Aptamer-sovellukset neurotieteessä, osa 1

Abstrakti:

Koska neurologiset sairaudet ovat yleisin vammaisuuden syy, ne ovat saaneet paljon huomiota maailmanlaajuiselta terveysyhteisöltä.

Hermosto on tärkeä osa ihmiskehoa. Se on vastuussa ihmisen havainnoista, ajattelusta, liikkeestä, psykologiasta ja tunteista. Joillakin ihmisillä voi kuitenkin olla neurologisia ongelmia, jotka vaikuttavat heidän muistiinsa. Hermoston sairaudella tarkoitetaan keskushermoston ja ääreishermoston patologisia muutoksia, kuten aivohalvaus, Parkinsonin tauti, Alzheimerin tauti jne. Nämä sairaudet vaikuttavat muistiin, mutta me kaikki voimme voittaa ne aktiivisin menetelmin. Paranna sitä.

Ensimmäinen on aivohalvaus. Tilastojen mukaan miljoonat ihmiset kärsivät aivohalvauksesta vuosittain, ja yksi yleisimmistä oireista on muistin menetys. Aivohalvaus on erittäin vahingollinen keholle, koska se vaikuttaa niihin aivojen osiin, jotka toimittavat happea ja verta. Voimme kuitenkin ehkäistä aivohalvauksia harjoittelemalla ja muuttamalla ruokailutottumuksiamme. Esimerkiksi oikea liikunta, normaalipainon ylläpitäminen ja terveellinen ruokavalio voivat tehokkaasti vähentää aivohalvauksen riskiä ja ylläpitää siten parempaa muistia.

Seuraavana on Parkinsonin tauti. Tämä on neuronien kuoleman aiheuttama liikehäiriösairaus. Liikkumisen lisäksi Parkinsonin tauti voi vaikuttaa myös muistiin. Tutkimukset osoittavat, että useimmat potilaat kehittävät kognitiivisia häiriöitä, mukaan lukien muistin menetys. Potilaat voivat kuitenkin hidastaa taudin etenemistä erilaisilla toimenpiteillä, kuten säännöllisellä ammatillisella hoidolla ja kuntoutuskoulutuksella. Harrastukset, kuten musiikin kuuntelu, lukeminen ja uusien taitojen oppiminen, voivat myös olla hyödyllisiä aivojen rentouttamisessa ja muistin palautumisessa.

Lopuksi on Alzheimerin tauti. Se on sairaus, joka aiheuttaa kognitiivisia häiriöitä, ja muistin menetys on yksi ilmeisimmistä ja yleisimmistä oireista. Alzheimerin tauti on kuitenkin myös sairaus, joka voidaan lievittää. Tutkimukset osoittavat, että liikunta, terveellinen ruokavalio, uusien taitojen oppiminen ja vapaaehtoistyö voivat hidastaa taudin etenemistä ja parantaa muistia.

Meidän tulee aina säilyttää positiivinen asenne ja ottaa aktiivisia menetelmiä neurologisten sairauksien ehkäisemiseksi ja hoitamiseksi muistimme parantamiseksi. Vaikka sairasimmekin, voimme ryhtyä erilaisiin toimenpiteisiin parantaaksemme vastustuskykyämme ja kykyämme torjua tautia. Niin kauan kuin jatkamme, löydämme paremman, terveellisemmän tavan ehkäistä ja hoitaa muistinmenetystä. Voidaan nähdä, että meidän on parannettava muistia, ja Cistanche deserticola voi parantaa muistia merkittävästi, koska Cistanche deserticola on perinteinen kiinalainen lääkeaine, jolla on monia ainutlaatuisia vaikutuksia, joista yksi on parantaa muistia. Cistanche deserticolan teho johtuu sen sisältämistä useista aktiivisista ainesosista, mukaan lukien tanniinihappo, polysakkaridit, flavonoidiglykosidit jne. Nämä ainesosat voivat edistää aivojen terveyttä monin eri tavoin.

