Analyysi bioaktiivisista aineista ja Cistanche Tuberosan alkuperäeroista Xinjiangissa

Tiivistelmä: Kuusi tuotantoaluettaCistanche tubulosaTaklamakanin autiomaassa valittiin tutkimuskohteeksi ja määritettiin eri osien (juuri, keskiosa ja yläosa) bioaktiiviset aineet ja antioksidanttiaktiivisuus ja suoritettiin monimuuttujatilastollinen analyysi. Tulokset osoittivat, että tuotantoalueiden erot vaikuttivat merkittävästi Cistanche tubulosan bioaktiivisiin aineisiin (kokonaispolyfenolit,

flavonoidien, triterpeenien, polysakkaridien, proantosyanidiinien, ekinakosidin ja verbaskosidin kokonaispitoisuus) jaantioksidanttiaktiivisuuskaikilla oli merkittävä vaikutus, ja niissä oli merkittäviä erojabioaktiiviset aineeteri osissa.Cistanche tubulosaeri alkuperästä on vahvaantioksidanttiaktiivisuusin vitro DPPH:n vapaiden radikaalien poistamisnopeuden (IC50 DPPH) IC50 on alle 7 mg/ml ja ABTS:n vapaiden radikaalien poistamisnopeuden (IC50 ABTS) IC50 on alle 3 mg/ml ml. Korrelaatioanalyysi osoitti, että Cistanche tubulosan IC50 DPPH korreloi merkittävästi negatiivisesti kokonaispolyfenolien jaekinakosidisisällys; IC50 ABTS korreloi erittäin merkittävästi negatiivisesti kokonaispolyfenolien, kokonaispolysakkaridien, ekinakosidin javerbascosidesisällys. Pääkomponenttianalyysi erotti 3 pääkomponenttia, joiden varianssin kumulatiivinen osuus oli 80. 57 prosenttia; klusterianalyysi jakoi näytteet 3 ryhmään. Cistanche tubulosan kattava pisteytysjärjestys eri tuotantoalueilta on Kashi Jiashi County (0. 445), Alar City (0. 313), Hotan Moyu County (0, 051), Turpan Shanshan County (-0. 057), Hotan Yutian County (-0. 071), Bayingolengolengqiemo County (-0. 680).

Avainsanat: Cistanche tubulosa; bioaktiiviset aineet; erot tuotantoalueilla; kattava arviointi

Napsauta saadaksesi lisätietoja Cistanche Tubulosa -uutteen esittelystä

Johdanto

Cistanche tubulosa(Schrenk) Wight, joka tunnetaan myös nimellä Red Willow Dayun[1], yhdessä Cistanche deserticolan kanssa, sisällytettiin Kiinan kansantasavallan farmakopeaan Cistanche deserticolan lähdekasvina ja sisällytettiin "Ruoka ja lääketiede" -luetteloon. Homologinen", National Health Commission vuonna 2018[2].Cistanche tubulosaSisältää erilaisia ​​biologisesti aktiivisia aineita, kuten polyfenoleja, polysakkarideja, fenyylietanoliglykosideja, iridoideja ja niiden glykosideja jne. Veren rasvan vähentäminen [6], immuunisäätely [7], hermosuoja [8], osteoporoosin ehkäisy [{{3] }}], laksatiivinen [11-12], muistin parantaminen [13] ja muut toiminnalliset toiminnot, sillä on "aavikon ginsengin" maine.

