Abstrakti:Ultraviolettisäteily (UV) aiheuttaa ihon valovanhenemista, mikä johtaa ihon ryppyihin ja roikkumiseen reaktiivisten happilajien (ROS) tuotannon kautta. Tästä syystä suojaaminen valovanhenemiselta on tärkeä ominaisuus kosmeettisissa ja dermatologisissa tuotteissa. Luonnontuotteista johdetut biomateriaalit ovat erittäin haluttuja tulevina mahdollisina ainesosina, koska nämä biomateriaalit ovat usein turvallisia ja tehokkaita. Tässä tutkimuksessa pyrimme luonnehtimaan Pradosia multisite -tuotteen ihoa suojaavaa aktiivisuutta, jota perinteisesti käytetään auringonpolttaman ja eryteeman hoitoon. Määritimme Pradosia multisiten (Pm-ME) metanoliuutteen vapaita radikaaleja sieppaavat, anti-melanogeeniset ja kosteuttavat vaikutukset keratinosyyteissä (HaCaT-solut), melanosyyteissä (B16F10-solut) ja fibroblasteissa (ihmisen ihon fibroblastit (HDF)). ei-sytotoksiset pitoisuudet. Pradosia multisite metanoliuute sisältää kumarihappoa pääkomponenttina, ja uute osoitti suojaavaa aktiivisuutta UVB- ja H2O{8}}indusoitua sytotoksisuutta vastaan. Tämä uute tukahdutti myös metalloproteinaasien (MMP) ja syklo-oksigenaasin (COX)-2 ilmentymisen HaCaT-soluissa. Sirt-1-ekspression vähentyminen UVB- ja H2O2--käsitellyissä olosuhteissa saatiin HaCaT-soluista Pm-ME:n avulla. Tämä uutte osoitti merkittävää vapaita radikaaleja poistavaa aktiivisuutta 2,20 -kasino-bis (3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihappo) diammoniumsuola (ABTS) -määrityksen mukaan. Pm-ME lisäsi myös hyaluronihapposyntaasin (HAS) ja transglutaminaasin -1 (TGM-1) ilmentymistasoja HaCaT-soluissa, mikä viittaa oletettuun kosteuttavaan aktiivisuuteen. Mielenkiintoista on, että kollageenityypin 1 (Col1A1) geenin ilmentymisen ja sen promoottoriaktiivisuuden, reportterigeenimäärityksellä arvioituna, havaittiin lisääntyneen HDF- ja HEK293-soluissa. Samoin Pm-ME auttoi palauttamaan kollageenitasoja UVB- ja H2O2-hoidon jälkeen HDF-soluissa sekä vähensi melaniinin synteesiä ja erittymistä B16F10-melanoomasoluista, mikä saattaa viitata hyödylliseen valkaisevaan kosmeettiseen arvoon. p38-inhibiittori SB203580 ja JNK-inhibiittori SP600125 suppressoivat MMP-9- ja COX-2-ilmentymistä H2O2--käsitellyissä HaCaT-soluissa. Samoin ERK-inhibiittori U0126 esti HAS-2 Pm-ME/H2O2--käsitellyissä HaCaT-soluissa. Nämä havainnot viittasivat siihen, että Pm-ME saattoi kohdistaa JNK:n ja p38:n estoon ja ERK:n aktivaatioon. Siksi Pm-ME:llä voi olla vanhenemista ja melanogeenisiä ominaisuuksia säätelemällä mitogeeniaktivoitua proteiinikinaasia, mikä voisi olla hyödyllistä kosmeettisessa teollisuudessa.

Asiaankuuluvien tutkimusten mukaancistancheon yleinenyrttitunnetaan nimellä "ihmeyrtti, joka pidentää elämää". Sen pääkomponentti oncistanosidi, jolla on erilaisia ​​vaikutuksia, kutenantioksidantti, tulehdusta ehkäisevä, jaimmuunijärjestelmän toiminnan edistäminen. Mekanismi cistanchen jaihon valkaisuunpiilee cistanche-glykosidien antioksidanttisessa vaikutuksessa. Ihmisen ihon melaniinia tuottaahapettumistakatalysoima tyrosiinityrosinaasi. TheHapettumisreaktio vaatii hapen osallistumista, joten kehon happivapaista radikaaleista tulee tärkeä vaikuttajamelaniinituotantoon. Cistanche sisältää cistanosidia, joka on antioksidantti ja voi vähentää sen muodostumistavapaat radikaalitelimistöön, mikä estää melaniinin tuotantoa.

