Abstrakti

Tausta:Verihiutaleiden aggregaatio ja edistyneet glykaation lopputuotteet (AGE) ja oksidatiivinen stressi tunnetaan avaintekijöinä sydän- ja verisuonisairauksien ja diabeettisten komplikaatioiden kehittymiselle. Tässä yhteydessä hedelmien ja vihannesten kulutuksen, hyvien antioksidanttiyhdisteiden lähteiden, on suurelta osin raportoitu olevan tehokas tapa ehkäistä ihmisiä näitä sairauksia vastaan. Tämä tutkimus keskittyy granaattiomenan (Punica granatum L.) kukkien (PF), lehtien (PL), kuoren (PP) mehun (PJ) ja siemenöljyn (PSO) hapettumisen, verihiutaleiden ja glykaatiota estävän vaikutuksen arviointiin. .

Cistanchen glykosidi voi myös lisätä SOD:n aktiivisuutta sydämen ja maksan kudoksissa ja vähentää merkittävästi lipofussiinin ja MDA:n pitoisuutta kussakin kudoksessa, poistaen tehokkaasti erilaisia ​​reaktiivisia happiradikaaleja (OH-, H₂O₂ jne.) ja suojaamalla DNA-vaurioilta. OH-radikaalien toimesta. Cistanche-fenyylietanoidiglykosideilla on vahva vapaita radikaaleja poistava kyky, suurempi pelkistyskyky kuin C-vitamiini, ne parantavat SOD:n aktiivisuutta siittiösuspensiossa, vähentävät MDA-pitoisuutta ja niillä on tietty suojaava vaikutus siittiöiden kalvon toimintaan. Cistanche-polysakkaridit voivat lisätä SOD:n ja GSH-Px:n aktiivisuutta D-galaktoosin aiheuttamien kokeellisesti vanhenevien hiirten punasoluissa ja keuhkokudoksissa sekä vähentää MDA- ja kollageenipitoisuutta keuhkoissa ja plasmassa sekä lisätä elastiinipitoisuutta. hyvä huuhteluvaikutus DPPH:lle, pidentää hypoksian aikaa vanhenevilla hiirillä, parantaa SOD:n aktiivisuutta seerumissa ja viivyttää keuhkojen fysiologista rappeutumista kokeellisesti vanhenevilla hiirillä Solumorfologisen rappeutumisen yhteydessä kokeet ovat osoittaneet, että Cistanchella on hyvä antioksidanttikyky ja sillä on potentiaalia olla lääke ihon ikääntymisen sairauksien ehkäisyyn ja hoitoon. Samaan aikaan Cistanchen ekinakosidilla on merkittävä kyky poistaa DPPH-vapaita radikaaleja ja se voi poistaa reaktiivisia happilajeja, estää vapaiden radikaalien aiheuttaman kollageenin hajoamisen ja sillä on myös hyvä korjaava vaikutus tymiinin vapaiden radikaalien anionivaurioihin.

Napsauta Cistanchea ja Tongkat Ali Redditiä

【Lisätietoja: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

menetelmät: Antioksidanttiaktiivisuudet mitattiin ABTS-radikaaleja ja lipidiperoksidaatiota vastaan. Antiglykaatioaktiivisuus määritettiin käyttämällä AGE-fluoresenssin intensiteetin muodostumista BSA/riboosi-järjestelmässä. Verihiutaleiden vastainen aktiivisuus mitattiin verihiutalerikkaassa plasmassa (PRP) adenosiinidifosfaattia (ADP), kollageenia ja arakidonihappoa (AA) vastaan.

Tulokset:PF-uutte osoitti korkeimman antioksidanttiaktiivisuuden ABTS:ää ja lipidiperoksidaatiota vastaan ​​IC50-arvoilla 0,7 mg/ml ja 0,63 mg/ml. Antiglykaatioaktiivisuuden osalta PP, PF ja PL estivät kohtalaisesti pentosidiinin kaltaisten AGE:iden muodostumista verrattuna positiivisiin kontrolleihin, joiden AGE-IC50-arvo oli 0,4 mg/ml. PJ:llä ja PSO:lla ei ole mitään anti-AGE-vaikutusta. Kaikki uutteet estivät selektiivisesti yhden, kahden tai kolmen indusoijan aiheuttamaa verihiutaleiden aggregaatiota annoksesta riippuvaisella tavalla. PF oli tehokkain kaikkien kolmen indusoijan aiheuttama inhibiittori, jonka estovaikutukset vaihtelivat välillä 35,6-66,6 prosenttia. PP ja PJ osoittivat verihiutaleiden vastaista vaikutusta sekä ADP:tä että kollageenia vastaan ​​ja PL:llä ja PSO:lla vain AA:ta vastaan.

