Ihotautien edistysaskel DNA Aptamer "Aptamin C" -innovaatioiden avulla: oksidatiivisen stressin ehkäisy ja C-vitamiinin vaikutuksen maksimointi antioksidantin avulla

joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Sooho Choi PhD1|Jeongmin Han Ph.D. Ehdokas2|Ji Hyun Kim MS-ehdokas1|A-Ru Kim Ph.D. Ehdokas3|Sang-Heon Kim Ph.D. Ehdokas3|Weontae Lee Ph.D., professori2|Moon-Young Yoon Ph.D., professori3|Gyuyoup Kim PhD1|Yoon-Seong Kim Ph.D., professori1

Abstrakti

Tausta:C-vitamiini(tunnetaan myös nimellä L-askorbiinihappo) on tärkeä rooli reaktiivisten happilajien (ROS) vähentämisessä ja solujen uudistamisessa suojaamalla soluja oksidatiiviselta stressiltä. Vaikka C-vitamiinia käytetään laajalti kosmeettisissa ja terapeuttisissa markkinoilla, on olemassa huomattavaa näyttöä siitä, että C-vitamiini kulkeutuu helposti läpihapettumistailman, pH:n, lämpötilan ja UV-valon vaikutuksesta varastoinnin aikana. Tämä C-vitamiinin puute heikentää sen tehoa antioksidanttina ja lyhentää C-vitamiinia sisältävien tuotteiden säilyvyyttä. C-vitamiinin puutteen voittamiseksi olemme kehittäneet Aptamin C:n, innovatiivisen DNA-aptameerin, joka maksimoi C-vitamiinin antioksidanttisen tehon sitoutumalla C-vitamiinin pelkistettyyn muotoon ja viivästyttää sen kehittymistä.hapettumista.

Menetelmät:Aptamiini C:n sitoutuminen C-vitamiiniin määritettiin käyttämällä ITC-analyysiä. ITC-koe suoritettiin arvolla 0,2 mmol/LC-vitamiinijoka injektoitiin 25 kertaa 2 µl:n erissä 1,8 ml:n näytekennoon, joka sisälsi Aptamin C:tä pitoisuutena 0.02 mmol/L. Tiedot sovitettiin yhden paikan sitovaan isotermiin käyttämällä ITC v.5.0:n origo-ohjelmaa.

Tulokset:Aptamin C:n vaikutuksen tutkimiseksi jaC-vitamiinimonimutkaisia ​​ihmisnahoja, suoritettiin sekä in vitro että kliiniset testit. Havaitsimme, että Aptamiini C:n ja C-vitamiinin kompleksi oli merkittävästi tehokas parantamaan ryppyjä, valkaisemaan ja lisäämään nesteytystä. Kliinisessä testissä kompleksilla hoidetut koehenkilöt osoittivat dramaattista parannusta ihon ärsytykseen ja kutinaan. Aptamin C -kompleksi ei aiheuttanut haitallisia reaktioita testissä.

Johtopäätös:Yhdessä nämä tulokset osoittivat, että Aptamin C, innovatiivinen uusi yhdiste, tulisi mahdollisesti palvella keskeisenä kosmeettisena ainesosana useisiin ihosairauksiin.

AVAINSANATantioksidantti, Aptamiini C (C-vitamiinia sitova Aptamer),hapettumista, oksidatiivista stressiä,C-vitamiini(L-askorbiinihappo)