Napsauta Know-painiketta parantaaksesi lyhytaikaista muistia

Yli miljardi ihmistä kärsii jostakin seuraavista neurologisista sairauksista: dementia, epilepsia, aivohalvaus, migreeni, aivokalvontulehdus, Alzheimerin tauti, Parkinsonin tauti, multippeliskleroosi, amyotrofinen lateraaliskleroosi, Huntingtonin tauti, priontauti tai aivokasvaimet. Diagnoosi- ja hoitovaihtoehdot ovat rajalliset monille näistä sairauksista.

Aptameerit, jotka ovat pieniä ja ei-immunogeenisiä nukleiinihappomolekyylejä, joita on helppo kemiallisesti modifioida, tarjoavat mahdollisia diagnostisia ja terapeuttisia sovelluksia näiden tarpeiden täyttämiseksi.

Tämä katsaus kattaa uraauurtavia aptameerien soveltamista koskevia tutkimuksia, jotka osoittavat lupaavuutta neurologisten häiriöiden tulevaisuuden diagnostiikassa ja hoidossa, jotka aiheuttavat yhä vakavampia maailmanlaajuisia terveyshaasteita.

Avainsanat: aptameeri; neurotiede; neurologiset sairaudet; neurologiset häiriöt; neurotoksiinit; syöpä.

1. Johdanto

Aptameerit ovat yksijuosteisia DNA-, RNA- tai synteettisiä XNA-molekyylejä, jotka voivat laskostua ainutlaatuisiksi kolmiulotteisiksi (3D) rakenteiksi, joiden avulla ne sitovat kohdemolekyyleihinsä suurella spesifisyydellä ja affiniteetilla [1,2].

Lähestymistapa aptameerien valintaan saavutettiin vuonna 1990 kolmessa erillisessä ryhmässä [3–5]. Menetelmä tunnetaan nykyään nimellä Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment (SELEX). Sittemmin monia aptameerejä on valittu käytettäviksi perustieteen aloilla, ja yhä useammat aptameerit ovat alikehittyneitä sovelluksiin terapiassa, diagnostiikassa ja kuvantamisessa [6–10].

SELEX-menetelmä simuloi darwinilaista evoluutiota in vitro. Se sisältää useita valintakierroksia, ja jokaisen kierroksen jälkeen suoritetaan "sopivimpien" oligonukleotidien (oligojen) eksponentiaalinen monistus.

Yksi perinteisen SELEX-kierros sisältää kolme vaihetta järjestyksessä (1) halutun kohdemolekyylin inkuboiminen oligojoukon kanssa, jossa on 20–60 nukleotidin keskusalue satunnaistetun sekvenssin kanssa, jota ympäröivät vakiosekvenssin terminaaliset alueet, jotka ovat templaatteja myöhemmille polymeraasiketjureaktioille (PCR:ille) ),(2) vangitsee poolissa olevat oligot, jotka onnistuneesti sitovat kohdetta, ja (3) monistavat siepatut oligot joko PCR:llä tai käänteistranskriptio-PCR:llä (rt-PCR), oligo-, DNA- tai RNA-tyypistä riippuen.

Mukana ovat myös vastavalintakierrokset, joissa nukleiinihappopooli johdetaan tyhjän tukimatriisin yli ilman haluttua kohdetta tai tukimatriisin yli yhden tai useamman muun molekyylin kanssa, jotka saattavat olla rakenteellisesti sukua kohdemolekyylille.

Vastavalinnassa oligot, jotka eivät sido tukimatriisia tai rakenteellisesti samankaltaisia ​​molekyylejä, vangitaan ja jatkuvat useammilla SELEX-kierroksilla.