Johtopäätökset:Nämä tulokset viittaavat siihen, että joillakin granaattiomenauutteilla on potentiaalisia in vitro antiglykaatio- ja verihiutaleiden vastaisia ​​vaikutuksia

Avainsanat:Granaattiomena, verihiutaleiden esto, edistyneet glykaation lopputuotteet, oksidatiivinen stressi, lipidiperoksidaatio

Tausta

Granaattiomena (Punica granatum L.) on laajalti tunnettu erittäin tehokkaana antioksidanttina [1–3]. Granaattiomenamehun antioksidanttivoiman on raportoitu olevan 3-kertaa suurempi kuin punaviinin tai vihreän teen [4] ja 8-kertaisesti korkeampi kuin appelsiinimehuissa [5]. Lisäksi yksi luonnollinen hedelmä, jota tutkitaan paljon, on granaattiomena ja sen ainesosat, joilla on raportoitu olevan vahva biologinen aktiivisuus ja lääkearvo. Granaattiomenamehulla, -kuorella, siemenöljyllä, lehdillä ja kukkauutteilla on kuvattu olevan sekä in vitro että in vivo diabeteslääkkeitä [6], anti-inflammatorisia [7], antioksidantteja, liikalihavuutta [8] ja kasvaimia estäviä vaikutuksia. 9]. Nämä hyödylliset vaikutukset liittyvät erittäin korkeisiin antioksidanttipitoisuuksiin, kuten polyfenoliyhdisteisiin, mukaan lukien hydrolysoituvat tanniinit, antosyaanit ja flavonolit [10]. Aikaisemmissa granaattiomenan diabeteksen vastaisia ​​vaikutuksia koskevissa tutkimuksissamme tulokset korostavat granaattiomenauutteiden hermoja suojaavia vaikutuksia ja osoittavat, että granaattiomenan pitkäaikainen nauttiminen voi olla mahdollinen vaihtoehtoinen strategia HFD:n (High Fat High Fructose Diet) aiheuttaman insuliinin ehkäisyyn. vastustuskyky ja oksidatiivinen stressi [6, 11]. Granaattiomenamehun, -lehtien ja -kuoren kulutus alensi merkittävästi paastoplasman glukoosi- ja insuliinitasoja. Tämän seurauksena insuliiniresistenssin homeostaattinen indeksi (HOMA-IR), jota käytetään insuliiniresistenssin kvantifiointiin, pieneni vastaavasti, mikä osoittaa merkittävää parannusta insuliiniherkkyydessä.

Tässä yhteydessä yritimme arvioida granaattiomenauutteiden vaikutusta tunnetuimpiin diabeteksen komplikaatioihin, kuten verihiutaleiden aggregaatioon ja Advanced glycation end products (AGE:t), joiden on raportoitu korreloivan diabeteksen etenemisen ja ikääntymisen kanssa [12, 13]. . Verihiutaleiden toiminnan estämistä on käytetty pitkään strategiana akuuttien verisuonten aterotromboottisten sairauksien, kuten diabeteksen, sydän- ja verisuonitautien ja iskeemisen aivohalvauksen hoidossa [14, 15]. Edistyneet glykaation lopputuotteet (AGE) liittyvät suurempaan diabeettisten komplikaatioiden, kuten diabeettisen retinopatian, neuropatian ja nefropatian, riskiin [16]. Lisäksi on julkaistu vain vähän raportteja eri granaattiomenapuun osien estävästä vaikutuksesta AGE:n muodostumiseen [17] tai verihiutaleiden aggregaatioon [18]. Tässä työssä tutkimme in vitro granaattiomenamehun (PJ), kuoren (PP), kukkien (PF), lehtien (PL) ja siemenöljyn (PSO) anti-AGE- ja verihiutaleiden kykyä sekä joitakin antioksidanttivaikutuksia.

menetelmät

Kasvimateriaalit ja louhinta

Lehdet ja hedelmät poimittiin Tounsin granaattiomenapuista lokakuussa 2021 Mahdian alueelta Tunisiasta. Lajikkeen aitouden vahvisti taksonomi tohtori Faten Zaouay Chott-Meriemin Higher Agronomic Instituten puutarhaviljelyn laitokselta (Soussen yliopisto, Tunisia), ja voucher-näyte talletettiin kansalliseen kokoelmaamme, jota ylläpidetään kahtena kappaleena Gabesissa ja Chott-Mariemissa. (Sousse), koodilla "TNl, TN2, TN3, TN5, TN5".

Granaattiomenauutteet valmistettiin edellisessä tutkimuksessamme [11] kuvatulla tavalla. Hedelmät pestiin ja kuorittiin käsin. Arilit puristettiin käyttämällä kaupallista tehosekoitinta (Moulinex, Ranska). Uutettua mehua sentrifugoitiin nopeudella 15 000 rpm 15 minuuttia. Sitten supernatantti otettiin talteen ja lyofilisoitiin. Lehdet, kukat ja hedelmänkuori kuivattiin, jauhettiin ja uutettiin metanolilla (MeOH) 50 g/250 ml pimeässä 48 tunnin ajan. Kukin uute suodatettiin Whatman No. 42 -suodatinpaperin läpi ja haihdutettiin kuiviin käyttämällä pyöröhaihdutinta (Heidolph, Saksa) tyhjössä 45 asteessa ja säilytettiin -20 asteessa lisämäärityksiä varten. Granaattiomenan siemenet kuivattiin ja jauhettiin. Öljy uutettiin soxhlet-menetelmillä. Noin 30 g siemeniä uutettiin 200 ml:lla heksaania huoneenlämpötilassa 6 tunnin ajan. Liuotin poistettiin haihduttamalla 40 asteessa ja öljy huuhdeltiin typpivirralla ja säilytettiin -20 asteessa suljetuissa putkissa.

