Aineenvaihdunta yhdistettynä BMP-2/Smad Signaling Pathway -analyysiin selventää Epimedii Foliumin – luuravintolisän kokonaisflavonoidien parantavat vaikutukset postmenopausaaliseen osteoporoosiin

Abstrakti

Postmenopausaalinen osteoporoosi (PMOP) laukaisee estrogeenin puutos. Riittämätön estrogeeni johtaa luun muodostumisen ylittävään luun resorptioon, mikä aiheuttaa luumassan vähenemistä. Tutkimukset ovat vahvistaneet, että kaikki flavonoidit uutetaanEpimedii Folium(TFE) voi parantaa osteoporoosia, kun taas luuravinne, joka koostuu kondroitiinisulfaatista (CS) yhdistettynä glukosamiinihydrokloridiin (GLcN), vaikuttaa terapeuttisesti luun aineenvaihduntaan liittyviin sairauksiin. Koska osteoporoosille ovat pohjimmiltaan luonteenomaisia ​​aineenvaihduntahäiriöt, TFE-uutteen ja luun ravintolisän (TG) yhdistelmällä voi olla synergistisiä usean kohteen sääteleviä vaikutuksia, mikä tarjoaa uuden lähestymistavan PMOP:n ehkäisyyn ja valvontaan.

Tässä tutkimuksessa tutkittiin systemaattisesti TG:n parantavia vaikutuksia ja mekanismeja PMOP:iin in vivo- ja in vitro -kokeiden avulla yhdistettynä metabolomiikkateknologiaan. In vivo ovariectomized (OVX) -rottamalli perustettiin kahdenvälisellä munasarjan poistolla. TG:n farmakodynaamiset vaikutukset PMOP:iin varmistettiin luun histopatologisen värjäytymisen, luun mineraalitiheyden ja fysiologisten indikaattoreiden perusteella. Lisäksi metabolomiikkatekniikkaa käytettiin virtsan metaboliittien kvantifiointiin mahdollisten TG:n säätelemien PMOP-biomarkkereiden ja niihin liittyvien metabolisten verkostojen tutkimiseksi. In vitro MC3T3-E1-soluja käsiteltiin TFE:llä ja TG:llä turvallisten annosten seulomiseksi. Tämän jälkeen suoritettiin osteogeeninen induktio, ja TG:n vaikutuksia ja mekanismeja osteogeeniseen erilaistumiseen tutkittiin alkalisella fosfataasilla (ALP) värjäyksellä, Alizarin Red S (ARS) -värjäyksellä ja Western blot -analyysillä.

Farmakodynaamiset tulokset osoittivat, että TG vähensi osteoklastien muodostumista ja palautti merkittävästi luun mineraalitiheyttä ja fysiologisia indikaattoritasoja. Metabolomiikan tulokset osoittivat, että TG lievitti luukatoa pääasiassa puuttumalla useisiin aineenvaihduntareitteihin, mukaan lukien nikotinaatti- ja nikotiiniamidiaineenvaihdunta, histidiiniaineenvaihdunta, pyrimidiinin aineenvaihdunta, tryptofaaniaineenvaihdunta, alaniini/aspartaatti/glutamaatti-aineenvaihdunta, puriini-aineenvaihdunta, B6-vitamiinin aineenvaihdunta ja muut. In vitro -kokeet vahvistivat, että TG edisti osteoblastien lisääntymistä ja osteogeenista erilaistumista luun morfogeneettisen proteiini-2:n (BMP-2)/Sma- ja Mad-proteiiniin (Smad) liittyvän signaalireitin kautta. Yhteenvetona voidaan todeta, että TG voi tehokkaasti parantaa PMOP:tä usean kohteen synergistisen vaikutuksen kautta. Tämä tutkimus tarjoaa kokeellisen perustan ja teoreettisen tuen TG:n kliiniselle sovellukselle.

Avainsanat:yhteensä flavonoiditEpimedii Folium; luun ravintolisä; postmenopausaalinen osteoporoosi; metabolomiikka; BMP-2/Smad-signalointipolku

 

Uusi Yrtti Cistanche Bone -ravintolisä

 

 

 

1. Johdanto

Osteoporoosi (OP) on systeeminen metabolinen luusairaus, jolle on tunnusomaista pienentynyt luumassa ja luun mineraalitiheys (BMD), luun mikroarkkitehtuurin tuhoutuminen ja lisääntynyt luun hauraus. Postmenopausaalinen osteoporoosi (PMOP) on yleisin tyyppi ja siihen liittyy estrogeenin vähentynyt eritys. Vähentynyt estrogeeni aiheuttaa luun resorption ylittävän luun muodostumisen, mikä johtaa luun homeostaasin häiriintymiseen [1].

Kiinassa tehdyssä osteoporoosin esiintyvyystutkimuksessa, johon osallistui 20 416 osallistujaa, havaittiin, että 40-vuotiaiden ja sitä vanhempien joukossa OP:n esiintyvyys oli 5,0 % miehillä ja 20,6 % naisilla [2]. Arvio OP:n esiintyvyydestä yli 50-vuotiaiden yhdysvaltalaisten aikuisten keskuudessa havaitsi esiintyvyyden olevan 16 % miehillä ja 29,9 % naisilla [3], mikä viittaa korkeampaan esiintyvyyteen naisilla. Kliinisesti PMOP:n hoitoon käytettyjä lääkkeitä ovat pääasiassa lisäkilpirauhashormonianalogit, bisfosfonaatit, estrogeeni, kalsitoniini ja RANKL-estäjät; Nämä lääkkeet voivat kuitenkin aiheuttaa haittavaikutuksia, kuten sydämentykytys, leuan osteonekroosi ja sydän- ja verisuonitauti, minkä vuoksi ne eivät sovellu pitkäaikaiseen käyttöön [4]. Perinteisten lääkkeiden huomattavan sivuvaikutustaakan vuoksi on tullut kiireellistä tunnistaa perinteisen kiinalaisen lääketieteen (TCM) vaihtoehtoja, joilla on vähemmän haittavaikutuksia ja jotka soveltuvat pitkäaikaiseen hoitoon. TCM:ää on käytetty pitkään OP:n parantamiseen ja se on saanut laajaa huomiota kotimaassa ja kansainvälisesti. Tutkimukset vahvistavat, että useat kiinalaiset yrtit, kutenEpimedii FoliumjaRhizoma Drynariaeniillä on merkittäviä vaikutuksia OP:n parantamiseen [5].