Vastavalintaa suoritetaan moniin tarkoituksiin, kuten sellaisten oligojen eliminoimiseksi, jotka ovat vuorovaikutuksessa (1) tukimatriisin kanssa, (2) analogien tai molekyylien kanssa, jotka ovat rakenteellisesti sukua kohteeseen tai (3) molekyylejä, joita on korkeina pitoisuuksina biologisessa matriisissa (kuten seerumi). tai kudosuute), jossa valittu aptameeri toimii.

Vastavalinnan päätavoite on lisätä aptameerispesifisyyttä halutulle kohteelle muihin mahdollisiin molekyylikilpailijoihin verrattuna. Perinteisen SELEXin lisäksi äskettäin kehitetty rakennevaihtava SELEX on tulossa suosituksi [11–13].

Tässä lähestymistavassa oligojen on muutettava rakenteitaan, kun ne ovat vuorovaikutuksessa kohteen kanssa, erottuakseen komplementaarisesta sieppaussekvenssistä. Tämä varmistaa, että valittujen aptameerien rakenne muuttuu ligandin sitoutuessa. Muita vaihtoehtoisia SELEX-menetelmiä on kehitetty mukaan lukien CE-SELEX, Cell-SELEX ja in vivo SELEX, kuten taulukossa 1 on yhteenveto.

On täysin mahdollista yhdistää erilaisia ​​SELEX-toimenpiteitä vieläkin monimutkaisempien tekniikoiden kehittämiseksi. Sen jälkeen kun SELEX on valinnut aptameerit, niitä modifioidaan edelleen niiden spesifisyyksien ja affiniteettien parantamiseksi useilla lähestymistavoilla, joita voidaan kokonaisuudessaan kutsua kypsytykseksi.

Aptameerien valinnassa ja kypsytyksessä on otettava huomioon useita näkökohtia. Ensinnäkin aptameerien rakenteisiin ja aptameeri-kohdevuorovaikutuksiin vaikuttavat lämpötila ja puskurikomponentit, mukaan lukien ionit, ionivahvuus ja pH.

Siten yksi SELEX-suunnittelun tärkeimmistä kohdista on jäljitellä ympäristöä (biologinen matriisi tai suola/puskurikoostumus) valinnan aikana, jossa aptameerin molekyylikohde löytyy ja aptameerin ja kohteen välinen vuorovaikutus tapahtuu.

Sopivien puskurikoostumusten ja inkubointilämpötilojen valitseminen varmistaa valittujen aptameerien optimaalisen suorituskyvyn olosuhteissa, joissa niitä käytetään [4,30–32].

Toiseksi aptameerien stabiilisuutta on ehkä parannettava, koska DNA- ja RNA-aptameerit ovat mahdollisia nukleaasihyökkäysten kohteita. Tämä koskee erityisesti RNA:ta 20OH-ryhmän vuoksi, jota ribonukleaasit käyttävät nukleiinihapporungon fosfaatin elektrofiilisessä hyökkäyksessä hydrolyysissä.

Siten RNA on labiilimpi korkeille lämpötiloille ja pH:lle kuin DNA. Aptameerit voidaan kypsyä jälkivalinnan kemiallisilla modifikaatioilla tämän herkkyyden voittamiseksi. Tällaiset modifikaatiot voivat kuitenkin johtaa aptameerin spesifisyyden ja/tai affiniteetin menettämiseen.

Siksi on yleensä parempi sisällyttää modifioituja nukleotideja SELEXin aikana. Monet mahdolliset aptameerimuunnokset on lueteltu taulukossa 2.

Voidaan valita aptameerejä, jotka sitovat selektiivisesti useimpia viruksia, soluja, bakteereja, proteiineja, toksiineja ja peptidejä korkealla affiniteetilla [45–48]. Niitä voidaan käyttää useita kertoja ilman havaittavia toiminnan häiriöitä. Toisin sanoen ne voidaan erottaa kohteistaan ​​myöhempää käyttöä varten.