ABTS-radikaalinpoistomääritys

Granaattiomenauutteiden antioksidanttikapasiteetti ABTS (2,2'-kasino-bis (3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihappo) -määrityksellä mitattiin aiemmalla menetelmällä [19]. Lyhyesti sanottuna ABTS• plus radikaali liuos valmistettiin saattamalla ABTS-varastoliuos (5 mM) reagoimaan kaliumpersulfaattiliuoksen (K2S2O8) kanssa (2,7 mM). Antioksidanttikapasiteetin arvioimiseksi ABTS• plus -liuos laimennettiin fosfaattipuskurilla (20 mM, pH 7,4), jolloin saatiin 0,700±0,020 absorbanssi 660 nm:ssä. Kymmenen, ABTS• plus -liuosta sekoitettiin eri pitoisuuksilla valmistettujen granaattiomenauutteiden kanssa. Inkuboinnin jälkeen absorbanssi mitattiin aallonpituudella 734 nm. Käytettiin askorbiinihappoa positiivisena kontrollina. ABTS• plus radikaalin eston prosenttiosuus laskettiin seuraavalla kaavalla:

Akontrollilla tarkoitetaan näytteen sijasta puhdasta MeOH:ta sisältävää liuosta ja näytteellä granaattiomenauutetta sisältävien liuosten absorbanssia. Näytteen tehokas konsentraatio on välttämätön absorbanssin pienentämiseksi ABTS• plus 50 prosentilla (EC50).

Lipidiperoksidaatio rautatiosyanaattimenetelmällä

Granaattiomenauutteiden aiheuttama lipidiperoksidoinnin esto määritettiin edellisen menetelmän mukaisesti [20]. Linolihappoa (LA) käytettiin lipidimatriisina ja 2,2'-atsobis(2-metyylipropionamidiini)dihydrokloridia (AAPH) vapaaradikaali-initiaattorina. Jokaisesta granaattiomenauutteesta valmistettiin eri pitoisuudet. Kuhunkin pitoisuuteen sekoitettiin 1,3 % (w/v) metanolista LA:ta ja 0,2 M fosfaattipuskuria (pH 7,0) ja peroksidaatio aloitettiin lisäämällä AAPH-liuosta (55,3 mM) fosfaattipuskurissa. Kontrolliliuos valmistettiin lisäämällä puhdasta MeOH:ta näytteen sijasta. Inkuboinnin jälkeen 50 asteessa 24 tuntia pimeässä, reaktioseos liuotettiin 3:1 (v/v) H2O-MeOH-liuokseen. Kymmenen lisättiin NH4SCN:n 10-prosenttinen vesiliuos ja 20 mM FeCl2 3,5-prosenttisessa HCl:ssä. 3 minuutin huoneenlämpötilassa inkuboinnin jälkeen absorbanssi mitattiin aallonpituudella 546 nm vastaavaa nollakoetta vastaan. Positiivisena kontrollina käytettiin askorbiinihappoa. Tulokset ilmaistaan ​​lipidiperoksidaatio-inhibitioprosentteina:

Acontroltarkoittaa puhdasta MeOH:ta sisältävää liuosta näytteen sijaan ja näyte öljyä sisältävien liuosten absorbanssia. Te EC50 määritettiin.

Edistynyt glykaation lopputuotteiden estomääritys

Pentosidiinin kaltaisten AGE:iden muodostumisen esto ja EC5{6}}-arvot määritettiin ja laskettiin käyttämällä Séron et ai. 2013, pienin muutoksin [21]. Lyhyesti sanottuna BSA:ta (10 mg/ml) inkuboitiin D-riboosin (0,5 M) kanssa yhdessä testatun uutteen kanssa 50 mM fosfaattipuskurissa pH:ssa 7,4 (NaN3, 0,02 prosenttia). Liuoksia inkuboitiin 96-kuoppamikrotiitterilevyillä 37 asteessa 24 tuntia suljetussa järjestelmässä ennen AGE-fluoresenssimittausta. Fluoresenssi, joka saatiin inkuboinnista samassa BSA:ssa (10 mg/ml) ja testatuissa uutto-olosuhteissa, vähennettiin jokaiselle mittaukselle. Pentosidiinin kaltainen (λexc 335 nm, λem 385 nm) AGE:n fluoresenssi mitattiin käyttämällä mikrolevyspektrofluorometriä. AGE:iden muodostumisen prosenttiosuus laskettiin seuraavasti kullekin uutepitoisuudelle ja EC50-arvot määritettiin:

AGE:t (prosentti)=[fluoresenssin intensiteetti (näyte) − fluoresenssin intensiteetti (näytteen tyhjä)] ∗100/[fluoresenssin intensiteetti (kontrolli) − fluoresenssin intensiteetti (kontrollin nolla)]

Verihiutaleiden aggregaatiota estävän aktiivisuuden in vitro arviointi

Tuoretta verta otettiin terveiltä vapaaehtoisilta, joilla oli negatiivinen historia lääkkeiden, juomien tai elintarvikkeiden nauttimisesta, jotka voivat vaikuttaa aggregaatioon vähintään 10 päivän ajan ja joiden olisi mieluiten pitänyt paastota yön yli, koska kylomikroni saattaa myös häiritä aggregaatiotapoja. Tutkimuksen hyväksyi Tunisian Sfaxin Hedi Chakerin yliopistosairaalan paikallinen eettinen komitea.