cistancheniillä on vahva antioksidanttikyky

1|JOHDANTO

Reaktiiviset happilajit (ROS) ovat kemiallisesti reaktiivisia kemikaaleja, jotka sisältävät happea, jolla on tärkeä rooli solujen signaloinnissa ja homeostaasissa.{0}} Näitä ovat paitsi positiiviset vaikutukset, kuten isännän puolustusgeenien induktio ja ioninkuljetusjärjestelmien mobilisointi, vaan myös rooli apoptoosissa (ohjelmoitu solukuolema).4,5ROS-tasoja voi nostaa ympäristön stressi, mikä johtaa solurakenteiden vaurioitumiseen.3 Tätä ilmiötä kutsutaan "hapetusstressiksi". Oksidatiivinen stressi on yksi johtavista syistä eri sairauksiin, mukaan lukien hermostoa rappeuttavat sairaudet, Lou Gehrigin tauti, autismi, multippeliskleroosi ja ihotaudit.6-15 Lisäksi oksidatiivisella stressillä on suora vaikutus ihon ikääntymisprosessiin16; proteiinit, lipidit ja DNA reagoivat herkästi ROS:n aiheuttamaan oksidatiiviseen stressiin.17 Antioksidantit suojaavat ihoa erittäin tehokkaasti, koska ne reagoivat suoraan ROS:iin ja estävät niitä pääsemästä biologisiin kohdemolekyyleihin.18,19 Antioksidantit, kuten esim.C-vitamiini, E-vitamiini, koentsyymi Q10 ja polyfenoliyhdisteet suojaavat ihoa ROS:n aiheuttamilta vaurioilta. Antioksidantit auttavat siten ehkäisemään ja hoitamaan erilaisia ​​ihosairauksia ja hidastamaan ihon ikääntymisprosessia.20 C-vitamiinin käyttö teollisuudessa johtuu ensisijaisesti sen antioksidanttisista ominaisuuksista, jotka johtuvat mm.C-vitamiinikyky neutraloida vapaita happiradikaaleja radikaalinpoistoksi kutsutun prosessin kautta.21,22 Kuitenkin näiden samojen antioksidanttiominaisuuksien vuoksi molekyyli itsessään on luonnostaan ​​herkkä hajoamaanhapettumista. Tämän ongelman ratkaisemiseksi kehitimme Aptamin C:n, DNA-aptameerin, joka sitoutuu spesifisesti C-vitamiiniin ja estää C-vitamiinin hapettumista. Aptameerit ovat yksijuosteisia DNA- tai RNA-pohjaisia ​​oligonukleotideja, jotka kykenevät sitomaan selektiivisesti monia molekyylejä. Aptameerit tunnistetaan tavallisesti in vitro -valintamenetelmällä, jota kutsutaan ligandien systemaattiseksi evoluutioksi eksponentiaalisella rikastuksella tai "SELEXillä". Havaitsimme, että Aptamin C estäähapettumistaC-vitamiinia useista hapettimista ja ylläpitää antioksidanttista aktiivisuutta pitkäaikaisen varastoinnin aikana. Aptamin C:n turvallisuusarvioinnin vahvistamiseksi suoritettiin kokeita solutasolla ja niitä sovellettiin suoraan ihmisiin, eikä toksisuutta havaittu. Ihosairaudet, kuten atooppinen ihottuma, psoriasis ja akne, liittyvät immuunivasteeseen ja ROS:iin.23C-vitamiinisillä on kyky poistaa ROS ja sillä on tulehdusta estävä vaikutus.24 Aptamiini C estäähapettumistac-vitamiinia ja maksimoi sen tehon hitaan vapautumisen ansiosta. Odotamme siksi, että Aptamin C-C-vitamiinikompleksi osoittaa synergisen vaikutuksen.