Napsauta Cistanche Tubulosa -lisäosaa valkaisuun

Kysy lisää:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Esittely

Iho on kehon suurin elin, joka toimii esteenä organismin ja ympäristön välillä ja on vastuussa ihon homeostaasin ylläpitämisestä ja viime kädessä organismin selviytymisen määräämisestä [1]. Iho on organisoitunut orvaskeden kanssa, dermis, jossa on adnexaalisia rakenteita, ja ihonalainen rasva [2]. Lisäksi iho on tärkeä jatkuvassa kommunikaatiossa immuuni-, hermo- ja endokriinisten järjestelmien kanssa [3], se suojaa enimmäkseen taudinaiheuttajilta, kemikaaleilta, fyysisiltä vaurioilta ja ultraviolettisäteilyltä (UV) [4]. Ultraviolettispektrit on jaettu kolmeen vyöhykkeeseen, UVC (200-280 nm), UVB (280-320 nm) ja UVA (320-400 nm) [5]. Näistä UVB absorboituu pääasiassa ihon epidermiksen ylempiin kerroksiin sekä papillaarinahkaan, kun taas UVA tunkeutuu retikulaariseen dermiin 1000 kertaa heikommin erilaisten biologisten vaikutusten aikaansaamisessa UVB:hen verrattuna [5]. Vaikka UVC on hyvin reaktiivista ja absorboituu marraskeeseen, se poistetaan suurimmaksi osaksi otsonikerros ja ilmakehä. Tärkeänä UV-säteilyn lähteenä UVB voi johtaa reaktiivisten happilajien (ROS), kuten vetyperoksidin (H2O2) tuotantoon aktivoimalla ROS:ia tuottavia entsyymejä, mukaan lukien NADPH-oksidaasin, ksantiinioksidaasin ja D-aminohappooksidaasin [6– 8] ja ihon valovanhenemisen induktio, joka johtaa ihon ryppyihin ja roikkumiseen [9,10]. Lisäksi oksidatiivisen stressivasteen on raportoitu aiheuttavan erilaisia ​​solukomponenttivaurioita, kuten solukalvon lipidejä, proteiineja ja nukleiinihappoja [11]. Nämä vaurioituneet ihosolut voivat käynnistää tulehdusvasteita, jotka johtavat mahdollisiin vaurioihin, jotka ilmenevät kroonisesti altistuneessa ihossa [12].

Oksidatiivinen stressi indusoi tulehduksellisten ja redox-herkkien transkriptiotekijöiden, ydintekijän (NF)-κB:n ja aktivaattoriproteiinin (AP)-1 ja niiden ylävirran signaalientsyymien, mukaan lukien mitogeeniaktivoidut proteiinikinaasit (MAPK:t), kuten solunulkoiset, aktivoitumisen. signaalisäädellyn kinaasin (ERK), p38:n ja c-Jun-N-terminaalisen kinaasin (JNK) AP-1-reitillä tai κB:n (IκB ), IKB-kinaasin (IKK / ) ja NF-κB-reitin AKT liittyy tulehduksen ja ryppyjen muodostumiseen [13]. Solunulkoisen signaalin säätelemä kinaasi välittää normaalisti soluvasteita, jotka liittyvät kasvutekijöihin, JNK:hen, ja p38-välitteisiä soluvasteita, jotka liittyvät sytokiineihin ja fyysiseen stressiin [14]. Mitogeenin aktivoimat proteiinikinaasit voivat myös indusoida proteolyyttisten matriksimetalloproteinaasien (MMP) tuotantoa [15], jotka indusoivat kollageenin hajoamista ja vähentävät siten ihon kimmoisuutta [16]. Mitä tulee näihin komponentteihin, antioksidanttiset komponentit tai uutteet, kuten ginsenosidi, kurkumiini, epikatekiini, asiatikosidi, ziyuglykosidi I, magnololi, gallushappo, hydroksikavikoli, hydroksikanelihapot, glysyrritsiinihappo, mangiferiini, mirko, rosmariinihappo, GF1K-tektorigeniini, ja, Spartium junceum L. -seuraajien vesialkoholiuutetta on käytetty ihon ikääntymistä ehkäisevien tuotteiden kehittämiseen [17–21]. Koska oksidatiivinen stressi tunnetaan ihmisen sairauksien ja ikääntymisprosessien pääasiallisena syynä, joka vaikuttaa pitkäikäisyyteen, ihmisten ruokavaliossa olevat sekundaariset bioaktiiviset metaboliititaantioksidanttisia ominaisuuksiapidetään arvokkaina ainesosina [22,23].