Laskimoveri kerättiin muoviputkeen, joka sisälsi trinatriumsitraattia 109 mM. PRP saatiin sentrifugoimalla huoneenlämpötilassa 12 minuuttia 200 x g:llä. PRP poistettiin varovasti välttäen kontaminaatiota punasoluilla tai buffy coatilla ja säilytettiin huoneenlämmössä testaukseen asti. Kaikki testit tulee suorittaa 3 tunnin sisällä PRP:n valmistelusta. Jäljelle jäänyt veri sentrifugoitiin sitten 2000 x g:ssä 20 minuuttia verihiutalehuono plasman (PPP) saamiseksi. Käytimme aggregoivien aineiden seulontapaneelia: adenosiini-5′-difosfaattia (ADP, 20 µM), kollageenia (5 ug/ml) ja arakidonihappoa (2 mM).

PRP:tä ja PPP:tä käytettiin asettamaan 0 ja 100 prosenttia valonläpäisyä aggregometrissä. Verihiutaleiden aggregaatiota tarkkailtiin vähintään 5 minuuttia agonistin lisäämisen jälkeen.

Granaattiomenan lehtiä (PL), kukkia (PF), mehua (PJ) ja kuorta (PP) varten valmistettiin eri pitoisuudet kullekin DMSO:hon liuotetulle uutteelle ({{0}},05 prosentin lopullinen). keskittyminen). PSO:ta varten eri pitoisuudet liuotettiin 70-prosenttiseen polyetyleeniglykoliin (PEG), joka on laajalti käytetty liuotin in vivo veteen liukenemattomien yhdisteiden liuottamiseen. Kymmenen mikrolitraa kutakin uutetta lisättiin 260 µl:aan kontrolli-PRP:tä, ja sitten seosta inkuboitiin vähintään 5 minuuttia (30 minuuttiin asti) 37 asteessa ennen agonistien lisäämistä. Kymmenen kollageenia (5 ug/ml), AA:ta (2 mM) tai ADP:tä (20 μmol/l) lisättiin ja verihiutaleiden muodon muutosta ja aggregaatiota seurattiin 5 minuutin ajan. DMSO:ta (0,5 % tilavuus/tilavuus) käytettiin negatiivisena kontrollina ja aspiriinia käytettiin positiivisena kontrollina.

D=verihiutaleaggregaatio testiyhdisteiden läsnä ollessa

S=verihiutaleaggregaatio liuottimen läsnä ollessa.

Verihiutaleiden aggregaatiota estävä aktiivisuus ilmaistiin eston prosentteina verrattuna pelkällä vehikkelillä (DMSO tai PEG) mitattuun. Jokainen näyte mitattiin kolmena rinnakkaisena ja tiedot esitetään keskiarvona ± SD. Tehokkaiden pitoisuuksien arvot, jotka vaadittiin 50 prosentin verihiutaleiden aggregaation estoon (EC50), saatiin vähintään kolmesta määrityksestä.

Tilastollinen analyysi

Tulokset ilmaistiin vähintään kolmen riippumattoman mittauksen keskiarvona, ellei standardipoikkeamia ole raportoitu (keskiarvo ± SD) ja analysoitu käyttämällä SPSS ver. 21.{1}}, ammattimainen painos. Antioksidanttiaktiivisuuden osalta päävaikutusten merkityksen arvioimiseen käytettiin Duncanin testiä 5 prosentin todennäköisyystasolla (P<0.05).

tulokset ja keskustelu

Granaattiomenauutteiden antioksidanttiset ominaisuudet

Granaattiomenauutteiden antioksidanttikapasiteetit mitattiin ABTS- ja lipidiperoksidaatiomäärityksillä. Tulokset koottiin yhteen taulukkoon 1 ja ilmaistiin EC50-arvona. Alempi EC5{{10}} osoitti korkeampaa antioksidanttiaktiivisuutta. Havaittiin, että uutteet eroavat toisistaan ​​antioksidanttisten vaikutustensa suhteen. Esimerkiksi PF osoitti korkeimman antioksidanttiaktiivisuuden ABTS:ää vastaan ​​EC50-arvoilla 0,7 mg/ml, mikä on parempi kuin tavallinen askorbiinihappo, jonka IC50 oli 1,4 mg/ml. PF osoitti toiseksi alhaisimman EC50-arvon lipidiperoksidaatiomäärityksessä (0,63 mg/ml), hieman suurempi kuin tavallinen askorbiinihappo (0,52 mg/ml), mutta tämä ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä (p < 0,05). PP-uute ja sen jälkeen PL- ja PJ-uutteet voivat vähentää tehokkaasti vapaita radikaaleja ABTS. Sama järjestys havaittiin lipidiperoksidaatiotesteissä. PSO osoitti kuitenkin heikoimman antioksidanttiaktiivisuuden molemmissa in vitro -määrityksissä. On raportoitu, että fenolipitoisuuden ja antioksidanttikapasiteetin välillä on vakiintunut yhteys [22]. Aiemmassa tutkimuksessamme [23] tutkimme granaattiomenan kukkien, lehtien, kuorien ja mehun fenolipitoisuutta ja vertailimme niiden vähentämisvoimaa ja anti-DPPH-aktiivisuutta. Tulokset osoittavat, että kaikilla elimillä oli myös tehokas pelkistysvoima ja antiradikaaliaktiivisuus. Kukat ja lehdet olivat runsaasti fenoleja ja osoittautuivat vahvimmaksi antioksidantteiksi.