2|MATERIAALIT JA MENETELMÄT

2.1|Aptamer-seulonta C-vitamiinia vastaan ​​pelkistetyllä grafeenioksidilla

Tämä menetelmä on toteutettu modifioimalla aiemman tutkimuksen menetelmää.25 ssDNA-ehdokkaat, jotka voivat sitoutua spesifisestiC-vitamiinikehitettiin satunnaisesta ssDNA-kirjastosta, joka koostuu noin 1 x 1018 eri sekvenssistä. ssDNA-kirjastossa käytimme räätälöityä sekvenssiä, jonka koko on 60 meeri ja joka sisältää 30 satunnaisesti muodostettua nukleotidisekvenssiä ja alukekohtaa monistusta varten (5'-ATGCGGATCCCGCGC-(N)30-GCGCGAAGCTTGCGC-3). Teimme yhteensä viisi kierrosta samalla kun muutimme koeolosuhteita valitaksemme tarkemman sekvenssin. Reaktion kokonaistilavuus oli 200 µl. Noin 20 μl 10x sitoutumispuskuria (10 × PBS lisätty 10 mmol/l MgCl2), 80 μl rGO:ta (5 mg/ml, laimennettu veteen) ja 200 pikomoolia ssDNA-kirjastoa (20 μl 100 μmol/l kantaliuosta) ) lisättiin ja täytettiin dH2O 200 µl:ksi. Reaktio eteni 30 minuuttia ssDNA-kirjaston sitomiseksi rGO:han, ja sitten seosta sentrifugoitiin 20 000 g:llä 20 minuuttia supernatantin poistamiseksi. RGO-pelletti pestiin 1 kerran 200 µl:lla sitoutumispuskuria, joka on sama pitoisuus kuin kunkin kierroksen kohdesidosolosuhteet. Ehdokkaiden eluoimiseksi 200 nanomooliaC-vitamiini200 μl:aan sitoutumispuskuria laimennettuna lisättiin rGO-pellettiin, ja eluointivaihe kesti 1 tunnin. Eluoitu ssDNA jaettiin sentrifugoimalla, se tehtiin 20 000 g 20 minuutin ajan ja monistettiin. Teimme EtOH-saostuksen poistaaksemme epäpuhtaudet paitsi ssDNA:n ennen monistusta. Teimme asymmetrisen PCR:n monistetun ssDNA:n saamiseksi. Eteenpäin suuntautuvan alukkeen suhde asymmetrisen PCR:n käänteiseen alukkeeseen oli 10:1. Teimme elektroforeesin 2,5-prosenttisella agaroosigeelillä vahvistaaksemme PCR-tuotteen muutamalla mikrolitralla sitä. Epäsymmetrinen PCR ei voi tuottaa vain ssDNA:ta. Joten teimme murskaus- ja liotusmenetelmän ssDNA-ehdokkaiden eristämiseksi. Menetelmää varten teimme elektroforeesin 12-prosenttisella polyakryyliamidin natiivigeelillä ja värjäsimme geelin etidiumbromidilla (EtBr). Kaksijuosteisen DNA:n (dsDNA) ja ssDNA:n erottamiseksi ssDNA:lla värjätty osa geelistä leikattiin pois, jauhettiin ja uutettiin ssDNA murskaus- ja liotuspuskurilla (500 mmol/l NH4OAc, 0,1 % SDS, 0,1 mmol/l EDTA) yli yön. Jauhettu geeli erotettiin sentrifugoimalla. Supernatantti, joka sisältää ssDNA:ta, konsentroidaan ja puhdistetaan tekemällä EtOH-saostus. Kuivattu ssDNA kerättiin steriloidulla dH2O:lla ja tätä käytettiin seuraavalla kierroksella kirjastona.

luonnolliset ainesosatcistanche amazon

2.2|Isoterminen titrauskalorimetria (ITC) -koe

Isoterminen titrauskalorimetrikoe suoritettiin käyttämällä VP-ITC-järjestelmää (MicroCal Inc Northampton) 25 asteessa fosfaattipuskurisuolaliuoksessa, joka koostui 1 mmol/l magnesiumkloridista (pH 7,4). Ennen jokaista titrauskoetta Aptamin C 2 ml jaC-vitamiini600 µl:n näytteestä poistettiin kaasut 30 minuuttia tyhjössä, ilman sekoitusta, muutaman asteen kokeen lämpötilaa alhaisemmassa lämpötilassa. Valmistimme 0,2 mmol/l C-vitamiinia, joka injektoitiin 25 kertaa 2 µl:n erissä 1,8 ml:n näytekennoon, joka sisälsi Aptamin C:tä pitoisuutena 0,02 mmol/l. Tiedot sovitettiin yhden paikan sitoutumisisotermiin käyttämällä ITC v.5.0:n (MicroCal Inc) alkuperäohjelmaa.

