säätelijät osallistuvat suoraan akuutin vaiheen efektorisolujen tuottamiseen, molekyylien, kuten interferoni-y:n ja grantsyymi B:n, ilmentymisen indusoimiseen ja sekundaaristen muistivasteiden synnyttämiseen. Kuten odotettiin, T-betin ilmentyminen oli yleistä verenkierron CD8 T-solujen joukossa (54 prosenttia), kun taas verenkierron CD4 T-solut ilmensivät harvoin tätä transkriptiotekijää (13 prosenttia). Mielenkiintoista on, että CD4-T-solujen T-bet-ilmentyminen oli merkittävästi korkeampi terveestä munuaiskudoksesta havaittujen T-solujen joukossa kuin verenkierrossa (53 prosenttia vs. 13 prosenttia). Jonkin verran ilmentymistä havaittiin myös usein verenkierron CD8 T-solujen joukossa (59 prosenttia), kun taas se oli jälleen harvinaista verenkierron CD4 T-solujen joukossa (15 prosenttia). Eomesin ilmentyminen oli kuitenkin yleisempää CD4 T-solujen joukossa munuaiskudoksessa (32 prosenttia) kuin veressä (kuvio 2a, b).

Seuraavaksi tutkimme grantsyymi B:n, seriiniproteaasin, ilmentymistä, jonka tiedetään välittävän apoptoosia sytotoksisten T-solujen injektion jälkeen sytoplasmaan. Aiempien raporttien mukaisesti T-bet:n ja grantsyymi B:n ilmentymistä havaittiin huomattavia määriä kiertävistä CD8-T-soluista (28 prosenttia). Sen ilmentyminen oli kuitenkin harvinaista kiertävien CD4 T-solujen joukossa (1 %). CD8 T-soluilla grantsyymi B:n ilmentyminen oli samanlaista munuaiskudoksessa ja verenkierrossa olevissa populaatioissa (28 prosenttia ys.23 prosenttia) (kuvio 2c). Mielenkiintoista on, että munuaisten CD4 T-soluissa havaitut korkeammat T-bet- ja Eomes-ilmentymistiheydet eivät vastanneet grantsyymi B:n korkeampaa ilmentymistiheyttä tässä osastossa (5 prosenttia). Tämän jälkeen tarkastelimme KLRGl:n, rinnakkaisinhiboivan reseptorin, jonka tiedetään ilmentävän pääasiassa sytotoksisten akuutin vaiheen efektorisolujen ja efektorimuistisolujen ilmentymistä. KLRG1 ekspressoitui usein kiertävissä CD8 T-soluissa (54 prosenttia), mutta ei CD4 T-soluissa ( 10 prosenttia). Anatomisten osastojen välillä ei havaittu eroja CD8- tai CD4-T-solujen KLRG1l-ilmentymisessä. Lopuksi tutkimme Ki-67:n, aktiivisesti kiertäviä soluja ilmaisevan markkerin, ilmentymistä. Aiempien havaintojen mukaisesti Ki-67-ilmentyminen kiertävien CD8- ja CD4-T-solujen joukossa oli harvinaista (1 prosentti ja 2 %). Mielenkiintoista on, että CD8 T-soluista, mutta erityisesti CD4 T-soluista, Ki-67-ilmentymistä havaittiin merkittävästi useammin T-soluissa munuaiskudoksessa (3 prosenttia ja 11 prosenttia, vastaavasti) (kuvio 2e). Yhteenvetona voidaan todeta, että CD4 T-soluja havaittiin terveessä ihmisen munuaiskudoksessa, mutta ei CD8 T-soluja tässä osastossa, useammin ilmentyneitä T-bet ja Homes. Tämä ei kuitenkaan johtanut grantsyymi B:n useampaan ilmentymiseen munuaisten CD4 T-soluissa. Lisäksi, vaikka kiertosolujen kokonaismäärät olivat alhaiset, munuaiskudos sisälsi merkittävästi aktiivisemmin kiertokulkuja CD8- ja CD4-T-soluja kuin verenkierto.