Granaattiomenauutteiden anti-AGE-kapasiteetit

The anti-glycation capacities of pomegranate extracts evaluated by their inhibition of the formation of global fluorescent AGEs in the BSA/ribose system are depicted in Fig. 1 and Table 2. PP, PF, and PL extracts demonstrated a dose-response inhibition of the pentosidine-like AGEs formation (Fig. 1) with an AGE-EC50 value of 0.4mg/ml  (Table 2). This anti-AGEs capacity is considered moderate compared to that exhibited by Aminoguanidine (AGEEC50; 0.16-0.17mg/mL) and weak compared to Rutoside trihydrate (AGE-EC50; 0.05mg/mL). However, results show that PJ and PSO haven't any anti-AGE effect (AGEEC50; >1 mg/ml). Kaksoissokkotutkimuksessa Sohrab (2015) totesi, että granaattiomena (Punica granatum) mehu vähentää lipidien peroksidaatiota, mutta sillä ei ole vaikutusta plasman pitkälle edenneisiin glykoituihin lopputuotteisiin aikuisilla, joilla on tyypin 2 diabetes [24]. Granaattiomenamehua koskevat tulokset eivät ole linjassa joidenkin Liun (2014) raportoimien aiempien havaintojen kanssa. Hän havaitsi, että granaattiomenahedelmäuutte (PFE) osoitti voimakasta glykaatiota estävää vaikutusta [25]. Eri granaattiomenauutteiden glykaatiota estävä vaikutus voidaan katsoa niiden fenoliaineosien ansioksi. Kumagai (2015) osoitti, että BSA:sta glukoosin, fruktoosin ja glyseraldehydin kanssa johdettu AGE:iden muodostuminen in vitro tukahdutettiin pitoisuudesta riippuvaisesti lisäämällä granaattiomenan hedelmäuutetta PFE ja sen fenolisia komponentteja, kuten punicaliinia, punikalagiinia, ellagiinihappoa ja gallihappoa. happo [17].

Granaattiomenauutteiden verihiutaleiden vastainen vaikutus

Granaattiomenan osista arvioitiin niiden kyky estää ADP:n, kollageenin ja AA:n indusoiman ihmisen PRP:n verihiutaleiden aggregaatiota voimakkaina aggregaation indusoijina. Taulukossa 3 esitetään eri uutteiden estovaikutukset eri pitoisuuksilla ja aspiriini positiivisena kontrollina ja taulukossa 4 on yhteenveto granaattiomenauutteiden tai -yhdisteiden EC50-arvoista kolmen mittauksen keskiarvoilla. Kaikki uutteet estivät selektiivisesti yhden, kahden tai kolmen indusoijan aiheuttamaa verihiutaleiden aggregaatiota annoksesta riippuvaisella tavalla.

Kukkauutteen havaittiin olevan tehokkain kaikkien kolmen indusoijan aiheuttaman verihiutaleiden aggregaation inhibiittori, ja sen estovaikutukset vaihtelivat 35,6-66,6 prosentin välillä pitoisuudella 3,5 mg/ml. Se oli aktiivinen kollageenin aiheuttamaa verihiutaleiden aggregaatiota vastaan ​​EC50-arvolla 2,8 mg/ml, sitten AA:n aiheuttamaa verihiutaleiden aggregaatiota vastaan ​​EC50-arvolla 3,85 mg/ml ja 4.{101} {15}} mg/ml, kun ADP stimuloi aggregaatiota. Verrattuna aspiriiniin positiivisena kontrollina, PF:llä, PP:llä ja PJ:llä on estäviä vaikutuksia kollageenin indusoimaa aggregaatiota vastaan. Aspiriini kuitenkin esti AA:n ja ADP:n indusoimaa aggregaatiota EC50:llä 0,42 ja 0,66 mg/ml, mutta kollageenia vastaan ​​ei havaittu vaikutusta. Tässä tutkimuksessa ja aiemmassa tutkimuksessamme [23] PF:n todettiin olevan antioksidanttisin granaattiomenaosa DPPH-radikaaleja, ABTS-radikaaleja ja lipidiperoksidaatiota vastaan ​​verrattuna PP:hen, PL:ään ja PJ:hen. Tämä havainto saattaa selittää, miksi PF oli paras verihiutaleiden aggregaation estäjä. Lisäksi PF sisältää runsaasti fenoleja (16,6 prosenttia), mukaan lukien pääasiassa hydrolysoituja tanniineja (ellagitanniini) ja liukoista ravintokuitua (30,2 prosenttia) [26]. Hydrolysoitujen tanniinien on aiemmin osoitettu olevan erittäin tehokkaita estämään verihiutaleiden toimintaa [18]. Toisaalta ravintokuidun verihiutaleiden vastainen aktiivisuus oli märkä-epävarma [27, 28]. Joten oletimme, että PF:n voimakas ja monialainen verihiutaleiden vastainen aktiivisuus voidaan johtua hydrolysoituneista tanniineista, tärkeimmistä fenoleista, joita löytyy tästä elimestä.