Flavonoidit yhteensäEpimedii Folium(TFE) ovat tärkeimmät aktiiviset komponentit, mukaan lukien ikariiini, epimediini A ja epimediini B.Epimedii Foliumon raportoitu monissa tutkimuksissa; esimerkiksi icariin tehostaa luuytimen mesenkymaalisten kantasolujen (BMSC) osteogeenista erilaistumista [6]. TFE-uute voi myös parantaa luukatoa lisäämällä ruskeaa rasvakudosta ja vähentämällä valkoista rasvakudosta luuytimessä [7].

 

Cistanchesta valmistettu luuravintolisä

 

Kondroitiinisulfaatti (CS) on sulfatoitu glykosaminoglykaani ja lineaarinen polysakkaridi, joka koostuu toistuvista disakkaridiyksiköistä, jotka sisältävät uronihappoa ja N-asetyyliheksosamiinia [8]. Glukosamiinihydrokloridi (GLcN) on aminomonosakkaridi, joka syntetisoidaan glukoosista ihmisen kudoksissa; sitä esiintyy pääasiassa rustossa ja nivelen sidekudoksessa ja se on tärkeä komponentti nivelrustossa ja solunulkoisessa matriisissa. Molempia käytetään yleisesti ravintolisänä. ZHENG HX et ai. [9] raportoivat, että CS voi vähentää seerumin tulehduksellisia sytokiinejä ja estää oksidatiivista stressiä; se voi myös vähentää osteoklastien ilmentymistä säätelemällä OPG/RANKL:ää, mikä viittaa anti-inflammatorisiin ja antioksidanttisiin vaikutuksiin ja osteoklastien erilaistumisen estoon. Yhdysvalloissa CS yhdistetään usein GLcN:n kanssa ravintolisissä, ja sitä käytetään pääasiassa vähentämään matriisikomponenttien häviämistä nivelrikossa [10]. Lisäksi, koska CS voi indusoida solujen erilaistumista, sitä on käytetty kondrogeneesissä ja osteogeenisissä rakenteissa [11–12].

Useat tutkimukset viittaavat siihen, että TFE-uutteella, CS:llä ja GLcN:llä on tiettyjä terapeuttisia vaikutuksia luun aineenvaihduntaan liittyvissä sairauksissa. Epäselväksi jää kuitenkin, tuottaako yhdistetty TFE-uute-luun ravintolisä (TG) synergistisiä etuja OP:n ja sen mekanismien parantamisessa.

 

Cistanchesta valmistettu luuravintolisä
 

 

Maailmanlaajuinen Cistanche-kauppa

Wecistanchen tukipalvelu - Lisätietoja yhteistyöstä
Sähköposti:wallence.suen@wecistanche.com

 

 

2. Materiaalit ja menetelmät

2.1 Eläimet

Neljäkymmentä 8 viikon ikäistä naaraspuolista Sprague–Dawley-rottaa (180–220 g) ostettiin yhtiöltä Changchun Yisi Experimental Animal Co., Ltd. (eläinlisenssi nro SCXK (Ji)-2020-0001). Eläimiä pidettiin SPF-laboratoriossa 23 ± 223 \\pm 223 ± 2 astetta ja 50 % kosteutta, vapaa pääsy ruokaan ja veteen, 12 tunnin valo/12 tunnin pimeyden syklissä. Jilinin maatalousyliopiston kokeellinen eläinten hyvinvointi- ja etiikkakomitea (hyväksyntänumero. 20240717001) arvioi ja hyväksyi eläinkokeet.

2.2 Lääkkeet ja reagenssit

Korealainen Epimedii Foliumraakayrtti ostettiin yhtiöltä Tonghua County Senyu Chinese Medicinal Materials Co., Ltd. (Jilinin maakunta). Icariin (eränumero T11A11B111118) ostettiin Shanghai Yuanye Bio-Technology Co., Ltd:ltä. GLcN (eränumero M-AT-1904020) ostettiin yhtiöltä Zhejiang Jinke Pharmaceutical Co., Ltd. CS (eränumero HS1904270), Coharmacenguticale ostettiin Jijiltä. Ltd. Muita reagensseja olivat penisilliininatrium injektiota varten, estradiolivaleraattitabletit, tribromietanoli, ELISA-sarjat PINP:lle ja CTX-I:lle, hydroksiproliini-, fosfori- ja kalsiummäärityssarjat, ALP-värjäyspakkaus, -MEM-väliaine, trypsiini, penisilliinipuskuri tai TB-puskuri, nopea siirtopuskuri, streptomysiini, salpaaja, streptomysiini, PVDF-kalvot, HRP-vuohen anti-kanin IgG, anti-GAPDH-vasta-aine, esivärjätty proteiinimarkkeri, RIPA-lyysipuskuri, ECL-pakkaus, PAGE-geelin valmistuspakkaus, proteiinin latauspuskuri, CCK-8-pakkaus, naudan sikiön seerumi, Alizarin Red S, askorbiinihappo, -glysero-, d-BS-fosfaatti, natriumin ja natriumin vasta-aine RUNX2, BMP-2, Smad1, ALP, OSX ja p-Smad1/5.(Kaikki eränumerot ja toimittajat ovat alkuperäisen tekstin mukaisia.)

2.3 Instrumentit

Käytettiin mikrolevylukijaa (ThermoFisher, USA), käänteistä mikroskooppia (Motic Group), bioturvallisuuskaappia (ThermoFisher, USA), CO2_22-inkubaattoria (ThermoFisher, USA) ja digitaalista kaksikanavaista lämmitysmetallikylpyä (Changchun Kelebo Biotechnology Co., Ltd.).

2.4 TFE Extraction

TFE uutettiin käyttämällä Zhang Dongxuen et ai. [13]. Saatu lyofilisoitu jauhe mitattiin UV-Vis-spektrofotometrialla 270 nm:ssä. Käyttämällä icariinia standardina TFE-uutteen kokonaisflavonoidipitoisuudeksi määritettiin 79,0 %.

2.5 Eläinkokeellinen suunnittelu

Rats were randomized into five groups: normal (sham), model (OVX), estradiol valerate (EV), TFE extract (T), and TG. The sham group underwent removal of a small amount of abdominal fat and soft tissue only; all other groups underwent bilateral ovariectomy. Drugs were prepared as suspensions in 0.5% sodium carboxymethyl cellulose and administered by oral gavage. Sham and OVX groups received saline by gavage. The T group received TFE at 490 mg·kg−1^{-1}−1. The EV group received 0.1 mg·kg−1^{-1}−1. The TG group received CS 124 mg·kg−1^{-1}−1, GLcN 155 mg·kg−1^{-1}−1, and TFE 490 mg·kg−1^{-1}−1. Doses were converted from human recommended doses. Gavage volume was 2 mL·kg−1^{-1}−1·d−1^{-1}−1 for 8 consecutive weeks. Successful modeling was confirmed when serum estradiol (E2) levels in the OVX group were significantly lower than those in the sham group. Because CS+GLcN alone showed only a slight improving trend in rat BMD, a separate bone nutrient–only group was not established.