Muita valon ikääntymiseen liittyviä geenejä ovat syklo-oksigenaasi-2 (COX-2) ja Sirt-1. Syklo-oksigenaasi-2 on yleensä yli-ilmentynyt esipahanlaatuisissa UV-indusoiduissa ihovaurioissa [24], ja sen esto voi vähentää pahanlaatuista transformaatiota orvaskessä [25]. Sirt-1-ilmentyminen voi estää solujen apoptoosia ja lisätä solujen eloonjäämistä [26]. Toinen suojamekanismi UVB-säteilyä vastaan ​​on melaniinin tuotanto, pigmentti, joka syntetisoituu melanosyyteissä ja erittyy edelleen orvaskeden keratinosyytteihin [1]. Melaniinia tuotetaan L-tyrosiinin hapettuessa ja sen jälkeen muuttumalla L-dihydroksifenyylialaniiniksi (L-DOPA) [6] katalysoimalla kuparista riippuvaisella tyrosinaasientsyymillä [27]. Suojaustoiminnastaan ​​huolimatta melaniinin liiallinen tuotanto voi aiheuttaa ikäpisteitä [28], melismaa ja hyperpigmentaatiota [29]. Nykytrendin vuoksi, jossa vaaleat ihovärit pidetään kauneuden standardina, ihon valkaisuvalmisteet, joilla saadaan aikaan joko hyperpigmentoituneiden leesioiden valkaisu tai ihon valkaisu, ovat tulleet erittäin halutuiksi lääke- ja kosmetiikkateollisuudessa [29]. Näin ollen on suunnattu huomattavia ponnisteluja sellaisten valmisteiden kehittämiseen, jotka vähentävät melaniinin synteesiä [30]. Koska ihon ikääntyminen liittyy ihon kosteuden menettämiseen, tärkeä näkökohta terveen ihon ylläpitämisessä on riittävä kosteutus [31]. Hyaluronihappo (HA), korkean molekyylipainon omaava glykosaminoglykaani, jolla on hydrofiilisiä ominaisuuksia, edistää ihon kosteutta ja plastisia ominaisuuksia säätelemällä hyaluronihapposyntaasien (HAS) ilmentymistä [32]. Toinen tärkeä geeni ihossa on kollageeni, joka tukee epidermaalisia rakenteita [33] ja on siten vastuussa ihon lujuudesta ja kimmoisuudesta [34] ja jonka hajoaminen johtaa sekä ihon roikkumiseen että ryppyihin. Lisäksi transglutaminaasi-1 (TGM-1) on epidermaalisesti konstitutiivisesti ilmentyvä entsyymi, joka katalysoi sarveistunutta epidermaalisen soluvaipan muodostumista ja auttaa estämään veden menetystä [35,36].