3.4. CD8- ja CD4-T-solut terveessä munuaiskudoksessa ovat lähes kaikki CXCR{4}}-asemassaTämän jälkeen etsimme eroja muiden markkerien ilmentymisessä, jotka ovat tyypillisiä ei välittömästi sytotoksisten muistisolujen verenkierrossa oleville populaatioille, kuten aiemmin osoitettiin kiertäville T-solupopulaatioille. Tarkastelimme ensin IL-7R:n ilmentymistä, joka ilmentyy pääasiassa naiiveissa ja varhain erilaistuneissa muistisoluissa verenkierrossa, missä se osallistuu homeostaattisen proliferaation ylläpitämiseen [10,12,13]. Perifeerisessä veressä IL-7Ra:ta ilmensivät usein CD8 T-solut (84 prosenttia) ja CD4 T-solut (98 prosenttia). CD8- ja CD4-T-solut terveessä munuaiskudoksessa ilmensivät tätä markkeria merkittävästi harvemmin kuin kiertävät T-solut (71 prosenttia ja 76 prosenttia, vastaavasti) (kuvio 2f).

Seuraavaksi tutkimme useiden muiden kemokiinireseptorien ilmentymistä. Mielenkiintoista on, että CXCR3, kemokiinireseptori, joka osallistuu T-solujen kuljetuksiin tulehtuneisiin kudoksiin[14-17], ilmentyi erittäin suuressa määrässä CD8- ja CD4-T-soluja munuaiskudoksessa(99). prosenttia ja 91 prosenttia, vastaavasti), ja merkittävästi harvemmin kiertävien T-solujen kautta (58 prosenttia ja 26 prosenttia, vastaavasti) (kuvio 2g). Lopuksi määritimme CXCR6:n ilmentymisen, jonka tiedetään olevan osallisena TRM-populaatioiden muodostumisessa [18-22]. Vaikka CXCR6 ilmentyi vain pienissä verenkierrossa olevien CD8 T-solujen populaatiossa (16 prosenttia), eivät käytännössä kiertävät CD4 T-solut. merkittävästi suurempi osuus CD8- ja CD4-T-soluista munuaiskudoksessa ilmensi tätä molekyyliä (40 prosenttia ja 40 prosenttia, vastaavasti) (kuvio 2h). Yhteenvetona voidaan todeta, että munuaisten CD8- ja T-solut ilmensivät merkitsevästi harvemmin markkereita, jotka liittyvät tyypillisesti ei heti erilaistuneeseen tilaan verenkierrossa, todennäköisesti-7Ra, CCR7, CD28 ja CD27, huomattavasti harvemmin kuin veressä. sitä vastoin munuaisten T-solut ilmensivät useammin CXCR6:ta ja melkein aina ekspressoivat CXCR3:a.

3.5. Terveen munuaisen ja allograft-T-solujen fenotyypin erot ovat vähäisiäSeuraavaksi halusimme tutkia, jäivätkö nämä löydökset seisomaan kudoksiin siirretyistä munuaisallografteista, jotka on saatu eri kliinisiin indikaatioihin (taulukko 1).Mitä tulee CD8- ja CD4-T-solujen lukumäärään terveessä ja allograftikudoksessa, eroja ei havaittu (kuvio 3a). Huomasimme kuitenkin merkityksettömän suuntauksen kohti enemmän CD4T-soluja ja vähemmän CD8T-soluja terveessä kudoksessa kuin allograftikudoksessa (kuva 3b). Lisäksi, kun tarkastellaan CD69/CD103expression ja CD45RA/CCR7/CD28/CD{11}}määriteltyjä alajoukkoja, CD69/CD{13}} tai CD45RA/CCR7/CD28/CD{17}} määritellyt alajoukot havaittiin CD8/CD4-fenotyypistä riippumatta (kuvio 3d ja kuva S5). Tutkiessamme sytotoksisille kiertäville T-soluille tyypillisimpien markkerien ekspressiotaajuuksia, emme löytäneet eroja T-betin, KLRG1:n tai grantsyymi B:n ilmentymisessä terveiden munuais- tai allograft-T-solujen välillä (kuvio 3a, gh). Huomasimme, että Eomesin ilmentymistä havaittiin harvemmin allograft-kudoksen CD4-T-soluissa kuin terveissä kudoksen T-soluissa (kuvio 3f). Muiden markkerien ilmentymisessä ei havaittu eroja. (Kuva 3-l ja kuva S5b-d). Yhteenvetona voidaan todeta, että lukuun ottamatta Eomien alhaisempaa ilmentymistiheyttä allograft-CD4-T-soluissa, solupopulaatiot eivät eronneet tutkimuspopulaatioiden välillä.