Viikoilla 3, 6 ja 8 rotat sijoitettiin metabolisiin häkkeihin, joissa oli vapaata vettä ja 12 tunnin paasto, ja 24 tunnin virtsanäytteet kerättiin. Virtsaa sentrifugoitiin 4 asteessa, 3500 r·min-1^{-1}-1 10 minuuttia; supernatantit säilytettiin -80 asteessa. Viikon 8 lopussa eläimet lopetettiin ja veri kerättiin, sentrifugoitiin 4 asteessa, 4 000 r·min-1^{-1}-1 15 minuuttia seerumin saamiseksi, sitten säilytettiin -80 asteessa.

2.6 Fysiologisten indikaattorien mittaus

Viikolla 8 kerättiin virtsa ja vatsan aorttaverta. ELISA-pakkauksia käytettiin seerumin luunmuodostusmarkkerin PINP ja luun resorptiomarkkerin CTX-I mittaamiseen. Seerumin ja virtsan hydroksiproliini (Hyp) mitattiin alkalisella hydrolyysillä. Virtsan kalsium (U-Ca) mitattiin MTB-mikrolevymenetelmällä ja virtsan fosfori (UP) fosfomolybdaattimenetelmällä.

2.7 Luun mineraalitiheys ja mikro-CT

8 viikon kuluttua vasemmat reisiluut kerättiin, puhdistettiin ja skannattiin mikro-CT:llä. Trabekulaariset parametrit analysoitiin kvantitatiivisesti, mukaan lukien trabekulaarinen erottuminen (Tb.Sp), trabekulaarisen paksuus (Tb.Th), trabekulaariluku (Tb.N), luun tilavuusfraktio (BV/TV) ja rakennemalliindeksi (SMI).

2.8 Luun histopatologia

Oikeat reisiluut kiinnitettiin 4-prosenttisessa paraformaldehydissä, niistä poistettiin kalkki, ne upotettiin parafiiniin, leikattiin ja värjättiin HE:llä ja TRAP:lla. TRAP-positiiviset osteoklastit näyttivät tummanpunaisilta.

2.9 Aineenvaihdunta-analyysi

Virtsa (100 µl) laimennettiin 10-kertaisesti tislatulla vedellä, vorteksoitiin 30 s, sentrifugoitiin 4 asteessa, 15 000 r·min-1^{-1}-1 10 minuuttia, ja supernatanttia käytettiin analysointiin. Yhtä suuret määrät (100 µl) kunkin rotan virtsaa yhdistettiin laadunvalvontanäytteiden (QC) valmistamiseksi.

Kromatografia suoritettiin käyttämällä ACQUITY UPLC CSH C18 -kolonnia (2,1 mm × 150 mm, 1,7 μm) 40 °C:ssa. Liikkuva faasi A oli asetonitriili (0,1 % muurahaishappoa) ja liikkuva faasi B oli vesi (0,1 % muurahaishappoa). Virtausnopeus oli 0,20 ml·min−1^{-1}−1, injektiotilavuus 5 μL. Gradientti: 0–4 min, 95 % B; 4–5 min, 95–65 % B; 5–13 min, 65–25 % B; 13–14 min, 25–0 % B; 14–18 min, 0–95 % B.

Massaspektrometria suoritettiin Q Exactive Plus -instrumentilla positiivisissa ja negatiivisissa ioneissa, suihkutusjännitteellä ±3,2 kV, vaippakaasulla 2,0–8,0 psi, kapillaarilämpötilalla 350 astetta ja skannausalueella m/z 100–1 000.

2.10 Monimuuttujatilastot ja tietojenkäsittely

Raaka LC-MS-tiedot esikäsiteltiin ja normalisoitiin käyttämällä Compound Discoverer -ohjelmistoa. Klusterien ja ryhmien erojen arvioimiseen käytettiin valvomatonta PCA:ta. VIP-arvojen saamiseksi käytettiin valvottua OPLS-DA:ta. Normalisoituihin tietoihin sovellettiin t-testiä. Metaboliitteja, joiden VIP > 1 ja P < 0,05, pidettiin mahdollisina biomarkkereina ja tunnistettiin edelleen.

2.11 Biomarkkerin tunnistus ja polkuanalyysi

Tarkka retentioaika (Rt), m/z ja molekyylipaino saatiin TIC-kromatogrammeista. Ehdokaskaavat ja alkuainekoostumus ennustettiin käyttämällä Compound Discoverer online -tietokantoja (HMDB, KEGG). Reitin rikastus suoritettiin käyttämällä MetaboAnalystia.

2.12 Osteoblastien kulttuuri ja erilaistuminen

Hiiren MC3T3-E1-kalvariaalisia osteoblasteja viljeltiin 37 asteen CO2_22-inkubaattorissa. Kun solut olivat 80–90 % konfluentteja, ne maljattiin osteogeenista induktiota varten. Osteogeeninen täydellinen elatusaine koostui -MEM:stä, jota oli täydennetty 10 mmol·L−1^{-1}−1 -glyserofosfaatilla, 50 μmol·L−1^{-1}−1 askorbiinihapolla ja 100 nmol·L−1^{-1}−1 deksametasonilla.

2.13 Sytotoksisuusmääritys

Solujen elinkelpoisuuden arvioi CCK-8. MC3T3-E1-soluja (5 x 103^33 solua/kuoppa) kylvettiin 96-kuoppaisille levyille ja inkuboitiin yön yli. Sitten soluja käsiteltiin TFE:llä (2–12 ug·mL-1^{-1}-1), CS:llä (50–250 ug·mL-1^{-1}-1) tai GLcN:llä (0,2–1,0 mmol·L-1^{-1}-1) 24 tunnin ajan. Absorbanssi 450 nm:ssä mitattiin elinkelpoisuuden laskemiseksi. Tulosten perusteella optimaaliset annokset valittiin ja yhdistettiin testaamaan TG:tä verrokkia vastaan.

2.14 ALP-värjäys

MC3T3-E1-solut (1 x 104^44 solua/kuoppa) kylvettiin 12-kuoppalevyille ja jaettiin nollakokeeseen (ei induktiota), kontrolliin (osteogeeninen induktio), T (osteogeeninen induktio + TFE) ja TG (osteogeeninen induktio + TG). Media vaihtui joka toinen päivä. 7 päivän kuluttua suoritettiin ALP-värjäys pakkauksen ohjeiden mukaan.