Sapotaceae-perhe on levinnyt pääasiassa Aasian ja Meso-Amerikan trooppisille ja subtrooppisille alueille. Monet Sapotaceae-perheen lajit tuottavat syötäviä hedelmiä, joilla on korkea taloudellinen arvo. Näitä hedelmiä on käytetty lääketieteellisiin tarkoituksiin. Erityisesti siemenet sisältävät runsaasti ravinteita, kasvirasvoja, proteiineja ja muita hyödyllisiä yhdisteitä. Esimerkiksi mameyöljyä on perinteisesti käytetty ihonhoidossa, auringonpolttamien ja eryteeman hoitoon [37]. Pradosia-musiikki kuuluu Sapotaceae-perheeseen, jonka öljyä on perinteisesti käytetty ihon arpien parantamiseen [38]. Sen ominaisuuksia ei kuitenkaan ole vielä tieteellisesti todistettu. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli siksi määrittää P. mutisiin mahdollinen arvo ihonhoidossa, kosmetologiassa ja farmakologiassa.

2. Tulokset

2.1. Pm-ME karakterisointi ja sen vaikutus solujen elinkykyyn

Pm-ME ei estänyt elinkelpoisuutta 100 µg/ml asti, mutta vähensi hieman elinkelpoisuutta pitoisuudella 200 µg/ml HaCaT-, B16F10- ja ihmisen ihofibroblastisoluissa (HDF) 3-(4,{{) 7}}dimetyylitiatsoli-2-yyli)-2,5-difenyylitetratsoliumbromidi (MTT) -määritys (kuva 1a–c). Ultrakorkeapainenestekromatografiaa (UHPLC) ja nestekromatografiaa (LC)/massaspektrometriaa käyttämällä havaittiin, että pääyhdiste Pm-ME:ssä oli kumarihappo 4,27 minuutin kohdalla (kuvio 1d).

2.2. Pm-ME:n suojaava vaikutus UVB- ja H2O2-vaurioita vastaan

Sen määrittämiseksi, suojaako Pm-ME HaCaT-soluja UVB- ja H2O2--indusoidun valovanhenemisen aiheuttamilta vaurioilta, solut esikäsiteltiin erilaisilla Pm-ME-pitoisuuksilla (0-100 µg/ml) ennen altistusta UVB tai H2O2. Kuva 2a osoittaa, että UVB-säteily vähensi kiinnittyneiden HaCaT-solujen määrää, kun taas Pm-ME lisäsi solujen kiinnittymistä. Lisäksi Pm-ME korjasi H202:n laukaiseman soluvaurion pitoisuudella 100 ug/ml (kuvio 2b). Sen selvittämiseksi, vaimentiko Pm-ME UVB- ja H2O2-välitteistä ryppyjen muodostumista, MMP-1 ja MMP-9 ilmentymistasot mitattiin UVB- tai H2O2-käsittelyn jälkeen, kun ryppyjä oli läsnä tai ei. Pm-ME. Pm-ME esti MMP-1:n ja MMP-9:n ilmentymistä molemmissa olosuhteissa (kuvio 2c, d). Seuraavaksi tutkimme, estikö Pm-ME vapaiden radikaalien aiheuttamia tulehdusvasteita mittaamalla COX-2 mRNA-tasoja. UVB- tai H2O2-käsitellyissä olosuhteissa Pm-ME suppressoi voimakkaasti COX-2-mRNA-tasoja pitoisuudella 100 µg/ml (kuvio 2e, f). Sen jälkeen mittasimme ikääntymistä estävän geenin Sirt{40}} mRNA-tasoja määrittääksemme sen vaikutuksen valon ikääntymiseen. Sekä UVB että H2O2 vähensivät Sirt-1-ilmentymistä, kun taas Pm-ME palautti ilmentymisensä huomattavasti arvoilla 50 ja 100 µg/ml (kuvio 2g,h). Koska Pm-ME tukahdutti tiettyjä molekyyli- ja soluvasteita UVB:llä tai H2O2:lla käsitellyissä HaCaT-soluissa, tutkimme seuraavaksi, oliko tällä uutteella suoraa antioksidanttivaikutusta käyttämällä 2,2'-kasino-bis (3-etyylibentsotiatsoliini{{57). }}sulfonihappo) ABTS-määritys, jossa Pm-ME osoitti annoksesta riippuvaa vapaita radikaaleja poistavaa aktiivisuutta (kuvio 2i).