3.6. CD69-CD103-T-solut munuaiskudoksessa ovat erilaisia ​​kuin kiertävät solutOttaen huomioon terveestä munuaiskudoksesta ja munuaissiirrekudoksesta löytyneiden CD8- ja CD4-T-solujen samanlaisen fenotyyppisen koostumuksen, yhdistimme tiedot molemmista tutkimusryhmistä tutkiaksemme edelleen näiden solujen ominaisuuksia CD69- ja CD103-ilmentymisen mukaan. Koska CD69-CD103 plus -soluja havaittiin aina hyvin alhaisilla taajuuksilla(<50 events),="" we="" excluded="" these="" cells="" from="" further="" analyses.="">Ensin tutkimme eroja näissä alaryhmissä CD69/CD103:n yhteisilmentymisen mukaan munuaisten T-solupopulaatioissa (kuva 4 ja kuva S6). Mielenkiintoista on, että sekä CD8- että CD4-T-solujen kohdalla havaittiin merkittäviä eroja CD45RA/CCR7/CD28/CD{10}}määriteltyjen alajoukkojen jakautumisessa CD69-CD103-, CD69 ja CD{ {14}}ja CD69*CD103*-alajoukot. CD8-T-solujen osalta CD69-CD103--solut sisälsivät huomattavan TeyRA-solupopulaation (21 prosenttia), joka oli paljon pienempi CD69 plus CD103-- ja CD69 plus CD103 -alajoukoissa (5,8). prosenttia ja 2,2 prosenttia. Sen sijaan nämä jälkimmäiset populaatiot sisälsivät paljon suurempia TEy3- (13 prosenttia, 30 prosenttia ja 32 prosenttia) ja TEy4-alapopulaatioita (vastaavasti 8 prosenttia, 19 prosenttia ja 33 prosenttia). CD4 T-soluilla havaittiin vähän TEyRA-soluja CD69-CD103-, CD69*CD103- ja CD69 plus CD103* -alaryhmien joukossa (2,6 prosenttia, 0 prosenttia ja 1,7 prosenttia, vastaavasti). Sen sijaan näissä soluissa oli suuria TFw1- (26 prosenttia ,24 prosenttia ja 10 prosenttia) ja TEy2-soluja (vastaavasti 30 prosenttia, 46 prosenttia ja 27 prosenttia). CD69:n ja CD{58}}joukossa CD69*CD103*-solujen joukossa havaittiin paljon suurempi TEM4-alapopulaatio (vastaavasti 6 prosenttia, 11 prosenttia ja 34 prosenttia).

Ottaen huomioon nämä erot ja aiemman havainnon, jonka mukaan munuaisten T-solupopulaatiot käsittivät tuskin TN- ja TcM-soluja, tutkimme edelleen munuaiskudoksista löydettyjä CD{0}}CD103--soluja määrittääksemme, missä määrin nämä solut olivat ei vain kiertäviä soluja, jotka kulkevat munuaisten verenkierron läpi. Tätä varten verrasimme näitä soluja kiertäviin soluihin. CD69-CD103~solut munuaiskudoksessa erosivat merkittävästi verenkierrossa olevista: T-bet, Ki-67 ja CXCR3 ilmentyivät useammin munuaisten T-soluilla CD8/CD4-fenotyypistä riippumatta (kuva 5a-c). Sitä vastoin munuaisten CD69-CD103- T-solut ilmensivät IL-7R, CCR7, CD28 ja CD27 merkitsevästi harvemmin CD8/CD4-fenotyypistä riippumatta (kuvio 5d- g). CD69-CD103-CD4 T-solut munuaiskudoksessa ilmensivät KLRG1:tä merkittävästi useammin kuin veressä ja CD69-CD103-CD8 T-solut munuaiskudoksessa ilmensivät Eomeja merkittävästi useammin kuin veressä.