2.15 ARS-värjäys

Käyttämällä samaa ryhmittelyä ja käsittelyä kuin ALP-värjäys, soluja indusoitiin 14 päivän ajan. Solut kiinnitettiin 4 % paraformaldehydillä, värjättiin 0,1 % Alizarin Redillä (pH 7,2) 30 minuutin ajan, pestiin ja tarkkailtiin mikroskoopilla.

2.16 Western Blot

Sen tutkimiseksi, vaikuttaako TG osteogeeniseen erilaistumiseen BMP-2/Smad-signaloinnin kautta, MC3T3-E1-soluja (5 × 105^55 solua/kuoppa) kylvettiin 6-kuoppaisille levyille samalla ryhmittelyllä kuin edellä. Solut hajotettiin RIPA:lla sekä proteaasi- ja fosfataasin estäjillä. BCA-kvantifioinnin jälkeen proteiinit denaturoitiin, erotettiin 10 % SDS-PAGE:lla, siirrettiin PVDF:hen, blokattiin, inkuboitiin primääristen vasta-aineiden (GAPDH, p-Smad1/5, Smad1, BMP-2, RUNX2, OSX, ALP) kanssa, mitä seurasi HRP:n sekundaarinen vasta-aine, ECLJ:n määrittäminen, kuvantaminen.

2.17 Tilastollinen analyysi

Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± SD. SPSS:ää käytettiin tilastolliseen analyysiin. Normaalisuustestauksen jälkeen suoritettiin yksisuuntainen ANOVA. Erot katsottiin tilastollisesti merkitseviksi, kun P < 0,05.

 

Cistanchesta valmistettu luuravintolisä
 

3. Tulokset

3.1 Seerumin biokemialliset indikaattorit

Kuten taulukosta 1 näkyy, huijausryhmään verrattuna E2-tasot laskivat merkittävästi OVX-ryhmässä, mikä osoittaa onnistuneen mallin perustamisen. Seerumin PINP-arvo OVX-ryhmässä väheni merkittävästi, mikä viittaa vähentyneeseen luunmuodostukseen PMOP:ssa. Verrattuna OVX:ään, PINP T- ja TG-ryhmissä lisääntyi merkittävästi, mikä osoittaa, että sekä T että TG lisäsivät luunmuodostusmarkkereita ja paransivat TG:n palautumista. Huijaamiseen verrattuna CTX-I lisääntyi merkittävästi OVX:ssä, mikä viittaa lisääntyneeseen luun resorptioon munasarjojen poiston jälkeen. Verrattuna OVX:ään, CTX-I TG:ssä ja TG:ssä väheni merkittävästi ja TG:ssä selvempi lasku. Seerumin hydroksiproliini (S-Hyp) lisääntyi merkittävästi OVX:ssä verrattuna huijaukseen, mikä osoittaa lisääntynyttä kollageenin hajoamista; verrattuna OVX:ään, S-Hyp laski T- ja TG-arvoissa, ja TG väheni merkittävästi, mikä viittaa parempaan kollageenin hajoamisen estämiseen.

3.2 Virtsan biokemialliset indikaattorit

Huijaukseen verrattuna UP lisääntyi merkittävästi OVX:ssä; OVX:ään verrattuna UP laski selvemmin TG:ssä. U-Ca lisääntyi merkittävästi OVX:ssä verrattuna huijaukseen; OVX:ään verrattuna U-Ca väheni merkittävästi sekä TG:ssä että TG:ssä, ja TG:ssä oli suurempi lasku. Virtsan Hyp (U-Hyp) lisääntyi merkittävästi OVX:ssä verrattuna huijaukseen; OVX:ään verrattuna U-Hyp väheni merkitsevästi kussakin hoitoryhmässä, ja TG:ssä oli suurempi lasku kuin T:ssä (taulukko 2).

3.3 Luun histopatologia

HE-värjäys osoitti, että trabekulaarinen jatkuvuus oli hyvä näennäisissä, ja luuydinontelossa oli vähemmän rasvasoluja. Verrattuna huijaukseen, OVX osoitti huonompaa trabekulaarista jatkuvuutta ja huomattavasti lisääntyneet rasvasolut. Verrattuna OVX:ään, trabekulaarinen jatkuvuus palautui T- ja TG:ssä ja adiposyyttien määrä väheni; TG osoitti selvempää palautumista (kuvio 1A). TRAP-värjäys osoitti, että osteoklastien määrä lisääntyi merkittävästi OVX:ssä verrattuna huijaukseen; verrattuna OVX:ään, osteoklastien määrä väheni T:ssä ja TG:ssä, ja TG:ssä väheni merkittävästi (kuvio 1B).

3.4 Luun mineraalitiheys ja mikro-CT-parametrit

Micro-CT osoitti merkitsevästi vähentynyttä luumassaa OVX:ssä verrattuna huijaukseen. Verrattuna OVX:ään, luumassan palautuminen TG:ssä oli merkittävämpi kuin T:ssä, ja trabekulaaritiheys kasvoi selvästi (kuva 1C). Kvantitatiivinen analyysi osoitti, että BV/TV, Tb.Th ja Tb.N vähenivät merkittävästi OVX:ssä verrattuna huijaukseen. OVX:ään verrattuna nämä indeksit nousivat merkittävästi TG:n jälkeen (parempi kuin T). Tb.Sp ja SMI lisääntyivät merkittävästi OVX:ssä verrattuna huijaukseen; OVX:ään verrattuna TG laski näitä indeksejä merkittävästi enemmän kuin T (taulukko 3).

3.5 PCA

Sekä positiivisessa että negatiivisessa ionimoodissa virtsan metaboliittiprofiilien PCA viikoilla 3, 6 ja 8 osoitti selkeän eron vale-, OVX- ja TG-ryhmien välillä, mikä osoitti erilliset aineenvaihduntaprofiilit ennen/jälkeen mallinnuksen ja ennen/jälkeen TG-hoidon (katso alkuperäisen julkaisun yhteydessä viitattu lisämateriaali).

3.6 Mahdollinen biomarkkeriseulonta

OPLS-DA osoitti selvempää ryhmäerottelua viikkojen aikana molemmissa ionimuodoissa. Tulivuorikaaviot ja 200 permutaatiotestit tukivat mallin luotettavuutta (R2Y ja Q2 lähellä 1; Q2 leikkauspiste < 0), mikä viittaa siihen, ettei ylisovitusta.