Cistanche tubulosaloistaa yksinomaan Tamarix-kasvien juurissa, ja sitä levitetään Hetianissa, Kashgarissa, Aksussa ja muilla alueilla Taklamakanin autiomaassa Xinjiangissa, kotimaassani. Tutkimuksessa [14] havaittiin, että eri maantieteellisillä alueilla on erilaiset valo-, sade-, lämpötila- ja maaperäolosuhteet, millä on eriasteinen vaikutus kasvien kasvuun, kehitykseen ja luontaiseen laatuun."Kiinan kansantasavallan farmakopeassa" käytetään pääasiassa ekinakosidin ja verbaskosidin pitoisuus indeksinä Cistanche tubulosidin[2] laadun arvioimiseksi, mutta Cistanche tubatuksen bioaktiiviset aineet ovat monimutkaisempia. flavonoideilla, kokonaispolysakkarideilla, triterpeenien kokonaismäärällä, proantosyanidiinien kokonaismäärällä jne. on laaja valikoima farmakologisia vaikutuksia. Siksi usean indeksin laadunarviointimenetelmällä voidaan arvioida kattavammin Cistanche tubulosa -lääkemateriaalien laatua [1]. Tämän perusteella tämän artikkelin tarkoituksena on keskittyä Taklamakanin autiomaahan Xinjiangin vallassaCistanche tubulosatutkimuskohteena bioaktiivisten aineiden tyypit, sisällöt ja antioksidanttiset vaikutuksetCistanche tubulosaeri tuotantoalueilta tutkittiin ja kokonaisvaltaiseen arviointiin käytettiin korrelaatioanalyysiä, pääkomponenttianalyysiä ja systemaattista klusterointianalyysiä, jotta Xinjiangin eri tuotantoalueet selvitettiin. Cistanche tubulosan laatuerot tarjoavat teoreettista tukea ja referenssiä Cistanche tubulosan ja sen tuotteiden laadunvalvonnan vahvistamiseen sekä Cistanche tubulosan syväprosessoinnin ja kokonaisvaltaisen kehittämisen ja hyödyntämisen edistämiseen.

1. 1. 3 Tärkeimmät instrumentit ja laitteet Pilot3-6 m-tyyppinen pakastekuivaus

Sentrifugi, valmistaja Beijing Boyikang Experimental Instrument Co., Ltd.; TGL-20B-sentrifugi, valmistaja Shanghai Anting Scientific Instrument Co., Ltd.; 756-tyyppinen UV-näkyvä spektrofotometri, valmistaja Shanghai Qinghua Technology Instrument Co., Ltd.; LC-20AB korkean hyötysuhteen nestekromatografian tuotti japanilainen Shimadzu Corporation; Synergy H1 -monitoimisen mikrolevylukijan valmisti Porton Instruments Co., Ltd.

1.2 Biologisesti aktiivisten aineiden määritys

1. 2. 1 Kokonaispolyfenolipitoisuuden määritys Katso FH Li et al. [17]. Näyteliuoksen valmistus: Punnitse 0,50 g näytettä, käytä uuttoliuottimena 70-prosenttista (jos ei ole määritelty, prosenttiosuudet tekstissä viittaa tilavuusosaan) etanoliliuosta ja kiinteän aineen suhde nesteeseen on 1 :40 (g/ml, sama alla. ), uutettiin 60 asteen 250 W ultraäänilaitteella 40 minuuttia, jäähdytettiin ja sentrifugoitiin nopeudella 4000 r/min 10 minuuttia, kerättiin supernatantti ja laimennettiin 50 ml:ksi, laimennettiin sivuun. Ota 1 ml näyteliuosta, lisää 5 ml 10-prosenttista folinoliliuosta, värähtele ja ravista hyvin, 15 minuutin seisottamisen jälkeen lisää 4 ml 7,5-prosenttista Na2CO3-liuosta, värähtele ja ravista hyvin ja anna seistä pimeässä 20 minuuttia. Mittaa 1 minuutin kuluttua sen absorbanssi (A765), ja tulos ilmaistaan ​​gallushappoekvivalentteina (mg GAE/g DW).

1. 2. 2 Flavonoidien kokonaispitoisuuden määrittäminen

Katso Zhang Wenye et ai. [18]. Ota 1 ml näyteliuosta (sama kuin 1.2.1) 10 ml:n ruskeaan mittapulloon, lisää 0,3 ml NaNO2-liuosta, jonka massaosuus on 5 %, värähtele ja ravista. hyvin, anna seistä 15 minuuttia, lisää sitten 0,3 ml. Tee ml 10-prosenttista Al(NO3)3-liuosta ja 4 ml 4-prosenttista NaOH-liuosta, laimenna 10 ml:ksi 50-prosenttisella etanoliliuoksella, ravista

Ravista hyvin, ja sen jälkeen, kun olet seisonut pimeässä 20 minuuttia, mittaa sen absorbanssi (A510 ), tulos

Hedelmät ilmaistaan ​​rutiiniekvivalentteina (mg RE/g DW).