Seuraavaksi halusimme nähdä, kuinka CD69:n ja CD103:n yhteisilmentyminen vaikutti toiminnallisen potentiaalin markkereihin. Ensin tarkastelimme sytotoksiseen potentiaaliin liittyviä markkereita. Vaikka yksittäisten alapopulaatioiden välillä havaittiin eroja, T-betille ja Eomeille ei havaittu seurannaiskuvioita CD8 T-soluissa, kun CD69 tai CD103 ekspressoitiin samanaikaisesti (kuvio 6a, b). Sitä vastoin CD4 T-soluissa nämä transkriptiotekijät lisääntyivät yhdessä CD69:n ja CD103:n yhteisekspressio (kuvio 6a, b). Kun tarkastelemme KLRG1:tä, huomasimme, että CD8 T-soluilla KLRG1:n ilmentyminen väheni yhdessä CD69/CD103:n rinnakkaisekspression kanssa. CD4 T-soluilla havaittiin samanlainen suuntaus. Tässä kuitenkin vain CD69-CD103-solut ilmensivät KLRG1:tä useammin kuin CD69 plus CD103- ja CD69 plus CD103* -solut (kuva 6c). Grantsyymi B:n ilmentymistiheydet laskivat myös yhdessä kudosresidenssimarkkerien kanssa, ja sen ilmentymistiheys oli alhaisin CD69- ja CD103*-solujen joukossa sekä CD8- että CD4-T-soluissa (kuvio 6d). Ki-67:n ilmentyminen, joka oli korkeampi munuaisten T-soluissa verrattuna veren T-soluihin, ei eronnut CD69:n tai CD103:n yhteisilmentymisen mukaan (kuvio 6e).

Sitten tutkimme markkereita, jotka normaalisti liittyvät ei-sytotoksiseen muistiprofiiliin CD69/CD103-yhteisilmentymisen mukaisesti. IL-7Ra:n, CCR7:n ja CD28:n ilmentyminen oli korkein CD69-CD103--populaatioissa, ja ilmentymissuuntaus ja CD69/CD103:n rinnakkaisilmentyminen tapahtuivat (kuva 6f-h). ). Sitten tarkastelimme CXCR3:n ja CXCR6:n ilmentymistä. CD69tCD103t-solut ilmensivät useimmiten molempia kemokiinireseptoreita CD8/CD4-fenotyypistä riippumatta, ja ne osoittivat nousevaa suuntausta CD69/CD103:n yhteisilmentyessä. Vain CXCR6:lla tämä suuntaus oli tilastollisesti merkitsevä, ja se vaikutti sekä CD8- että CD4 Tellsiin (kuvio 6j,k). Yhteenvetona voidaan todeta, että munuaiskudoksessa olevat CD69-CD103--solut eroavat olennaisesti verenkierrossa olevista soluista ja voivat koskea toista TBv-populaatiota, jolla ei ole CD69- tai CD103-ilmentymistä. Ainoa markkeri, joka erosi johdonmukaisesti CD8/CD4-fenotyypistä riippumatta CD69:n ja CD103:n yhteisekspression suhteen, oli CXCR6.

3.7. T-solut munuaiskudoksessa tuottavat useammin interferonia kuin T-soluja veressäLopuksi tutkimme sytokiinien tuotantokapasiteettia CD8/CD4-määriteltyjen T-solupopulaatioiden avulla munuaiskudoksessa. Ensin vertailimme interferoni-y:n (IFNy), tuumorinekroositekijän (TNF), interleukiinin-2 (IL-2), granulosyytti-makrofagipesäkkeitä stimuloivan tekijän (GM-CSF) ja IL-17 stimuloiduilla CD8/CD4-määritellyillä T-solupopulaatioilla, jotka löytyvät verestä terveen munuaiskudokseen (kuvio 7a-e). Mielenkiintoista on, että vain IFNy ekspressoitui johdonmukaisesti suuremmalla osuudella T-soluja terveessä munuaiskudoksessa verrattuna veren T-soluihin CD8/CD4-fenotyypistä riippumatta (kuvio 7a). Erot havaittiin myös yksittäisten alaryhmien tasolla. Tarkemmin sanottuna CD4 T-solut tuottivat TNF:ää ja GM-CSF:ää useammin munuaiskudoksessa (kuvio 7b.c). Mitä tulee polyfunktionaalisuuteen (eli samanaikaisesti tuotettujen sytokiinien lukumäärään), munuaiskudoksessa olevien CD4 T-solujen havaittiin olevan polyfunktionaalisempia kuin veren CD4-solut (kuvio 7f).