3.7 Biomarkkerin tunnistus ja polkuanalyysi

Käyttämällä VIP > 1 ja P < 0,05, mahdolliset biomarkkerit seulottiin. M/z:n, MS/MS:n, Rt:n ja molekyylipainon perusteella ja HMDB/KEGG:hen perustuen tunnistettiin 46 mahdollista biomarkkeria. KEGG-rikastus osoitti, että reittejä olivat pääasiassa nikotinaatti- ja nikotiiniamidi-, histidiini-, pyrimidiini-, tryptofaani-, D-aminohappo-, alaniini-/aspartaatti-/glutamaatti-, puriini- ja B6-vitamiiniaineenvaihdunta (kuva 2). Hierarkkinen klusterointi osoitti dynaamisia muutoksia viikoilla 3, 6 ja 8 TG-intervention jälkeen (katso alkuperäisessä julkaisussa viitattu lisämateriaali).

3.8 Sytotoksisuusmääritys

24 tunnin käsittelyn jälkeen 6 ug·mL-1^{-1}-1 TFE lisäsi solujen elinkelpoisuutta; suuremmat annokset estivät elinkelpoisuutta. GLcN pitoisuudessa 0,4 mmol·L−1^{-1}−1 lisäsi merkittävästi elinkelpoisuutta. CS 150 ug·mL-1^{-1}-1 lisäsi elinkelpoisuutta (taulukko 4). Siten valittiin 6 ug·mL-1^{-1}-1 TFE, 0,4 mmol·L-1^{-1}-1 GLcN ja 150 ug·mL-1^{-1}-1 CS. Yhdistetty annostus osoitti kontrollin elinkelpoisuutta 1,00 ± 0,11 ja TG-elinkykyä 1,22 ± 0,03, mikä osoittaa, että valittu TG-annos oli turvallinen ja ei-sytotoksinen.

3.9 Vaikutukset osteogeeniseen erilaistumiseen ja proteiinien ilmentymiseen

ALP on osteogeenisen erilaistumisen varhainen merkki. Osteogeenisen induktion aikana TG osoitti tummempaa ALP-värjäytymistä kuin T, mikä osoitti parempaa ALP-ilmentymisen edistämistä (kuvio 3A). ARS-värjäys osoitti, että sekä T että TG edistivät mineralisoituneiden kyhmyjen muodostumista kontrolliin verrattuna, ja TG:ssä oli selvempi vaikutus (kuvio 3B). Western blot osoitti lisääntynyttä osteogeenisten markkerien ilmentymistä induktion aikana. Nollakokeeseen verrattuna kontrolli osoitti onnistuneen osteogeenisen erilaistumisen. Hoidon jälkeen TG lisäsi voimakkaammin BMP-2-, p-Smad1/5-, RUNX2-, OSX- ja ALP-proteiinin ilmentymistä (kuvio 3C; taulukko 5).

 

4. Keskustelu

Postmenopausaalinen munasarjojen vajaatoiminta alentaa estrogeenitasoja ja häiritsee luun aineenvaihduntaa, mikä tehostaa osteoklastien erilaistumista ja vähentää osteoblastien erilaistumista, mikä lopulta aiheuttaa luukatoa [14–15]. Aiempien tutkimusten [13] perusteella oletettiin, että TFE:n yhdistäminen luun ravintolisän kanssa voi saada aikaan synergistisiä vaikutuksia PMOP:n parantamisessa. Siksi tässä tutkimuksessa käytettiin OVX-rottamallia ja osteoblastien erilaistumismallia TG:n tehokkuuden ja mekanismin arvioimiseksi.

PINP (luun muodostuminen) ja CTX-I (luun resorptio) paransivat sekä T että TG, ja TG osoitti merkittävämpiä vaikutuksia. Hydroksiproliini (Hyp), tärkeä kollageenikomponentti, lisää seerumin ja virtsan määrää OP:ssa [16–17]. Tässä tutkimuksessa OVX lisäsi sekä seerumin että virtsan Hyp; hoito alensi näitä tasoja, ja TG alensi niitä merkittävästi enemmän kuin T. Lisääntynyt luun resorptio OVX:ssä lisää myös kalsiumin ja fosforin häviämistä, mikä nostaa virtsan kalsiumin ja fosforin määrää DESAI S et al:n mukaisesti. [18]. Hoito vähensi U-Ca:ta ja UP:ta ja TG:tä väheni enemmän. Estrogeenin puute muuttaa trabekulaarista rakennetta, estää BMSC:n osteogeneesiä, edistää adipogeneesiä ja lisää osteoklastien aktiivisuutta [19]. TG paransi trabekulaarista yhteyttä, vähensi luuytimen adiposyyttejä ja vähensi osteoklastien määrää tehokkaammin kuin T. Micro-CT vahvisti, että TG lisäsi BMD:tä ja paransi trabekulaarista mikroarkkitehtuuria (BV/TV, Tb.Th, Tb.N) samalla kun se vähensi Tb.Sp:tä ja SMI:tä.

Koska OP on metabolinen sairaus, metabolomiikkaa käytettiin tutkimaan TG:n säätelemiä aineenvaihduntaverkostoja. TG:n säädellyt reitit sisälsivät pääasiassa aminohappo-, nukleotidi- ja vitamiiniaineenvaihdunnan. Tryptofaani liittyy BMD:hen, ja alentuneet tasot voivat merkitä OP:ta [20]. Tässä tutkimuksessa tryptofaania säädeltiin alas OVX:ssä ja se palautui merkittävästi 8 viikon TG-hoidon jälkeen, mikä viittaa siihen, että TG voi lievittää luukatoa moduloimalla tryptofaaniaineenvaihduntaa. Arginiini/kreatiinin aineenvaihduntaan liittyvä kreatiniini on yhdistetty OP:hen [21–22]. Tässä kreatiniini oli korkein OVX:ssä viikolla 8 ja TG vähensi sitä merkittävästi, mikä viittaa siihen, että arginiiniaineenvaihdunnan säätely voi edistää PMOP:n paranemista. Glutationin aineenvaihdunta osallistuu PMOP:iin [23]. L-glutamaatti voi muodostua glutationin (GSH) aineenvaihdunnasta. GSH:lla on antioksidanttisia toimintoja ja se tukee luun uudelleenmuodostumista [24]. PMOP:ssa oksidatiivinen stressi lisääntyy, antioksidanttikapasiteetti vähenee ja osteoklastien aktiivisuus ylittää osteoblastien aktiivisuuden, mikä heikentää luun muodostumista [15]. Tässä tutkimuksessa L-glutamaatti oli korkeampi OVX:ssä viikolla 8, ja TG vähensi L-glutamaattia, mikä viittaa siihen, että TG saattaa vähentää GSH:n muuttumista L-glutamaatiksi ja siten tukea GSH-tasoja ja torjua estrogeenin puutteeseen liittyviä aineenvaihduntahäiriöitä.