PP ja PJ osoittivat estäviä vaikutuksia sekä ADP:tä että kollageenin aiheuttamaa verihiutaleiden aggregaatiota vastaan. Vaikutusta ei kuitenkaan osoitettu kummallekaan uutteelle, kun AA:ta käytettiin agonistina. Tuloksemme eivät vahvista Mattiello et al.:n, 2009, havaitsemaa, joka osoittaa, että molemmat uutteet estävät verihiutaleiden vastetta AA:lle [18]. EC50-arvojen vertailu paljasti, että PP vähensi ADP:tä ja kollageenin aiheuttamaa verihiutaleiden aggregaatiota tehokkaammin kuin PJ.

Ero estovaikutuksessa molempien uutteiden välillä voidaan selittää erolla antioksidanttikapasiteetissa. PP oli voimakkaampi antioksidantti kuin PJ tässä tutkimuksessa ABTS-radikaaleja ja lipidiperoksidaatiota vastaan ​​sekä myös DPPH-radikaaleja ja pelkistysvoimaa vastaan ​​[23]. Tämä selitys oli ristiriidassa joidenkin aikaisempien raporttien kanssa, jotka ehdottivat, että hedelmien verihiutaleiden vastainen potentiaali näytti olevan riippumaton tai päinvastainen niiden antioksidanttiaktiivisuuden kanssa [29, 30]. PL ja PSO pystyivät estämään vain ADP:n laukaiseman verihiutaleiden aggregaation, kun taas ne eivät olleet tehokkaita, kun kollageenia ja AA:ta käytettiin agonisteina.

Johtopäätös

Lopuksi voidaan todeta, että granaattiomenan kukilla, lehdillä ja kuorilla on in vitro estäviä vaikutuksia proteiinien glykaatioon ja verihiutaleiden aggregaatioon. Nämä vaikutukset johtuivat useiden granaattiomenaaktiivisten yhdisteiden antioksidanttisista ominaisuuksista. Lisätutkimukset ovat kuitenkin tarpeen näiden tulosten vahvistamiseksi ja sen vaikutusmekanismin syvemmälle ymmärtämiseksi, ennen kuin sitä ehdotetaan luonnolliseksi AGE-inhibiittoriksi. Antioksidanttinen ominaisuus? Granaattiomenan aktiiviset yhdisteet voivat/vaikuttavat näihin ominaisuuksiin.

Lyhenteet

AA: arakidonihappo; AAPH: 2,2'-atsobis(2-metyylipropionamidiini)dihydrokloridi; ABTS: 2,2'-kasino-bis (3-etyylibentsotiatsoliini-6-sulfonihappo; ADP: adenosiinidifosfaatti (ADP); AGE:t: Advanced Glycation -lopputuotteet; BSA: naudan seerumin albumiini; DMSO: dimetyylisulfoksidi ; FeCl2: rautakloridi; HCl: kloorivetyhappo; HFD: runsasrasvainen, fruktoosipitoinen ruokavalio; K2S2O8: kaliumpersulfaattiliuos; LA: linolihappo; MeOH: metanoli; NaN3: natriumatsidi; NH4SCN: ammoniumtiosyanaatti; PRP: poglykolietyyli. : verihiutalerikas plasma; PPP: verihiutaleheikko plasma.

Kiitokset

Lausunto kasvien ohjeista

Lajikkeen aitouden vahvisti taksonomisti tohtori Faten Zaouay Chott-Meriemin Higher Agronomic Instituten puutarhaviljelyn laitokselta (Soussen yliopisto, Tunisia), ja voucher-näyte talletettiin kansalliseen kokoelmaamme, jota ylläpidetään kahtena kappaleena Gabesissa ja Chott-Mariemissa. (Sousse), koodilla "TNl, TN2, TN3, TN5, TN5". Tutkimus noudattaa asiaankuuluvia institutionaalisia, kansallisia ja kansainvälisiä ohjeita ja lainsäädäntöä, ja lupa Punica granatum L.:n keräämiseen saatiin Aluetutkimuskeskukselta Puutarha- ja luonnonmukainen Chott-Mariem, IRESA-University of Sousse, 8.P.57-4042, Tunisia.

Tekijöiden panokset

ZA ja IA; metodologia, ZA; ja IA; ohjelmistot, AZ ja RC; validointi, resurssit, ZA; kirjoittaminen – alkuperäisen luonnoksen valmistelu, JG; valvonta, MH ja SH; kirjoittaminen – tarkista ja muokkaa. Kaikki kirjoittajat ovat lukeneet käsikirjoituksen julkaistun version ja hyväksyneet sen.

Rahoitus

Tätä työtä rahoitti Tunisian korkeakoulu- ja tieteellisen tutkimuksen ministeriö.

Tietojen ja materiaalien saatavuus

Tämän tutkimuksen aikana luodut ja/tai analysoidut aineistot ovat saatavilla vastaavalta tekijältä kohtuullisesta pyynnöstä.

julistukset

Eettinen hyväksyntä ja suostumus osallistumiseen

Tämän tutkimuksen hyväksyi Tunisian Sfaxin Hedi Chakerin yliopistosairaalan paikallinen eettinen komitea. Kaikki kokeet suoritettiin asiaankuuluvien ohjeiden ja määräysten mukaisesti. Tietoinen suostumus saatiin kaikilta koehenkilöiltä ja/tai heidän laillisilta huoltajaltaan.