Sitä vastoin vasta-aineita voidaan käyttää vain muutaman kerran, ennen kuin ne menettävät toiminnallisuuden. Nukleiinihappoaptameerit voidaan myös kypsyä stabiileiksi kuin vasta-aineet ja entsyymit, erityisesti korkeammissa lämpötiloissa [2].

Lisäksi, kun aptameerin sekvenssi tunnetaan, sen kemiallinen synteesi ja puhdistaminen homogeeniseksi ovat erittäin toistettavia ja edullisia. Nämä ominaisuudet antavat aptameereille mahdollisuuden korvata vasta-aineita anturiyksiköiden komponentteina [49].

Aptameerien rakenteiden joustavuus ja niiden kyky "peittää" aptameerisekvenssin alueita komplementaarisilla oligoilla tarjoaa vaihtoehtoja signalointiin, jotka mahdollistavat aptameerien sisällyttämisen moniin anturialustoille, jotka eivät ole helposti mukautettavissa vasta-aineille. Nämä ominaisuudet motivoivat aptameeripohjaista biosensorien kehittämistä [50–52].

Uusien diagnoosityökalujen kehittäminen on yksi tärkeimmistä biosensorikentän osa-alueista, ja monet tutkijat pyrkivät luomaan helppoja, tehokkaita ja halvempia menetelmiä varhaisen diagnoosin ja täsmälääketieteen saavuttamiseksi.

Aptameerien sisällyttäminen biosensoreihin (nimeltään "aptasensorit") juurtui 1990-luvulla.

Varhainen esimerkki aptameereistä biotunnistuselementteinä on optinen biosensori, joka käytti fluoresoivasti leimattuja aptameereja ihmisen neutrofiilien elastaasia vastaan ​​homogeenisessa määrityksessä [53].

Sen jälkeen on raportoitu monenlaisia ​​aptasensorirakenteita, joista useimmissa on aptameerit kiinteillä alustoilla ja sähkökemiallisia, optisia, mekaanisia ja akustisia signaaleja [45,54–56]. Joitakin esimerkkejä käsitellään myöhemmin tässä artikkelissa.

Aptameereja on käytetty myös terapiassa. Muutokset, jotka johtavat pidentyneisiin puoliintumisaikaan ja parantuneeseen farmakokinetiikkaan, tekevät joistakin aptameereistä hyviä vaihtoehtoja kliiniseen käyttöön. Verrattuna vasta-aineisiin, aptameerit ovat paljon vähemmän immunogeenisiä, ja niiden toimintaa voidaan estää käänteiskomplementaarisilla oligonukleotideilla (Munzar et al., 2019).

Nämä tärkeät ominaisuudet suosittelevat aptameerien kehittämistä terapeuttisiksi aineiksi. Macugen (pegaptanibinatrium), joka tunnistaa selektiivisesti verisuonten endoteelin kasvutekijän (VEGF), oli ensimmäinen aptameeri, joka hyväksyttiin terapeuttiseksi aineeksi (Tobin, 2006).

Sittemmin useat aptameerit ovat saavuttaneet eri vaiheita kliinisissä tutkimuksissa, joissa niitä testataan sairauksien, kuten pienisoluisen keuhkosyövän, von Willebrandfaktoriin liittyvän häiriön, angiomien ja munuaissolukarsinoomien, hoitoon [51,57–60].

Toinen mahdollinen aptameerien terapeuttinen sovellus liittyy kuljetusjärjestelmiin [61,62]. Tehokkaiden tulosten saavuttamiseksi näissä systeemeissä aptameerien tulee tunnistaa solun pintaproteiinit natiivimuodoissaan.

Cell-SELEX kehitettiin valikoimaan solupinnan proteiineja vastaan, joita on usein vaikea puhdistaa natiivimuodossaan [63]. Aptameeri, joka tunnistaa asellun pintaproteiinin, voi kooptoida reseptorin sisäistääkseen aptameeriin kiinnittyneen lastin. Tällä menetelmällä voidaan valita aptameerit reseptoreihin, jotka ilmentyvät ensisijaisesti yhdessä solutyypissä ja jotka voidaan kohdistaa in vivo [57].