Seuraavaksi tarkastelimme eroja sytokiinien tuotantokapasiteetissa terveiden ja allograftikudoksen stimuloitujen T-solujen välillä. Terveistä tai allograftista munuaiskudoksesta peräisin olevien T-solujen välillä ei havaittu eroja yksittäisten sytokiinien tai useiden samanaikaisesti tuotettujen sytokiinien tuotannossa (kuva S7). Koska CD69 ilmentyy T-soluja stimuloitaessa, tutkimme vain eroa CD103-negatiivisten ja CD103--ilmentävien CD4- ja CD8-T-solujen välillä (kuva 7g-). Verrattaessa CD103:a ilmentäviä CD4- ja CD8-T-soluja soluihin, jotka eivät ekspressoi CD103:a munuaiskudoksessa, havaitsimme, että CD8- ja CD4-CD103-solut ilmensivät enemmän IFNy:tä kuin CD{15}}-solut (kuvio 7g). Lisäksi, vaikka IL-1ZA:ta tuottavia soluja oli vähän munuaiskudoksessa olevien CD103- ja CD8- ja CD4-T-solujen joukossa, niitä havaittiin jatkuvasti useammin tässä populaatiossa verrattuna CD{22}}-populaatioon. Yhteenvetona voidaan todeta, että enemmän T'-soluja munuaiskudoksessa tuotti IFNy:tä verrattuna kiertäviin T-soluihin CD8/CD4-fenotyypistä riippumatta. Todellakin, suurin prosenttiosuus IFNy:tä tuottavista soluista havaittiin CD103-CD4- ja CD8-munuaisperäisten T-solujen joukossa. Lisäksi T-solut munuaisallografteissa eivät eronneet terveen munuaiskudoksen T-soluista näiden parametrien suhteen.

4. Keskustelu

Tässä tutkimuksessa käsittelimme T-solualaryhmien monimuotoisuutta CD8:n ja CD4:n ilmentymisen ja kudosresidenssimarkkereiden, CD69:n ja CD103:n, mukaan ihmisen munuaisissa ja verrattiin näihin vereen. Huomattava määrä CD8- ja CD4-T-soluja havaittiin todellakin munuaiskudoksessa. Lisäksi nämä munuaisten T-solut sisälsivät huomattavan määrän CD69*CD103--soluja. CD69 plus CD103 plus -soluja havaittiin myös, mutta pääasiassa CD8 T-solujen joukossa, ja niitä ei käytännössä ollut olemassa CD4 T-solujen joukossa. Samanlainen löydös koski aiemmin keuhkojen TRM:ää [23]. Kuten odotettiin, tällaiset CD69:ää ja CD{15}}ilmentävät populaatiot olivat sen sijaan lähes poissa verenkierrosta. Silmiinpistävä ero verrattaessa munuaisten T-soluja veressä oleviin T-soluihin koski perinteisten CD45RA/CCR7/CD28/CD{19}}määriteltyjen alaryhmien selkeää jakautumista. Mielenkiintoista on, että CD28:n ilmentyminen ei useammin ilmentynyt, kun T-solut ilmensivät yhdessä CD69:ää yksinään tai yhdessä CD103:n kanssa. Teoriassa tämän pitäisi tehdä näistä populaatioista vähemmän herkkiä CD80:n ja CD:n kostimulatorisille signaaleille86. Muut erot koskivat CXCR3:n, CXCR6:n ja Ki-67:n korkeampaa ilmentymistiheyttä. Lisäksi munuaisten T-solut sisälsivät useammin IFNy:tä tuottavia soluja ja olivat usein polyfunktionaalisia. CD103 plus Tpys sisälsikin munuaisissa enemmän IFN:ää tuottavia soluja kuin niiden CD{31}}negatiiviset vastineet. Lisäksi CD103T-solut tuottivat useammin IL-17, vaikka tämä koski vaatimatonta populaatiota.