Suostumus julkaisuun

Ei sovellettavissa.

Kilpailevat kiinnostuksen kohteet

Kirjoittajat eivät ilmoittaneet eturistiriitoja.

Tekijän tiedot

1 Biochemistry Laboratory, LR12ES05 "Nutrition-Funktional Foods and vascular Health", Lääketieteellinen tiedekunta, University of Monastir, 5019 Monastir, Tunisia. 2 Centre Régional de Transfusion Sanguine de Sfax, Route El-Ain Km 0,5, CP 3003 Sfax, Tunisia.

Viitteet

1. Hanafy SM, Abd El-Shafea YM, Saleh WD, Fathy HM. Granaattiomenan, appelsiinin ja banaanin kuoriuutteiden kemiallinen profilointi, in vitro antimikrobinen ja antioksidanttivaikutus patogeenisiä mikro-organismeja vastaan. J Genet Eng Biotechnol. 2021; 19:80.

2. Benchagra L, Berrougui H, Islam MO, Ramchoun M, Boulbaroud S, Hajjaji A, et ai. Marokon granaattiomena (Punica granatum L. Sefri -lajike) sisältävien punikalagiiniuutteiden antioksidanttinen vaikutus oksidatiivista stressiä vastaan. Ruoat. 2021; 10:2219.

3. Akuru EA, Chukwuma CI, Oyeagu CE, Erukainure OL, Mashile B, Setlhodi R, et ai. Granaattiomenan ("ihana lajike") kuoren ravinto- ja fytokemiallinen profiili ja sen vaikutukset maksan oksidatiiviseen stressiin ja aineenvaihdunnan muutoksiin. J Food Biochem. 2022:46.

4. Gil MI, Tomas-Barberan FA, Hess-Pierce B, Holcroft DM, Kader AA. Granaattiomenamehun antioksidanttivaikutus ja sen suhde fenolikoostumukseen ja käsittelyyn. J Agric Food Chem. 2000;48:4581–9.

5. Rosenblat M, Hayek T, Aviram M. Antioksidatiiviset vaikutukset granaattiomenamehun (PJ) kulutuksen diabeetikoilla seerumiin ja makrofageihin. Ateroskleroosi. 2006; 187:363–71.

6. Amri Z, Ben Khedher MR, Zaibi MS, Kharroubi W, Turki M, Ayadi F, et ai. Granaattiomenauutteiden diabeteksen vastaiset vaikutukset pitkäkestoisilla korkeafruktoosirasvaruokituilla rotilla. Clin Phytoscience. 2020; 6:55.

7. Harzallah A, Hammami M, Kępczyńska MA, Hislop DC, Arch JRS, Cawthorne MA, et ai. Granaattiomenan kukkien, -kuoren ja -siemenöljyn mahdollisten ehkäisevien vaikutusten vertailu insuliiniresistenssiin ja tulehdukseen runsaasti rasvaa ja sakkaroosia sisältävässä ruokavalion aiheuttamassa liikalihavuushiirimallissa. Arch Physiol Biochem. 2016; 122:75–87.

8. Al-Muammar MN, Khan F. Liikalihavuus: granaattiomenan (Punica granatum) ehkäisevä rooli. Ravitsemus. 2012;28:595–604.

9. Amri Z, Kharroubi W, Fidanzi-Dugas C, Leger DY, Hammami M, Liagre B. Koristegranaattiomenauutteiden kasvua estävät ja pro-apoptoottiset vaikutukset Du145 ihmisen eturauhassyöpäsoluissa. Nutr Syöpä. 2020;72:932–8.

10. Arlotta C, Puglia GD, Genovese C, Toscano V, Karlova R, Beekwilder J, et ai. MYB5-kaltainen ja bHLH vaikuttavat granaattiomenan flavonoidikoostumukseen. Plant Sci. 2020;298:110563.

11. Amri Z, Ghorbel A, Turki M, Akrout FM, Ayadi F, Elfeki A, et ai. Granaattiomenauutteiden vaikutus aivojen antioksidanttimarkkereihin ja koliiniesteraasiaktiivisuuteen korkean rasvan ja korkean fruktoosipitoisuuden aiheuttamassa ruokavalion aiheuttamassa liikalihavuudessa rottamallissa. BMC Complement Altern Med. 2017; 17:339.

12. Okura T, Ueta E, Nakamura R, Fujioka Y, Sumi K, Matsumoto K, et ai. Korkea seerumin pitkälle edennyt glykaatio lopputuotteet liittyvät vähentyneeseen insuliinin eritykseen potilailla, joilla on tyypin 2 diabetes: lyhyt raportti. J Diabetes Res. 2017; 2017.

13. Al-Sofani ME, Yanek LR, Faraday N, Kral BG, Mathias R, Becker LC, et ai. Diabetes ja verihiutaleiden vaste pieniannoksiselle aspiriinille. J Clin Endocrinol Metab. 2018; 103:4599–608.