Puriinien aineenvaihduntahäiriöt OP:ssa voivat johtaa virtsahapon kertymiseen [25–27]. Metabolomiikka osoitti, että TG alensi virtsahappotasoja viikoilla 3, 6 ja 8 OVX:ään verrattuna, mikä viittaa puriinin synteesin ja virtsahapon kertymisen estymiseen. LIU DF et ai. [28] raportoivat, että interventiot voivat lisätä adenosiinin määrää puriinien aineenvaihduntahäiriöiden lievittämiseksi. Tässä tutkimuksessa TG lisäsi adenosiinia merkittävästi 8 viikon jälkeen, mikä viittaa osteogeeniseen erilaistumiseen ja luun palautumiseen.

Vitamiineilla (D, B-kompleksi, K) on tärkeä rooli luun aineenvaihdunnassa [29–31]. Niasiini ja nikotiiniamidi ovat B3-vitamiinin muotoja [32]. Niasiini edistää NAD/NADP-koentsyymien synteesiä, ja sillä on anti-inflammatorisia ja antioksidanttisia vaikutuksia [33]. Nikotiiniamidi voi myös edistää NAD:n tuotantoa; NAD tukee mitokondrioiden toimintaa, vähentää ROS-vaurioita ja auttaa ylläpitämään luun homeostaasia. OP:ssa vähentynyt NAD voi haitata osteogeenista erilaistumista ja mineralisaatiota [34]. Tässä tutkimuksessa niasiini ja nikotiiniamidi olivat korkeampia OVX:ssä viikoilla 3, 6 ja 8 (korkeimmillaan viikolla 8). Kirjoittajat päättelivät, että NAD-synteesi voi olla heikentynyt sairaudessa, mikä johtaa niasiinin/nikotiiniamidin kertymiseen ja alhaiseen NAD:iin, kun taas TG alensi niasiini/nikotiiniamidipitoisuutta, mikä mahdollisesti heijastaa kulutusta NAD-synteesiin. Pyridoksamiini (PM) on osa B6-vitamiinia [35]. B6-vitamiini tukee kondrogeenista erilaistumista [36], ja B6-vitamiinin puute voi heikentää kollageenin ristisidoksia ja luuston vahvuutta [37]. B6-vitamiinin metabolia on yhdistetty PMOP:n etenemiseen [38]. Tässä tutkimuksessa PM oli pienempi OVX:ssä viikolla 8, kun taas TG lisäsi PM:ää, mikä viittaa mahdolliseen rooliin kollageenin ja luun vahvuuden tukemisessa.

Luun uudelleenmuotoilun aikana osteoblastit välittävät luun muodostumista. ALP- ja ARS-värjäytyminen heijastavat varhaista osteogeneesiä ja myöhäistä mineralisaatiota, ja tyypillisesti lisääntyvät osteogeenisen induktion aikana [39–40]. Tässä TG lisäsi ALP-aktiivisuutta ja mineralisoi kyhmyjä tehokkaammin kuin TFE yksin. BMP:t ovat TGF-superperheen jäseniä ja niillä on keskeinen rooli osteogeenisessä erilaistumisprosessissa. BMP-2 sitoo reseptoreja, aktivoi Smad1/5/8:aa (Smad4:n kanssa) ja edistää transkriptiotekijöitä, kuten RUNX2:ta ja alavirran OSX:ää, mikä viime kädessä edistää osteogeenista proteiinisynteesiä, solunulkoisen matriisin kerrostumista ja mineralisaatiota [41]. Aiemmat tutkimukset raportoivat, että TFE edistää BMSC:n osteogeneesiä BMP-2/RUNX2/OSX-reitin kautta [42]. Tässä tutkimuksessa keskityttiin BMP-2/Smad-signalointiin ja havaittiin, että TG lisäsi merkittävästi BMP-2-, p-Smad1/5-, RUNX2-, OSX- ja ALP-ilmentymistä verrattuna pelkkään TFE:hen, mikä tuki vahvempaa pro-osteogeenistä vaikutusta, joka välittyy BMP-2/Smadin välityksellä.

Yhteenvetona, in vivo ja in vitro -tulokset osoittavat, että TG parantaa tehokkaasti OVX:n aiheuttamia luun aineenvaihdunnan poikkeavuuksia. Mekanismeihin voi kuulua aminohappo-, nukleotidi- ja vitamiiniaineenvaihdunnan säätely ja BMP-2/Smad-signaloinnin aktivoiminen osteogeneesin edistämiseksi. Tämä tutkimus tarjoaa teoreettista tukea TG:lle PMOP:n ehkäisyssä ja hoidossa.

 

5. Teollisuuden näkökulma: Kasvitieteelliset ainesosatrendit postmenopausaaliseen luuterveyteen - mekanismilähtöisestä tutkimuksesta standardoituun tuotantoon

SEO painopiste: yrttiuute postmenopausaaliseen osteoporoosiin, kasvitieteellisiä ainesosia luuston terveydelle, osteogeneesi BMP-2/Smad-reitti, Epimedium flavonoids (icariin) uute, metabolomiikkaohjattu kasvitieteellinen tuotekehitys.

5.1 Miksi mekanismiin perustuvalla "Yrttiuutteella postmenopausaalista osteoporoosia varten" on merkitystä B2B:ssä

Tuotemerkkien, maahantuojien ja formuloijien rakentamiseennaisten terveyttäjaluuston terveyttäsalkkuja, markkinat palkitsevat yhä enemmän kasvitieteellisiä käsitteitä, jotka voidaan selittääselkeä tieteellinen logiikka-esimerkiksi:

monitie-aineenvaihduntamodulaatio (metabolomiikka tuettu) ja

osteogeneesiin liittyvät signalointireitit, kutenBMP-2/Smad.

Edellä käännetyn kaltaiset tutkimukset ovat arvokkaita, koska ne yhdistävätkoostumus (TFE + CS/GLcN) → fenotyyppiset tulokset (BMD, osteoklastien väheneminen, mikro-CT-indeksit) → molekyyli/biokemiallinen näyttö (BMP-2/Smad, PINP/CTX-I) → aineenvaihduntaverkostot (B-vitamiinireitit, aminohappo- ja puriiniaineenvaihdunta).

5.2 Kasvitieteellinen ainesosien hankinta: standardointi, jäljitettävyys ja skaalautuva uutto ovat todellisia erottajia

B2B-tarjonnassa "yrtti" ei ole yksittäinen eritelmä - se on toimitusketju. Valmiita tuotteita valmistavien yritysten keskeisiä kysymyksiä ovat:

Voiko ainesosa ollastandardoitu(esim. merkkiyhdisteet, sormenjäljet)?