1. 2. 3 Triterpeenien kokonaispitoisuuden määrittäminen

Katso He Ce et ai. [19]. Ota 0,4 ml näyteliuosta (sama kuin 1.2.1), haihduta se kuiviin vesihauteessa, lisää sitten 0,4 ml 1,5-prosenttista vanilliini-jääetikkahappoliuosta ja 1,6 ml perkloorihappoa, 70-asteinen vesihaude 15 minuuttia, jäähdytyksen jälkeen lisää 5 ml etyyliasetaattia, 10 minuutin seisottamisen jälkeen mittaa sen absorbanssi (A560) ja tulos ilmaistaan ​​oleanolihappoekvivalentteina (mg OAE) /g DW).

1. 2. 4 Polysakkaridien kokonaispitoisuuden määritys

Katso Zhang Yadan et ai. [20]. Näytesesteen valmistus: 1.00 g näytettä punnittiin, uuttoliuottimena käytettiin deionisoitua vettä, kiinteän aineen ja nesteen suhde 1:30, uutettiin 60 asteen 250 W ultraäänilaitteella 50 min, jäähdytettiin ja sitten uutetaan olosuhteissa 4 000 r/min Sentrifugoi 10 minuuttia, kerää supernatantti, lisää 4 kertaa tilavuus 95-prosenttista etanoliliuosta, anna seistä 4 asteessa 12 tuntia, sentrifugoi sitten nopeudella 5 000 r/min, kerää saostetaan ja pestään asetonilla, eetterillä ja ilman. Pese vedellä ja etanolilla kahdesti, lisää sopiva määrä deionisoitua vettä liukenemaan uudelleen, suorita sitten proteiininpoisto (Sevage-menetelmä) ja pigmentinpoisto (aktiivihiilimenetelmä) ja laimenna 10 ml:ksi testaus. Ota 1 ml näyteliuosta, lisää peräkkäin 0,6 ml 6-prosenttista fenoliliuosta ja 3 ml väkevää H2SO4:a, värähtele ja ravista hyvin, aseta kiehuvaan vesihauteeseen 10 minuutiksi ja mittaa jäähdytyksen jälkeen sen absorbanssi (A490). , ja tulos ilmaistaan ​​glukoosiekvivalentteina (mg DE / g DW).

1.2.5 Proantosyanidiinipitoisuuden määrittäminen

Katso Lu Xiaon et ai. [21]. Näyteliuoksen valmistus: Punnitse 0,50 g näytettä, lisää 80-prosenttista etanolia

Liuosta käytettiin uuttoliuottimena kiinteän nesteen suhteen 1:30. Se uutettiin ultraäänilaitteella 50 asteessa ja 250 W:ssa 40 minuutin ajan. Jäähdytyksen jälkeen sitä sentrifugoitiin nopeudella 4000 r/min 10 minuuttia. Supernatantti kerättiin ja tilavuus säädettiin 50 ml:ksi. , varaosa.

Ota 0,5 ml näyteliuosta, lisää 3 ml 4-prosenttista vanilliini-metanoliliuosta ja 1,5 ml väkevää HCl-liuosta peräkkäin ja anna reagoida 15 minuuttia, mitata sitten sen absorbanssi (A500) ja tulokset ilmaistaan ​​proantosyanidiiniekvivalentteina (mg PCE / g DW )-ilmaisuina.

1. 2. 6 Ekinakosidi- ja verbaskosidipitoisuuden määrittäminen

Katso Xu Mingjunin et ai. [22]. Näytesesteen valmistus: Punnitse 1.00 g näytettä, käytä uuttoliuottimena 80 % etanoliliuosta, kiinteän aineen ja nesteen suhde 1:30, uutto 60 asteessa, 250 W ultraääni laite 40 minuuttia, jäähdytyksen jälkeen, uuta 4000 r Sentrifugoi 10 minuuttia nopeudella 1/min, kerää supernatantti, laimenna 50 ml:ksi ja aseta sivuun. Kromatografiakolonni oli Alltima C18 -kolonni (4,6 mm × 250 mm × 5 μm), liikkuva faasi oli 0,4-prosenttinen muurahaishapon (A)-asetonitriilin (B) vesiliuos, kolonnin lämpötila oli 25 astetta ja virtausnopeus 1,00 ml/min, injektiotilavuus oli 10 µl ja havaitsemisaallonpituus oli 330 nm. Kvantitatiivinen analyysi suoritettiin ulkoisella standardimenetelmällä.