Esimerkiksi anti-PSMA-aptameerejä (eturauhasspesifinen kalvoantigeeni) kehitettiin siRNA:iden kuljettamiseksi kasvaimiin hiirissä tai viljellyissä soluissa [62,64–66].

Neurotieteessä aptameerien käyttö on toistaiseksi ollut rajoitettua, vaikkakin sillä on hyvin laaja valikoima potentiaalisia sovelluksia. Aptameerien on raportoitu olevan mahdollisia hoitovaihtoehtoja hermoston rappeutumissairauksille, jotka johtavat keskushermoston (CNS) rakenteen ja toiminnan menettämiseen, mukaan lukien Alzheimerin tauti (AD), Parkinsonin tauti (PD), Creutzfeldt-Jakobin tauti, liikehermoston sairaudet ja Huntingtonin tauti. sairaus (HD) (kuva 1). Tällä hetkellä noin 50 miljoonaa ihmistä maailmassa kärsii dementiasta, jonka terveydenhuollon maailmanlaajuiset kustannukset ovat lähes biljoonaa dollaria vuodessa.

Tämä tekee dementioista yhden yhteiskuntamme suurimmista lääketieteellisistä ja taloudellisista ongelmista [67]. Myös Yhdistyneiden Kansakuntien ja Maailman terveysjärjestön mukaan yli 65-vuotiaiden maailman väestön arvioidaan kaksinkertaistuvan vuoteen 2050 mennessä.

Siksi iästä riippuvat hermostoa rappeuttavat sairaudet vaativat lisää menoja diagnosointiin ja hoitoon [67].

Nämä kriittiset vaatimukset menetelmille, jotka helpottavat varhaista diagnoosia ja uusia terapeuttisia sovelluksia, voitaisiin täyttää aptameerien avulla, mikä voisi myös olla ratkaisu joihinkin taustalla oleviin komplikaatioihin [68, 69].

Aptameereja kehitetään sovelluksiin aivojen kuvantamistekniikoissa (MRI, PET jne.), välittäjäaineiden visualisoinnissa, diagnoosissa ja aivokasvainten ja muiden aivoihin liittyvien sairauksien hoidossa. Monissa näistä lähestymistavoista aptameerit on leimattu radiomerkkiaineilla, kuten fluorilla-18 PET-kuvauksessa [70]. Tässä katsauksessa käsittelemme aptameerien soveltamisen saavutuksia ja haasteita aivojen kuvantamisessa ja hermostosairauksissa.

2. Molekyylien havaitseminen

2.1. Neurotoksiinin havaitseminen
Neurotoksiinit ovat kemiallisesti monipuolinen ryhmä farmakologisesti aktiivisia yhdisteitä. Niillä on selkeät biologiset vaikutukset organismien hermostoon, mutta ne eroavat kemiallisilta rakenteeltaan ja toimintamekanismilta.

Ne muuttavat toimintapotentiaalia ja häiritsevät hermoimpulssien siirtoa. Niiden ihmisten terveydelle ja ympäristölle aiheutuvien riskien arvioimiseksi oikein on välttämätöntä käyttää riittävän herkkiä tekniikoita niiden tarkkaan tunnistamiseen.

Nukleiinihappoaptameerejä on käytetty validoimaan näiden toksiinien läsnäolo vedessä ja biologisissa näytteissä korkealla herkkyydellä ja selektiivisyydellä [71]. On raportoitu tutkimuksia, jotka osoittavat botuliinineurotoksiinien (Botulinum A, E), saksitoksiinin, brevotoksiinin, parakvatin ja tetrodotoksiinin tarkan tunnistamisen aptasensorien avulla.