2.3. Pm-ME:n kosteuttava ja kollageenia lisäävä vaikutus

Pm-ME tehosti kosteuttamiseen liittyvien geenien, kuten HAS-2 ja TGM-1, ilmentymistä HaCaT-soluissa (kuva 3a). Sen määrittämiseksi, voisiko Pm-ME tehostaa kollageenigeenin (Col1A1) ilmentymistä, käsittelimme ensin HDF-soluja Pm-ME:llä (0-100 µg/ml) ja määritimme sitten Col1A1:n ekspressiotason. Kuten kuvio 3b osoittaa, Col1A1-geenin lisääntynyt ilmentyminen Pm-ME-käsittelyolosuhteissa havaittiin annoksesta riippuen. Nämä tulokset vahvistettiin edelleen käyttämällä reportterigeenimääritystä Col1A1-Luc-konstruktilla, joka oli transfektoitu HEK293-soluihin ja HDF-soluihin. Odotettavasti Pm-ME lisäsi Col1A1-geenin promoottoriaktiivisuutta annoksesta riippuvalla tavalla molemmissa soluissa (kuvio 3c, d). Lisäksi Pm-ME:n havaittiin palauttavan kollageenigeenitasoja, jotka laskivat sekä UV-säteilyssä että H2O2-käsittelyolosuhteissa (kuvio 3e, f).

2.4. Pm-ME:n melanogeeninen vaikutus

Koska tavoitekonsentraatiomme vastasi 100 µg/ml, määritimme, kykenikö Pm-ME estämään melaniinin erittymistä ja sen solusisältöä. Tämän määrittämiseksi B16F10-melanoomasoluja stimuloitiin -melanosyyttiä stimuloivalla hormonilla (-MSH) Pm-ME:n tai arbutiinin (positiivinen kontrolli) läsnä ollessa tai poissa ollessa. Sitten mitattiin melaniinitasot. Pm-ME vähensi melaniinin eritystä jopa 75 prosenttiin pitoisuudella 100 ug/ml (kuvio 4a, b). Pm-ME alensi myös melaniinipitoisuutta MSH-käsitellyissä B16F10-soluissa jopa 30 prosenttiin pitoisuudella 100 µg/ml, kun taas melaniinipitoisuus 50 µg/ml:lla ei vähentynyt merkittävästi verrattuna positiiviseen kontrolliin (-MSH) (kuva 4c). . Lopuksi, määrittääksemme Pm-ME:n vaikutuksen melaniinia tuottavien entsyymien aktiivisuuteen, suoritimme tyrosinaasientsyymimäärityksen. Mielenkiintoista on, että Pm-ME (0–400 µg/ml) vähensi merkittävästi tyrosinaasin aktiivisuutta yli 200 µg/ml pitoisuuksilla, kun taas Kojic-happo (KA), kontrolloitu lääke, vähensi voimakkaasti tyrosinaasin aktiivisuutta (kuva 4d).

2.5. Pm-ME-välitteisten valon ikääntymistä estävien ja kosteuttavien vaikutusten molekyylimekanismit

3. Keskustelu

Erilaisia ​​Sapotaceae-heimon lajeja on käytetty perinteisessä lääketieteessä ravintoaine- ja vitamiinirikkautensa vuoksi [39]. P. mutisiin mahdollista käyttöä kosmetiikka- ja lääketeollisuudessa ei kuitenkaan ole vielä tutkittu. Tästä syystä tutkimme P. mutisiin ihoa suojaavaa aktiivisuutta keratinosyyteissä ja fibroblasteissa ihoa vaurioittavissa olosuhteissa. Arvioimme myös sen soveltuvuuden kosmeettisiin valmisteisiin. Koska myrkyllisyystestaus ihmisten mahdollisten riskien tunnistamiseksi on välttämätön ja kriittinen vaihe sekä lääke- että kosmetiikkateollisuudessa [40], P. mutisii -bakteerin sytotoksisuus testattiin HaCaT-, B16F10- ja HDF-soluissa. Pradosia mutisii osoitti alhaista toksisuutta arvoon 200 ug/ml asti, eikä toksisuutta pitoisuudella 100 ug/ml HaCaT-, B16F10- (kuvio 1a, b) ja HDF-soluissa (kuvio 3c). Käyttämällä UHPLC/MS-analyysiä (kuvio 1c) Pm-ME:ssä osoitettiin olevan suuri pitoisuus kumarihappoa, fenolihappoa [41,42]. Polyfenolit ovat kasvien toissijaisia ​​metaboliitteja, ja ne osallistuvat yleensä suojautumiseen UV-säteilyä tai patogeenien aiheuttamia infektioita vastaan. Ihmiskehossa polyfenolien on osoitettu suojaavan syövän, sydän- ja verisuonitautien, diabeteksen, osteoporoosin ja hermostoa rappeuttavien sairauksien kehittymiseltä [1]. Kumariinihapolla on osoitettu olevan antioksidanttisia ja anti-inflammatorisia ominaisuuksia [43].