1.2.7 Antioksidanttiaktiivisuuden määritys in vitro Näyteliuoksen valmistus: punnitaan

1. 20 g näytteitä uutettiin 60-prosenttisella etanoliliuoksella uuttoliuottimena ja kiinteän aineen suhde nesteeseen oli 1:25. Ne uutettiin ultraäänilaitteella 60 asteen ja 250 W:n teholla 40 minuutin ajan. Jäähdyttämisen jälkeen niitä sentrifugoitiin nopeudella 4500 r/min 15 minuuttia. , kerää supernatantti; ota useita sopiva määrä supernatanttia, laimenna 60-prosenttisella etanoliliuoksella niin, että nesteen pitoisuus on 1 mg/ml, 3 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg /ml, testattava.

1) DPPH:n vapaiden radikaalien poistamiskyky. Katso Xu Chunpingin menetelmä [23]. Ota 1{{10}} μL näyteliuosta, lisää 250 µl DPPH-liuosta, sekoita hyvin, lisää mikrotiitterilevylle, pidä poissa valolta huoneenlämmössä 25 minuuttia, käytä 60-prosenttista etanoliliuosta. nollakontrollina, mittaa sen absorbanssi (A517 ) ja laske DPPH seuraavan kaavan mukaan Vapaiden radikaalien poistonopeus. DPPH:n vapaiden radikaalien poistonopeus=1-A1-A2A0( ) × 100 prosenttia Kaavassa: A0 on 60-prosenttisen etanoliliuoksen absorbanssi näyteliuoksen sijasta (nollakontrolli); A1 on DPPH-liuoksen kanssa sekoitetun näyteliuoksen absorbanssi; A2 on absoluuttisen etanolin absorbanssi DPPH-liuoksen sijaan.

2) ABTS:n vapaiden radikaalien poistamiskyky. Katso Kong Yutingin et al. [24]. ABTS:n emäliuos oli kaliumpersulfaatin (lopullinen konsentraatio: 2,45 mmol/L) ja ABTS:n (lopullinen konsentraatio: 7 mmol/L) sekoitettu liuos, joka oli valmistettu deionisoituun veteen ja seisoi 25 asteessa 12 tuntia pimeässä. Ennen kuin käytät ABTS-emäliuosta, laimenna se deionisoidulla vedellä niin, että absorbanssi (A734) on 0,7{{10}}±0,05, mikä on ABTS-työliuos. Ota 10 µl näyteliuosta (1 ~ 40 mg/ml), lisää se mikrotiitterilevylle, lisää sitten 200 µl ABTS-työliuosta, pidä sitä pimeässä 30 minuuttia huoneenlämmössä, käytä 60-prosenttista etanoliliuosta nollakontrollina. , ja mittaa sen A734 seuraavan kaavan mukaan laskeaksesi ABTS:n vapaiden radikaalien poistonopeuden. ABTS:n vapaiden radikaalien poistonopeus=1-A'1-A'2A0( ) × 100 prosenttia missä: A'1 on absorbanssi näyteliuoksen ja ABTS-liuoksen sekoittamisen jälkeen; A′2 on deionisoidun veden absorbanssi ABTS-liuoksen sijaan.

1.3 Tietojen analyysi

Kaikki tiedot mitattiin rinnakkain kolme kertaa ja tulokset ilmaistiin (keskiarvo ± standardipoikkeama). Origin 2019:ää käytettiin pääkomponenttianalyysiin ja systemaattiseen klusterianalyysiin ja SPSS Statistics 26:ta varianssianalyysiin. P<0. 05 indicated a significant difference.