Onko siellälaatujärjestelmätjavalmistuksen valvontatukea pitkän aikavälin tarjontaa?

Voiko toimittaja tarjotadokumentaatiopaketitviranomais- ja asiakasauditointeja varten?

5.3 Mihin Cistanche sopii (trendi + valmistuskyky, ei korvaava väite)

Vakiintuneiden luuston terveyteen liittyvien kasvien ohella (esim.Epimediumflavonoidit),Cistancheon saanut huomiota laajemmassa TCM:ssä ja toiminnallisessa kasvitieteellisessä tilassa, koska se on pitkään käyttänyt tonic-koostumuksissa ja alan suosiotaan yhä enemmänyhden yrtin uutteetjastandardoidut aktiiviaineetjotka voidaan integroida nykyaikaisiin lisämuotoihin.

Ostajille, jotka arvioivat kasvitieteellisiä kumppaneita, valmistussuuntautunut toimittajaprofiili tulee tärkeäksi:

vertikaalisesti integroitu hankinta,

louhinta- ja käsittelykapasiteetti,

ja yrityksen taustan läpinäkyvyys.

Tietoja valmistuskyvystämme (viitelähde):yritysprofiiliin ja tehtaiden taustaan ​​voi tutustua toimittajasivuston virallisella "Tietoja meistä" -sivulla. ([xjcistanche.com])

B2B-blogien vaatimustenmukaisuushuomautus:Jos tuotteesi sijoittelu kohdistuu "postmenopausaaliseen osteoporoosiin", varmista, että ulospäin suuntautuva kielesi säilyyrakenne/toimintotairavitsemustuki-suuntautunut (riippuen markkinoista) ja välttää sairauden hoitoa koskevia väitteitä, elleivät paikalliset säännökset tue ja salli sitä.

Lue lisää (toimittajan viitesivut):

Yrityksen yleiskatsaus / tehdastausta: ([xjcistanche.com])

Aiheeseen liittyvä kasvitieteellisen sisällön keskus (TCM-reseptit ja ainesosien tarinankerronta):(Antamasi viitelinkki voidaan lisätä, kun varmistat, että lopullisen URL-osoitteen polku on oikea)

 