Ultraviolettisäteily on yksi tärkeimmistä vapaiden radikaalien (esim. ROS) tuotannon aiheuttajista ihossa. Vapaat radikaalit voivat johtaa ihon ikääntymiseen ja syöpään, jos ne kerääntyvät pitkiä aikoja [44]. Tiedetään, että vapaiden radikaalien synnyttämä oksidatiivinen stressi ja vauriot voivat vaarantaa solujen selviytymisen, lisääntymisen, erilaistumisen ja aineenvaihdunnan [45,46]. Aiempien raporttien [47, 48] mukaisesti havaitsimme myös, että UVB-säteilyn aiheuttama soluvaurio HaCaT-soluissa. Vaurioihin sisältyi vähentynyt proliferaatio, lisääntynyt apoptoosi ja molekyylivasteet, mukaan lukien tulehdukseen, ryppyjen muodostumiseen ja ikääntymiseen liittyvien geenien ilmentyminen (kuvat 2 ja 3). Koska UVB-indusoidut radikaalit ovat tärkeitä soluja, kudoksia ja elimiä vahingoittavia tekijöitä, havaittiin, että jotkin endogeeniset yhdisteet, kuten melatoniini ja sen metaboliitti [49–52] ja bilirubiini [53], osallistuvat myrkyllisten radikaalien poistamiseen antioksidanttilla. , valolta suojaavia ja ikääntymistä estäviä ominaisuuksia kehossamme. Toistaiseksi näitä yhdisteitä on kehitetty myös erittäin arvokkaiksi biomateriaaleiksi, joita lääketeollisuus voi käyttää kehoomme [54]. Siitä huolimatta C-vitamiinista, koentsyymistä Q10:stä ja -tokoferolista on tulossa merkittäviä antioksidanttisia ominaisuuksiensa vuoksi ihmisten terveydelle tarkoitettuja maailmanlaajuisesti myytäviä tuotteita. Lääke- ja kosmetiikkayritysten tutkimuslaboratoriot panostavat edelleen tehokkaiden antioksidanttien ja luonnonyhdisteiden tunnistamiseen ja kehittämiseen. Tutkimuksessamme havaitsimme, että Pm-ME:llä oli vahva antioksidanttiaktiivisuus, kun sitä testattiin käyttämällä ABTS-määritystä (kuva 2i). Samoin Pm-ME käänsi vapaiden radikaalien aiheuttaman solukiinnittymisen suppression, tumavaurion induktion ja geenien, kuten MMP-1, MMP-9 ja COX{{27}, muuttuneen ilmentymisen. } UVB- ja H2O2-olosuhteissa annosriippuvaisesti (kuvat 2a–f). Erityisesti Pm-ME palautti Sirt-1-geenin tasot (kuvio 2g,h), joka osallistuu apoptoosin estämiseen ja solujen eloonjäämisen lisäämiseen oksidatiivisissa stressiolosuhteissa [26]. Nämä tulokset viittasivat vahvasti siihen, että solujen ikääntyminen oli yhteydessä oksidatiiviseen stressiin Sirt1-ekspression vaimenemisen kautta. Pm-ME:n antioksidatiiviset ominaisuudet mahdollistivat Sirt1-ekspression palautumisen. Tämä saattaa suojata ihoa vaurioilta ja ikääntymiseltä luonnollisissa UVB-säteilyolosuhteissa in vivo. Lisäksi on mahdollista, että Pm-ME pystyy myös suojaamaan UVC-indusoituja soluvasteita, koska UV-säteilyolosuhteet saattavat olla UVC:n saastuttamia, vaikka käytimme suodatinjärjestelmää kaikkien alle 290 nm:n aallonpituuksien poistamiseen. Ajatus siitä, että antioksidantitiset biomateriaalit voivat parantaa solu- ja molekyylivaurioita oksidatiivisissa stressiolosuhteissa, on johtanut eri tuotteiden, kuten BIOGF1K:n, ginsenosidi Ro:n, EGCG:n, Fraxinus chinensis -uutteen ja tiettyjen synteettisten antioksidanttien, kaupalliseen tuotantoon. Näissä ja muissa tuotteissa olevien biomateriaalien ryppyjä ja ikääntymistä estäviä vaikutuksia on raportoitu laajalti kosmetiikkateollisuudessa [48,55,56].