2.3|Fluoresenssipohjaiset mikrolevymääritykset C-vitamiinin hapettumista varten

Hapetus/C-vitamiinimitattiin havaitsemalla hapettunut tuote dehydroaskorbaatti (DHA) käyttäen modifioitua versiota Visliselin et al. kuvaamasta menetelmästä.7 Tässä menetelmässä DHA havaitaan reaktiolla o-fenyleenidiamiinin (OPDA) kanssa fluoresoivan kondensaatiotuotteen muodostamiseksi 3‐( dihydroksietyyli)furo[3,4-b]kinoksaliini-1-oni. Määritys suoritettiin seuraavasti mustilla 384-kuoppalevyillä (Greiner Bio‐One). Aptameerit liuotettiin ensin fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen, pH 7,2, joka sisälsi 1 mM MgCl2:ta, pitoisuudessa 200 µmol/L, sitten laskostettiin kuumentamalla 95 asteeseen ja annettiin jäähtyä hitaasti huoneenlämpötilaan 15 minuuttia. Taitetut aptameerit laimennettiin sitten suhteessa 1:1 (tilavuus:tilavuus) juuri valmistettuun liuokseen, jonka pitoisuus oli 5 mmol/l.C-vitamiinimäärityspuskurissa [50 mmol/l natriumasetaattia, 1 % (w/v) BSA:ta, 0,05 % (v/v) Tween 20, 1 mM MgCl2 (Sigma, kaikki komponentit) säädetty pH-arvoon 5,5] ja seosta inkuboitiin 30 minuuttia huoneenlämpötilassa, jotta aptameerit voivat sitoutua ennen hapettimen lisäämistä. Sitten C-vitamiini/aptameeriliuoksiin lisättiin hapettimia (EM) H202:n (Sigma) pitoisuuksina. Hapettavat aineet esilaimennettiin niiden käyttöpitoisuuksiin määrityspuskurissa. Sitten näytteitä inkuboitiin huoneenlämpötilassa 10 minuuttia ennen OPDA:n (Sigma) lisäämistä pitoisuutena 5,5 mmol/l määrityspuskurissa. Välittömästi OPDA:n lisäämisen jälkeen näytteiden fluoresenssi aallonpituudella 425 nm määritettiin käyttämällä SpectraMax® i3X -levylukijaa (Molecular Devices) virityksellä 345 nm:ssä 45 minuutin ajan mittausten ollessa 60 sekunnin välein. Kaikki näytteet ja reagenssia sisältävät astiat käärittiin folioon niiden suojaamiseksi valolta kaikkien fluoresenssimäärityksiä varten suoritettujen inkubaatioiden aikana.

2.4|C-vitamiinin vähenemisen mittaaminen DCPIP:llä (2,6-dikloorifenolindofenoli)

Vähennyksen määrittämiseksiC-vitamiini, suoritimme kokeet käyttämällä DCPIP-reaktiota. C-vitamiini reagoi DCPIP:n kanssa ja muuttaa värin sinisestä värittömäksi. Valmistettua C-vitamiinia käsiteltiin 5-prosenttisella Aptamin CTM:llä, ja käsittelemätöntä C-vitamiinia inkuboitiin huoneenlämmössä 8 viikkoa. Näyte mitattiin 2, 4 ja 8 viikon kuluttua. Noin 2 ml DCPIP:tä lisättiin erlenmeyerkolviin pipetillä ja ensimmäinen käsittelemätön C-vitamiini lisättiin, kunnes liuos muuttui värittömäksi. MääräC-vitamiinilisätty mitattiin ja toistettiin muiden näytteiden kanssa. Kunkin näytteen pienenemisaste laskettiin näiden tietojen perusteella.

2,5|In vitro -tutkimus ryppyjä estävästä vaikutuksesta ihmisen ihon fibroblasteissa

Solujen elinkelpoisuuden arvioimiseksi ihmisen ihon fibroblasteissa soluja käsiteltiin erilaisilla loppupitoisuuksilla Aptamin C:tä.C-vitamiini(Aptamiini C ug plus C-vitamiini ug/ml) {{0}}.01 plus 0,5 ug/ml, 0,1 plus 5 ug/ml, 0,5 plus 25 ug /ml, 1 plus 50 ug/ml ja 2 plus 100 ug/ml. Ja sitten soluja käsiteltiin Aptamiini C:n pitoisuuksilla C-vitamiinilla solunsisäisen kollageenin, solunsisäisen kollagenaasin (MMP-1) ja elastaasiaktiivisuuden havaitsemiseksi.

Ihmisen ihon fibroblastit (HDF:t) valittiin MFDS:n "Funktionaalisen kosmetiikan (I) tehokkuuden arvioinnin ohjeiden" perusteella. HDF-soluja viljeltiin korkean glukoosin DMEM/F12 3:1-seoksessa, jota oli täydennetty 10 prosentilla FBS:llä ja 1 prosentilla antibiootti-antimykoottia kostutetussa 5 prosentin CO2-ilmakehässä 37 °C:ssa.