14. McEwen BJ. Ruokavalion ja ravintoaineiden vaikutus verihiutaleiden toimintaan. Semin Thromb Hemost. 2014;40:214–26.

15. Lim ST, Coughlan CA, Murphy SJX, Fernandez-Cadenas I, Montaner J, Thijs V, et ai. Verihiutaleiden toiminnan testaus ohimenevässä iskeemisessä kohtauksessa ja iskeemisessä aivohalvauksessa: kattava systemaattinen katsaus kirjallisuuteen. Verihiutaleet. 2015;26:402–12.

16. Dhananjayan K, Forbes J, Münch G. Advanced Glycation, Diabetes ja Dementia. Julkaisussa: Tyypin 2 diabetes ja dementia; 2018. s. 169-93.

17. Kumagai Y, Nakatani S, Onodera H, Nagatomo A, Nishida N, Matsuura Y, et ai. Granaattiomena (Punica granatum L.) hedelmäuutteen ja sen komponenttien glykaatiota estävät vaikutukset in vivo ja in vitro. J Agric Food Chem. 2015; 63:7760–4.

18. Mattiello T, Trifrò E, Jotti GS, Pulcinelli FM. Granaattiomenamehun ja polyfenoliuutteen vaikutukset verihiutaleiden toimintaan. J Med Food. 2009;12:334–9.

19. Delgado-Andrade C, Morales FJ. Selvittää melanoidiinien osuuden kahvin antioksidanttisesta vaikutuksesta. J Agric Food Chem. 2005;53:1403–7.

20. Olszewska MA, Presler A, Michel P. Fenoliyhdisteiden profilointi ja valituista Sorbus-lajeista saatujen kuivauutteiden antioksidanttiaktiivisuus. Molekyylit. 2012;17:3093–113.

21. Séro L, Sanguinet L, Blanchard P, Dang BT, Morel S, Richomme P, et ai. Viritetään 96-kuoppamikrotiitterilevyn fluoresenssipohjainen määritys AGE-estäjien tunnistamiseksi raakakasviuutteista. Molekyylit. 2013;18:14320–39.

22. Piluzza G, Bullitta S. Fenolipitoisuuden ja antioksidanttiominaisuuksien väliset korrelaatiot 24:ssä perinteisessä etnoeläinlääketieteessä käytettävässä kasvilajissa Välimeren alueella. Pharm Biol. 2011;49:240–7.

23. Amri Z, Zaouay F, Lazreg-Aref H, Soltana H, Mneri A, Mars M, et ai. Granaattiomenan eri osien fytokemiallinen pitoisuus, rasvahappokoostumus ja antioksidanttipotentiaali: vertailu Tunisiassa kasvatettujen syötävien ja ei-syötävien lajikkeiden välillä. Int J Biol Macromol. 2017; 104:274–80.

24. Sohrab G, Angoorani P, Tohidi M, Tabibi H, Kimiagar M, Nasrollahzadeh J. Granaattiomenan (Punicagranatum) mehu vähentää lipidien peroksidaatiota, mutta ei vaikuta plasman edistyneisiin glykoituihin lopputuotteisiin aikuisilla, joilla on tyypin 2 diabetes: satunnaistettu kaksois sokea kliininen tutkimus. Ruoka. Nutr Res. 2015:59.

25. Liu W, Ma H, Frost L, Yuan T, Dain JA, Seeram NP. Granaattiomenafenolit estävät kehittyneiden glykaation lopputuotteiden muodostumista poistamalla reaktiivisia karbonyylilajeja. Ruokatoiminto. 2014; 5:2996–3004.

26. Aviram M, Volkova N, Coleman R, Dreher M, Reddy MK, Ferreira D, et ai. Granaattiomenan kuorista, helmistä ja kukista peräisin olevat fenolit ovat antiaterogeenisia: tutkimukset in vivo ateroskleroottisilla apolipoproteiini E-puutteisilla (E0) hiirillä ja in vitro viljellyillä makrofageilla ja lipoproteiineilla. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2008;56:1148–57.

27. Hannan JMA, Rokeya B, Faruque O, Nahar N, Mosihuzzaman M, Azad Khan AK, et ai. Trigonella foenum graecumin liukoisen ravintokuitufraktion vaikutus tyypin 2 diabeettisten mallirottien glykeemiseen, insuliiniseen, lipideemiseen ja verihiutaleiden aggregaatiotilaan. J Etnopharmacol. 2003;88:73–7.

28. Bagger M, Andersen O, Nielsen JB, Ryttig KR. Ravintokuidut vähentävät verenpainetta, seerumin kokonaiskolesterolia ja verihiutaleiden aggregaatiota rotilla. Br J Nutr. 1996;75:483–93.

29. Dutta-Roy AK, Gordon MJ, Kelly C, Hunter K, Crosbie L, Knight-Carpentar T, et ai. Ginkgo biloba -uutteiden estävä vaikutus ihmisen verihiutaleiden aggregaatioon. Verihiutaleet. 1999;10:298–305.

30. Dutta-Roy AK, Crosbie L, Gordon MJ. Tomaattiuutteen vaikutukset ihmisen verihiutaleiden aggregaatioon in vitro. Verihiutaleet. 2001;12:218–27.

Kustantajan huomautus 

Springer Nature pysyy neutraalina julkaistujen karttojen ja institutionaalisten yhteyksien suhteen.

【Lisätietoja: david.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】