Botuliinin neurotoksiinit (BoNT:t) ovat tappavimpia hermomyrkkyjä, ja niitä voitaisiin mahdollisesti käyttää bioterrorismiaineina. Vastatakseen ratkaisevaan tarpeeseen herkän, tehokkaan ja reaaliaikaisen BoNT:iden havaitsemisjärjestelmän suhteen, sooli-geelipohjaista SELEXiä käytettiin DNA-aptameerien eristämiseen botuliinin neurotoksiinityyppiä E (BoNT-E) vastaan ​​[47].

Viidennen kierroksen jälkeen aptamer-kandidaattisekvenssit analysoitiin seuraavan sukupolven sekvensoinnilla (NGS), ja korkeataajuiset aptameerit karakterisoitiin. Näissä aptameeriperheissä aptameeriBT5.6:lla oli korkea affiniteetti, 53 nM Kd, BoNT-E:lle ja se immobilisoitiin grafeenioksidialustalle. Tämä anturi näytti 0,83 nM tunnistusrajan (LoD) BoNT-E:lle.

Brevotoksiinit (BTX) ja saksitoksiinit ovat meren hermomyrkkyjä, jotka aiheuttavat neurologista simpukkamyrkytys (NSP). BTX:ille on ominaista korkea toksisuus ja NSP:n nopea puhkeaminen. Niiden analysointiin liittyvät tekniset vaikeudet ovat kannustaneet tutkijoita etsimään vaihtoehtoisia, tehokkaita ja halpoja havaitsemismenetelmiä näille vahvoille hermomyrkkyille.

Tätä tarkoitusta varten kehitettiin sähkökemiallinen aptasensori havaitsemaan BTX-2, jota varten nämä valitut DNA-aptameerit karakterisoitiin käyttämällä sähkökemiallista impedanssispektroskopiaa (EIS) ja fluoresenssia.

Aptameeri BT10, jonka affiniteetti oli 42 nM BTX-2:n suhteen, liitettiin leimattomaan kilpailevaan impedimetriseen biosensoriin, joka osoitti 95 pM:n BTX-2:n havaitsemisrajan.

Tämä aptasensori pystyi havaitsemaan BTX-2 piikkimaisessa äyriäisuutteessa luotettavalla vasteella äyriäismatriisin läsnä ollessa [72]. Toisena meren hermomyrkkyluokkana saksitoksiini luonnehdittiin kansanterveydelliseksi merkitykseksi.

Uusia tutkimuksia jouduttiin kehittämään sopiviksi vaihtoehdoiksi nykyisten järjestelmien teknisten ja eettisten ongelmien vuoksi. Tämän tarpeen täyttämiseksi kehitettiin etiketöintitön optinen biokerrosinterferometrinen aptasensori. Biosensorin havaitsemisraja on 1,66 nM saksitoksiinille, korkea selektiivisyys ja herkkyys, hyvä stabiilisuus ja nopea havaitsemiskyky [73].

Samoin kuin meren myrkyt, käärmeen puremat aiheuttavat hermomyrkkyjä, jotka ovat tehokkaimpia ja tappavimpia myrkkyjä. Valitettavasti perinteinen käärmeenpuremien diagnostiikka, joka perustuu veren hyytymismäärityksiin ja kliinisiin oireisiin, ei pysty antamaan tarkkaa diagnoosia. Myös eräriippuvaiset vasta-aineiden suorituskyvyn vaihtelut vaikeuttavat niiden käyttöä diagnostiikassa.

Korkean affiniteetin typistetty versio -Tox-FL-aptameerista, joka valittiin alun perin Bungarus multicinctuksen (-Tox-T2) bungarotoksiinia vastaan ​​korkeammalla affiniteetilla (Kd=2,8 nM) kuin emo-Tox-FL:llä (18). nM), käytettiin entsyymikytketyssä aptameerimääritysmuodossa.

Tässä asetelmassa -Tox-T2-aptameeri pystyi havaitsemaan -toksiinin vain 2 ng:sta raakaa myrkkyä, mikä osoitti sen potentiaalin Bungarus caeruleus -myrkyn havaitsemiseen [74].