Ihon riittävän kosteuden ylläpitäminen [31] ja uuden kollageenin tuottaminen [57] ovat tärkeitä prosesseja terveelle iholle. Pm-ME (kuva 3b–d) lisäsi huomattavasti kosteuttavien (HAS2, TGM-1) (kuva 3a) ja kollageenigeenien (Col1A1) ilmentymistä, ja ne auttoivat palauttamaan kollageenitasoja UVB-altistuksen ja H2O2-käsittelyn jälkeen ( Kuva 3e, f). Siksi tämä viittaa siihen, että Pm-ME voi olla tehokas ainesosa terveen ihon ylläpitämisessä. Pm-ME:n melaniinin suppressio on myös edullinen sen käytölle kosmeettisissa valmisteissa. Vaikka melaniini on arvokasta suojaamaan ihoa UV-säteilyltä, koska monet naiset haluavat vaalentaa ihoaan, anti-melanogeeninen valkaisu on hyödyllinen ominaisuus kosmeettisissa materiaaleissa [29]. Pm-ME (100 µg/ml) osoitti voimakasta inhiboivaa aktiivisuutta melanogeneesin aikana, mikä arvioitiin määrittämällä melaniinitasot eritetystä alustasta ja melaniinin eritystasojen vähenemisestä (kuva 4a–c). Lisäksi Pm-ME (200 ug/ml) tukahdutti merkittävästi tyrosinaasientsyymiaktiivisuutta (kuvio 4d), mikä viittaa siihen, että korkeampi pitoisuus on suoraan tehokas entsyymiaktiivisuuden tukahduttamiseen, kun taas pienempi pitoisuus osallistuu melaniinin erityksen säätelyyn. Siksi Pm-ME:tä voidaan pitää hyvänä kosmeettisena ehdokkaana sen antioksidanttisten, ikääntymistä ehkäisevien, ryppyjä ehkäisevien, kosteusvoidetta stimuloivien ja melanogeenisten vaikutustensa vuoksi. Tämän mahdollisuuden tutkimiseksi edelleen aiomme arvioida sen kliinistä tehoa tulevissa tutkimuksissa.