CISTANCHE PARANTAA MUNUAIS-/MUUNAISTUNNUSTA

Mitä tulee CXCR3:n useampaan ilmentymiseen CD8- ja CD4-munuaisten T-soluissa, CXCR3/CXCL10-akselin osoitettiin aiemmin osallistuvan TpM-populaatioiden muodostumiseen ihossa, maksassa ja imukudoksessa [24-28]. Lisäksi se on osallisena rasittuneeseen epiteeliin ja tulehduksiin yleisessä mielessä [14-17]. Ottaen huomioon CXCR3:n korkeat taajuudet näiden T-solujen joukossa terveessä munuaiskudoksessa, CXCR3 näyttää liittyvän TRM-homeostaasiin myös munuaiskudoksessa, eikä siihen välttämättä liity tulehdusta tai vaarasignaaleja. Mitä tulee CXCR6:een, CXCR6/CXCL16-akselin on todellakin jo osoitettu olevan välttämätön Tpst:n kuljettamisessa eri osastoihin, kuten keuhkoihin, ihoon, maksaan ja aivoihin, ja se voi koskea universaalia mekanismia, joka on välttämätön TRM:n ohjaamiseksi ja pitämiseksi kudoksissa, myös koskien TRM:ää ihmisen munuaiskudoksessa [18-22].

Farber ja työtoverit ovat laajasti karakterisoineet ja vertailleet CD8- ja CD4-TRM-populaatioita, jotka asuvat erilaisissa ihmiskudostyypeissä, jotka ovat peräisin elinluovuttajilta. He kuvasivat, kuinka TRM-populaatiot keuhkoissa, pernassa, ohutsuolessa ja erilaisissa sekundaarisissa imukudoksissa eroavat transkription, mutta myös eri proteiinien, mukaan lukien sytokiinien, ilmentymisen suhteen, joita on tutkittu nykyisessä tutkimuksessa [29-31. Nämä tutkimukset eivät kuitenkaan käsittäneet TRM-populaatioita ihmisen munuaisissa ja tietoja tästä

aihe on niukka. Olemme aiemmin osoittaneet, että CD8 T-solut, jotka kohdistuvat polyoomaviruksen BK VP1- ja LTAG-proteiineihin, jotka ovat peräisin viruksesta, jolla on vahva tropismi munuaisten epiteelisoluille, ovat havaittavissa allograft-munuaisissa. Nämä virusspesifiset T-solut ilmensivät CD69:ää ja CD103:a suurempia määriä kuin niiden vastineet, joita löydettiin samojen potilaiden verenkierrosta. Lisäksi nämä T-solut ilmensivät yleensä CD45RA-CD27-grantsyymi B-negatiivista fenotyyppiä[5]. Myöhemmin toiset ovat myös raportoineet TRM-populaatioista ihmisen munuaiskudoksessa, joka on saatu siirrännäisen nefrektomiasta. Tässä julkaisussa kirjoittajat raportoivat, että T-solut näissä kudoksissa koskivat pääasiassa CD8 T-soluja [321. Sen sijaan havaitsimme, että CD4 T-solut muodostivat itse asiassa suurimman T-solujen alajoukon. Havaitsimme kuitenkin myös, että tasapaino siirtyi, vaikkakaan ei merkittävästi, kohti suurempia määriä CD8 T-soluja allograftikudoksessa verrattuna terveeseen munuaiskudokseen. Sellaisenaan tämä ero voi olla selitetty eri tutkimusryhmällä, ja voi olla, että terveydessä immunologinen puolustus on keskittynyt enemmän solunulkoisiin uhkiin, kuten bakteereihin, verrattuna solunsisäisiin uhkiin, kuten viruksiin ja syöpään immuunivajautuneilla isännillä. Emme löytäneet muita eroja tutkituissa markkereissa terveiden munuaisten ja allograftin T-solujen välillä. Kuitenkin lisätutkimusta, jossa käytetään tekniikoita, joilla on laajempi näkemys transkriptomeista, kuten RNA-sekvensointi tai proteomi, kuten massaspektrometria, tulisi käyttää sen selvittämiseksi, onko näin todella.