2.2. Neurotransmitterin tunnistus

Aivojen toiminnallisten monimutkaisuuden tutkimiseen voidaan käyttää välittäjäaktiivisuuden ja signalointireittien seurantaa. Neurotransmitterit ovat välttämättömiä tiedonsiirrossa solujen välillä ja niillä on avainrooli neurologisissa sairauksissa, kuten epilepsiassa, Parkinsonin taudissa (PD) ja Alzheimerin taudissa (AD).

Useissa tutkimuksissa dopamiinille, epinefriinille tai serotoniinille spesifisiä aptameerejä on käytetty kehittämään aptameeripohjaisia ​​biosensoreja välittäjäaineiden havaitsemiseen in vivo ja in vitro [75].

Katekoliamiinin välittäjäaine, dopamiini (DA) säätelee ihmisen aineenvaihduntaa sekä sydän- ja verisuoni- ja munuaisjärjestelmän toimintoja. Useiden neurodegeneratiivisten sairauksien, erityisesti PD:n, osoitettiin korreloivan suoraan DA:n epänormaalin aineenvaihdunnan kanssa [76].

Siten erittäin herkkien ja selektiivisten biosensorien kehittäminen DA-määritykseen on tärkeitä inbiologisia järjestelmiä. Ensimmäinen RNA-aptameeri DA:ta vastaan, dopa2, sitoi DA:ta affiniteetilla, jota edustaa Kd=2,8 nM [77].

Tätä aptameeriä käyttämällä leimaton sähkökemiallinen aptasensori, joka perustuu grafeeni-polyaniliini-komposiittikalvoon, havaitsi onnistuneesti DA:n epäinhimillisen seerumin läsnäolon, jonka LoD oli 1,98 pM [78]. Tuoreemmassa tutkimuksessa kehitettiin toinen DA-aptasensori, joka koostui DNA-aptameerista sensorina ja ruohokarpin ihon kollageenigrafeenioksidin (GCSC-GO) komposiitista anturina.

Komposiitti valmistettiin ultraäänikäsittelyllä ja karakterisoitiin infrapuna- (IR) ja Raman-spektroskopialla, atomiforemikroskoopilla ja EIS:llä. Tämä järjestelmä sisälsi aptameerin immobilisoinnin kollageeniin, mitä seurasi differentiaalinen pulssi voltammetria.

Vaikka aptasensori osoitti korkeamman LoD:n 0,75 nM verrattuna aikaisempaan sensoriin, jolla oli 2 pM, se osoitti suurta selektiivisyyttä DA:n läheisesti sukua oleville yhdisteille ja mittasi tarkasti DA:n 10 % seerumin läsnä ollessa [79].

Hiljattain raportoitu aptameereillä varustettu mikrouloke-anturi erilaisten molekyylien analysoimiseksi vapaalla leimalla, korkealla herkkyydellä ja selektiivisyydellä. Anturi koostuu joukosta 12 mikrouloketta, jotka on modifioitu tioloiduilla DA-aptameereillä, ja se käyttää kultananohiukkasia (AuNP), jotka on konjugoitu DNA-osaan, joka on komplementaarinen mikroulokkeen pinnalla olevan DAaptameerin kanssa.

AuNP-DNA-konjugaatit, jotka hybridisoituivat alun perin DA-aptameerin kanssa, vapautuvat, kun aptameeri sitoo DA:ta, mikä lisää ryhmän pintajännitystä noin 15-kertaiseksi ja lisää taipumista.

Järjestelmän alineaarinen vaste on alueella 0,5 - 4 µM DA:ta LoD:lla 77 nM. Sen spesifisyys osoitettiin 12 rakenteellisella ja toiminnallisella analogilla, mukaan lukien L-DOPA, joista yksikään ei aiheuttanut taipumaa [80].

For more information:1950477648nn@gmail.com