Teimme tutkimuksia määrittääksemme molekyylimekanismit, joilla Pm-ME käytti antioksidanttiaan ja kosteuttaa keratinosyyteissä. Keskityimme MAPK:iin liittyviin entsyymeihin (ERK, JNK ja p38), koska näillä entsyymeillä on kriittinen rooli ihon keratinosyyttien ja melanosyyttien ikääntymisessä ja melanogeneesissä [58,59]. Esimerkiksi ERK-reitti välittää soluvasteita transformoivaan kasvutekijään- 1 lisäämällä kollageenin [60] ja HA:n synteesireittejä keratinosyyteissä [61]. JNK:lla on keskeinen rooli oksidatiivisen stressin aiheuttamassa keratinosyyttien apoptoosissa [62]. Entsyymi p38 on tärkeä ihmisen ihon homeostaasin ylläpitämisessä [63]. JNK- ja p38-reitit välittävät molemmat soluvasteita sytokiineille ja fyysiselle stressille [14]. Nämä reitit aktivoituvat UVB- ja ROS-indusoitujen jännitysten vaikutuksesta. Nämä reitit voivat lisätä proteolyyttisten MMP- ja COX{18}}-geenien tuotantoa [15], jotka liittyvät kollageenin hajoamiseen ja vastaavasti ihotulehdukseen [64]. Erityisesti oksidatiivinen stressi esti ERK:n fosforylaation, kun taas p38 ja JNK fosforyloituivat, kun niitä käsiteltiin H202:lla (kuvio 5a). Sitä vastoin Pm-ME lisäsi ERK-fosforylaatiota ja vähensi p38:n ja JNK:n fosforylaatiota (kuvio 5a), mikä viittaa siihen, että nämä entsyymit voivat osallistua eri tavalla Pm-ME-välitteisiin farmakologisiin aktiivisuuksiin. MAPK:n toiminnallisen roolin ymmärtämiseksi Pm-ME:n ikääntymistä estävissä, melanogeenisissa ja anti-inflammatorisissa vaikutuksissa UVB-säteilytetyissä ja H2O{36}}-stimuloiduissa keratinosyyteissä käytettiin spesifisiä MAPK:n estäjiä. Kuvan 5b tulokset viittasivat vahvasti siihen, että p38:n ja JNK:n estäminen Pm-ME:llä johti ryppyjen ja tulehdusta ehkäiseviin vaikutuksiin, koska p38-estäjä (SB203580) ja JNK-estäjä (SP600125) estivät MMP:n ilmentymisen{45 }} ja COX-2. Lisäksi Pm-ME:n laukaisema ERK-fosforylaatio indusoi kosteuttamiseen liittyvien geenien ilmentymistä, koska Pm-ME-käsittely laukaisi HAS-2 ilmentymisen, kun taas U0126 tukahdutti sen (kuva 5c). Nämä tulokset viittasivat siihen, että MAPK:hen liittyvät entsyymit vaikuttivat PM-ME-välitteiseen ikääntymisen, ryppyjen ja tulehdusta ehkäisevään toimintaan. UVB-säteilyn tiedetään lisäävän muita signalointikaskadeja, kuten sellaisia, jotka liittyvät NF-KB:hen ja STAT3:een [65,66]. Vielä on tutkittava, pystyykö Pm-ME säätelemään näitä signalointireittejä.

Yhteenvetona totesimme, että kumarihappoa sisältävä Pm-ME osoitti hapettumista estävää, ryppyjä estävää, kosteuttajaa stimuloivaa ja melanogeenista toimintaa UVB-säteilyllä säteilytetyissä tai H2O2:lla käsitellyissä ihosoluissa. Pm-ME lisäsi ERK:n fosforylaatiota annoksesta riippuvalla tavalla, mutta vähensi p38:n ja JNK:n fosforylaatiota (kuvio 6). Tuloksemme viittasivat vahvasti siihen, että Pm-ME voi olla tehokas ihoa suojaava biomateriaali. Koska Pm-ME osoitti erittäin lupaavia aktiivisuuksia sekä syöpäsoluissa (HaCaT- ja B16F10-solut) että normaaleissa ihmisen keratinosyyteissä oksidatiivisten stressiolosuhteiden aikana, ehdotamme siksi Pm-ME:n käytön hyödyllisiä rooleja kosmeettisissa valmisteissa. Melanoomasoluilla on kuitenkin epänormaaleja piirteitä, kuten häiriintynyt solusyklin hallinta, poikkeavat geenien ilmentymismallit ja rajalliset erilaistumiskyvyt [67], ja lisätyötä primaaristen melanosyyttien kanssa tulisi seurata, jotta Pm-ME:n ja sen melanogeneesin vastainen aktiivisuus ymmärretään tarkasti. molekyylimekanismi. Lisäksi saman perheen (Sapotaceae) tai suvun (Pradosia spp.) kasveilta testataan samanlaisia ​​ihoa suojaavia vaikutuksia.

Kysy lisää: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501