Lisäksi de Leur et ai. kuvaavat, kuinka TRM munuaisissa ilmensi usein grantsyymi B:tä, kun taas havaitsimme vain pieniä määriä grantsyymi B:tä sekä terveessä että allograftin munuaiskudoksessa [32]. Havaitsimme kuitenkin huomattavia T-bet- ja Eomesia ekspressoivia T-soluja munuaiskudoksessa, mikä verenkierrossa olevissa T-solupopulaatioissa todellakin liittyy grantsyymi B:n korkeampaan ilmentymiseen [10]. Vaikka jälkimmäinen ei ehkä ole yllättävää, kun otetaan huomioon se tosiasia, että T-bet indusoi myös suoraan grantsyymi B:n ilmentymistä [33,34], tämä yhteys ei ollut ilmeinen munuaisten T-solujen joukossa nykyisessä tutkimuksessa. Kuten me ja muut olemme osoittaneet, myös ihmisen keuhkoista, aivoista ja ihosta peräisin olevat TRM [25,26,3536] sekä munuaisista peräisin olevat kudoksessa asuvat MAIT ælls 【6,7】 ovat vähäisiä grantsyymi B:ssä Vaikka se ilmaisee usein huomattavia määriä T-vetoa ja Eomeja, tämä saattaa olla (ihmisen) TkM:n yleinen piirre. Lisäksi keuhkoissa TRM:n grantsyymi B:n ilmentymisen havaittiin nousevan nopeasti stimulaation jälkeen [35l, mikä viittaa siihen, että tämä saattaa tapahtua myös muissa TeM:issä. Tässä kirjoittajat olettivat, että tällainen piilotettu sytotoksisuus suojaa kudosten rakenteellista eheyttä sytotoksisten T-solujen aiheuttamilta vaurioilta.

Yhteenvetona osoitamme, että munuaiskudoksessa on läsnä merkittäviä määriä T cll:itä ja ne käsittävät populaatioita, jotka ilmentävät usein CD69 plus- ja CD103 plus -molekyylejä, joiden avulla T-solut kiinnittyvät kudoksiin ja pysyvät niissä. Siitä huolimatta munuaiskudoksessa olevat CD69-CD103- T-solut näyttävät olevan erillisiä verenkierrossa olevista T-soluista ja voivat koskea toista erillistä TiM-populaatiota, joka mahdollisesti säilyy munuaisissa muilla paljastettavilla mekanismeilla. Toinen vaihtoehto voi olla, että nämä CD69-CD103-T-solut koskevat populaatiota, joka on vasta äskettäin poistunut verenkierrosta, ja he saivat vain tilapäisesti uusia fenotyyppisiä piirteitä johtuen vuorovaikutuksesta munuaisten mikroympäristön kanssa. Tämän populaation lisätutkimuksia tarvitaan näiden mahdollisuuksien selvittämiseksi. Lisäksi. CD8- ja CD4-munuaisten T-solut pyöräilivät usein aktiivisesti ja ilmensivät useammin CXCR6:ta. Lisäksi CD8- ja CD4-populaatiot syrjäyttivät erityisen korkean CXCR3-ekspression, mikä vaikutti voimakkaasti näihin kemokiinireseptoreihin, samoin kuin CXCR6:n TRM:n kertymiseen ja pysyvyyteen ihmisen munuaisissa. Siksi lisätutkimuksia tarvitaan parantamaan mielikuvaamme Tpv-populaatioista ihmisen munuaisissa. Tästä huolimatta tässä esitetyt havainnot muodostavat vankan ensimmäisen askeleen kohti munuaiskudoksessa olevien T-solupopulaatioiden ja niiden roolin terveyden ja sairauksien yksityiskohtaisempaa karakterisointia.