Viitteet

[1] LI J, CHEN X, LU LY, et ai. Luuytimen rasvakudoksen ja luun aineenvaihdunnan välinen suhde postmenopausaalisessa osteoporoosissa.Cytokine Growth Factor Rev, 2020, 52: 88.
[2] WANG LH, YU W, YIN XJ et al. Osteoporoosin ja murtumien esiintyvyys Kiinassa: Kiinan osteoporoosin esiintyvyystutkimus.JAMA Netw Open, 2021, 4(8): e2121106.
[3] WRIGHT NC, SAAG KG, DAWSON-HUGHES B, et al. National Bone Health Alliancen (NBHA) uusien diagnostisten kriteerien vaikutus osteoporoosin esiintyvyyteen Yhdysvalloissa.Osteoporos Int, 2017, 28(4): 1225.
[4] LIANG B, BURLEY G, LIN S, et al. Osteoporoosin patogeneesi ja hoito: olemassa olevat ja uudet keinot.Cell Mol Biol Lett, 2022, 27(1): 72.
[5] LEI SS, HUANG XW, LI LZ, et al. Tutkitaan mekanismiaEpimedii Folium–Rhizoma drynariaeyrttipari edisti luuvaurioiden paranemista verkkofarmakologian ja kokeellisten tutkimusten avulla.J Etnopharmacol, 2024, 319(3): 117329.
[6] LIU W, XIANG SY, WU YC, et ai. Icariin edistää BMSC:iden osteogeenista erilaistumista mTOR/autofagia-reitin kautta ketogeeniseen ruokavalioon liittyvän osteoporoosin parantamiseksi.J Orthop Surg Res, 2024, 19(1): 127.
[7] CHEN L, MA R, LUO P, et ai. Epimediumin kokonaisflavonoidien vaikutukset luuytimen rasvakudokseen rotilla, joilta on poistettu munasarjat.Etuendokrinoli (Lausanne), 2022, 13: 900816.
[8] LIU TS, YU H, WANG S, et al. Kondroitiinisulfaatti lievittää kalsiumin puutteen aiheuttamaa osteoporoosia säätelemällä rasva-aineenvaihduntaa.Nutr Metab (Lontoo), 2023, 20(1): 6.
[9] ZHENG HX, CHEN DJ, ZU YX ym. Kondroitiinisulfaatti ehkäisee STZ:n aiheuttamaa diabeettista osteoporoosia alentamalla verensokeria, vähentämällä oksidatiivista stressiä, estämällä tulehdusta ja säätelemällä OPG/RANKL-ilmentymistä.Int J Mol Sei, 2020, 21(15): 5303.
[10] STELLAVATO A, RESTAINO OF, VASSALLO V, et al. Kondroitiinisulfaatti USA:n ravintolisissä verrattuna farmaseuttisiin tuotteisiin: analyyttinen sormenjälki ja mahdollinen anti-inflammatorinen vaikutus ihmisen osteoartriittisiin kondrosyytteihin ja synoviosyytteihin.Pharmaceutics, 2021, 13(5): 737.
[11] SODHI H, PANITCH A. Glykosaminoglykaanit kudostekniikassa: katsaus.Biomolekyylit, 2020, 11(1): 29.
[12] QI SS, SHAO ML, SUN Z et al. Kondroitiinisulfaatti lievittää diabeettista osteoporoosia ja korjaa luun mikrorakennetta hapettumisenesto-, tulehdusta ja luun aineenvaihduntaa säätelemällä.Etuendokrinoli (Lausanne), 2021, 12: 759843.
[13] 张冬雪,曲帅,王明月,等．淫羊藿总黄酮联合骨营养剂抗骨质疏松作用探讨．中国骨质疏松杂志, 2023, 29(12): 1797.
[14] LI S, LIANG P, CHEN J et ai. Dendrobiini edistää luun muodostumista kanonisen Wnt/-catenin-signalointireitin kautta ja ehkäisee postmenopausaalista osteoporoosia.Front Pharmacol, 2025, 16: 1616070.
[15] ZHAO HY, YU F, WU W. Uusia näkökulmia postmenopausaaliseen osteoporoosiin: sirtuiinien ja oksidatiivisen stressin mekanismit ja mahdolliset terapeuttiset strategiat.Antioksidantit (Basel), 2025, 14(5): 605.
[16] RAI AD, SHERPA ML, SINGH A, et al. Luun alkalisen fosfataasin ja virtsan hydroksiproliinimääritys pre- ja postmenopausaalisilla naisilla Sikkimin osavaltiossa ja sen korrelaatio luun mineraalitiheyden kanssa.J Keski-iän terveys, 2021, 12(4): 304.
[17] 叶丽娟．恒古骨伤愈合剂治疗骨质疏松症的药效学研究．昆明:云南中医药大学,2024．
[18] DESAI S, BABARIA P, NAKARANI M, et ai. Osteoporoottinen vaikutusHemidesmus indicusLinn. rotilla, joilta on poistettu munasarjat.J Etnopharmacol, 2017, 199: 1.
[19] LI J, LU LY, LIU L et ai. Luuytimen rasvakudoksen ainutlaatuinen rooli munasarjojen poiston aiheuttamassa luukadossa hiirillä.Endokriininen, 2024, 83(1): 77.
[20] LIU XY, ZHANG SS, LU XM, et al. Metabonominen tutkimus osteoporoosin vastaisesta vaikutuksestaRhizoma Drynariaeja sen toimintamekanismi käyttämällä UPLC-MS/MS:ää.J Etnopharmacol, 2012, 139(1): 311.
[21] EISENHAUER A, MÜLLER M, HEUSER A et al. Kalsiumin isotooppisuhteet veressä ja virtsassa: uusi biomarkkeri osteoporoosin diagnosointiin.Bone Rep, 2019, 10: 100200.
[22] MEI ZD, DONG X, QIAN Y ym. Metabomin ja luun mineraalitiheyden välinen yhteys Kiinan väestössä.EBiMedicine, 2020, 62: 103111.
[23] MA YS, HOU ZJ, LI Y ym. Eleuterosidi E:n farmakologisten mekanismien paljastaminen postmenopausaalista osteoporoosia vastaan ​​UPLC-Q/TOF-MS-pohjaisen metabolomiikan avulla.Front Pharmacol, 2020, 11: 1316.
[24] XU HC, NOZAKI K, YU ZN, et ai. Titaani-implanttien pinnan funktionalisointi kontrolloidusti vapautuvalla glutationikonjugaatilla antioksidantteja ja osteogeneesiä varten.J Mater Res Technol, 2025, 34: 2872.
[25] LI X, WANG YF, GAO MT, et al. Aineenvaihduntaan perustuvat suhteet munuaisten, luuytimen ja rottien luun välillä, joilla on postmenopausaalinen osteoporoosi.Luu, 2022, 156: 116306.
[26] YANG KD, WANG XC, ZHANG C, et al. Metformiini parantaa HPRT1-kohdennettua puriinimetaboliaa ja korjaa NR4A1-välitteistä autofagista virtaa moduloimalla FoxO1-nukleosytoplasmaa sukkulattaessa vaihdevuosien jälkeistä osteoporoosia.Cell Death Dis, 2024, 15(11): 795.
[27] SAVIO LEB, LEITE-AGUIAR R, ALVES VS, et al. Purinerginen signalointi redoksibiologian moduloinnissa.Redox Biol, 2021, 47: 102137.
[28] LIU DF, MA LY, ZHENG JH, et al. Isopsoraleeni parantaa glukokortikoidien aiheuttamaa osteoporoosia säätelemällä puriinimetaboliaa ja edistämällä cGMP/PKG-reitin välittämää osteoblastien erilaistumista.Curr Drug Metab, 2024, 25(4): 288.
[29] BELLONE F, CINQUEGRANI M, NICOTERA R, et al. K-vitamiinin rooli kroonisessa munuaissairaudessa: keskittyminen luuston ja sydän- ja verisuoniterveyteen.Int J Mol Sei, 2022, 23(9): 5282.
[30] MOSCHONIS G, HEUVEL EG VAN DEN, MAVROGIANNI C, et ai. D-vitamiinilla rikastetun gouda-tyyppisen juuston kulutuksen vaikutus luuaineenvaihdunnan biokemiallisiin markkereihin postmenopausaalisilla naisilla Kreikassa.Ravinteet, 2021, 13(9): 2985.
[31] DAI ZL, KOH W P. B-vitamiinit ja luuston terveys - katsaus nykyiseen näyttöön.Ravinteet, 2015, 7(5): 3322.
[32] ZWICKENPFLUG W, HORNUNG F, HOLLAUS A, et al. B3-vitamiinin ja NAD+^++ biosynteesi: HepG2-solujen inkubointi alkaloidin myosmiinin kanssa.J Sci Food Agric, 2024, 104(11): 6844.
[33] CHEN LJ, XING XK, ZHANG PF, et al. NAD(H) ja NADP(H) homeostaattinen säätely soluissa.Genes Dis, 2024, 11(5): 101146.
[34] YOON H, PARK SG, KIM HJ, et al. Nikotiiniamidi tehostaa osteoblastien erilaistumista aktivoimalla mitokondrioiden antioksidanttipuolustusjärjestelmää.Exp Mol Med, 2023, 55(7): 1531.
[35] DIAS P, SIATKA T, VOPRŠALOVÁ M, et al. B-kompleksin vitamiinien biologiset ominaisuudet, osa 2-vitamiinit B(6) ja B(7) (biotiini, H-vitamiini).Nutr Res Rev, 2025, 38(2): 791.
[36] DEIANA M, MALERBA G, CARBONARE LD, et al. Fyysinen aktiivisuus estää ruston hajoamisen: metabolomiikkatutkimus osoittaa B6-vitamiinin osallistumisen.Solut, 2019, 8(11): 1374.
[37] WELAN R. B6-vitamiinin vaikutus osteoporoosin murtumiin.J Bone Metab, 2023, 30(2): 141.
[38] YANG F, DONG X, MA FX, et al. Tubson-2-keiton interventiovaikutukset rotille, joilta on poistettu munasarjat, määritettynä verkkofarmakologian ja metabolomiikan yhdistelmällä.Front Pharmacol, 2020, 11: 581991.
[39] CUI YB, YANG ZJ, YU GS, et al. Naringin edistää osteoblastien erilaistumista ja parantaa osteoporoosia hiirillä, joilta on poistettu munasarjat.Sci Rep, 2025, 15(1): 12651.
[40] 陈泽彬,罗兰兰,石心怡,等．杜仲汤含药血清通过 L-VGCCs促进成骨细胞增殖和分化的机制研究．中国中药杂志, 2025, 50(12): 3335.
[41] YAN CP, WANG XK, JIANG K et alFront Cell Dev Biol, 2022, 10: 883228.
[42] 梁广胜, 陈伟才, 殷嫦嫦,等．淫羊藿总黄酮对大鼠骨髓间充猋娖分胞成鴨干细胞成黄酮对BMP-2/Runx2/OSX 通路的影响．中国中西医结合杂志, 2016, 36(5): 614.