HDF:t (5 x 104 solua/kuoppa) siirrostettiin 24-kuoppaisille levyille ja niitä inkuboitiin 24 tuntia ja niitä käsiteltiin erilaisilla pitoisuuksilla Aptamin C:tä.C-vitamiinija inkuboitiin 24 tuntia. 24 tunnin kuluttua supernatantti kerättiin ja alustaan ​​vapautuneen prokollageenin määrä mitattiin 450 nm:ssä käyttämällä Procollagen Type IC-Peptide (PIP) ELISA Kit -sarjaa. Kollageenin tuotantoaste kalibroitiin kokonaisproteiinipitoisuudella ja verrattiin TGF‐1:een positiivisena kontrollina. Elatusaineita ilman testimateriaaleja käytettiin liuotinkontrollina.

HDF:t (5 x 104 solua/kuoppa) siirrostettiin 24-kuoppaisille levyille ja niitä inkuboitiin 24 tuntia ja niitä käsiteltiin erilaisilla pitoisuuksilla Aptamin C:tä.C-vitamiinija inkuboitiin 48 tuntia. 48 tunnin kuluttua kollagenaasin aktiivisuus mitattiin 450 nm:ssä käyttämällä MMP-1 Human ELISA Kit -sarjaa. MMP-1-aktiivisuus arvioitiin kokonaisproteiinipitoisuuden perusteella ja sitä verrattiin TGF-1:een positiivisena kontrollina. Elatusaineita ilman testimateriaaleja käytettiin liuotinkontrollina.

Kaikki tiedot ilmaistiin keskiarvona ± standardipoikkeama ja ne olivat peräisin 3 riippumattomasta kokeesta. Tilastollinen analyysi suoritettiin riippumattomien näytteiden t-testillä käyttäen SPSS®-ohjelmistoa (IBM) P < 0,05="">

2,6|Ihon ryppyjen mittaus 3D-kuvan analysointijärjestelmällä

Tähän tutkimukseen osallistui 22 naista (keski-ikä: 50,05 ± 2,94 vuotta). Varisjalkojen ihoryppyä arvioitiin 3D-kuvan analysointijärjestelmällä lähtötilanteessa 4 ja 8 viikolla. Ihon nesteytys arvioitiin kapasitanssimenetelmällä ja TEWL ihon pintaveden diffuusiomenetelmällä ja ihon elastisuus imumenetelmällä arvioitiin lähtötilanteessa, 2, 4 ja 8 viikkoa hoidon jälkeen. Myös tehoa koskevat itsekyselylomakkeet täyttivät koehenkilöt 2. ja 4. ja 8. viikon kohdalla ja käytettävyyttä koskevat kyselyt 8 viikon kuluttua hoidon aloittamisesta. Kaikki saadut tiedot analysoitiin tilastollisesti SPSS®-ohjelmistolla. Varisjalkojen ryppyparametrit arvioitiin PRIMOS® Premiumilla (GFMesstechnik GmbH). Tämä järjestelmä mahdollisti ihon ulkonevien ryppyjen karheuden, syvyyden, alueen ja tilavuuden kvantitatiivisen analyysin. Kuva analysoitiin samalta alueelta ihon ryppyjen parametrien suhteen (1, ryppyjen keskisyvyys; 2, suurin syvyys; 3, suurin syvyys; 4, ryppyjen kokonaispinta-ala; 5, ryppyjen kokonaistilavuus; 6 , ryppyjen kokonaismäärä; 7, ryppyjen kokonaispituus; 8, Ra; 9, Ry ja 10, Rz) lähtötilanteessa, 4 ja 8 viikkoa Primos 5.8 E ver -hoidon jälkeen. Ohjelmisto.

3|TULOKSET

3.1|Tiukka lähestymistapa puskurin valmisteluun vaadittiin rGO-SELEXin onnistuneeseen suorittamiseen epävakaan kohteen kanssa

SsDNA-kirjasto, joka sitoutui rGO:hen π‐π-pinoamisvuorovaikutusten kautta grafeenipinnan aromaattisten renkaiden ja DNA-emästen 26,27 ja sitoutumattoman ssDNA:n välillä rGO:ssa, erotettiin ja poistettiin sentrifugoimalla. rGO-pintaan adsorboitunut ssDNA eluoitiin käsittelemällä kohdeyhdisteellä. Kirjallisuusraporttien mukaan aptameerin konformaatio muuttuu sitoutumisen jälkeen kohteeseen ja heikentämällä π‐πpinoamisvuorovaikutuksia rGO:n kanssa.28-31 Tämä prosessi toistettiin viiden kierroksen ajan. Jokainen seuraava kierros eteni ankarammilla puskuriolosuhteilla ja lyhyemmillä eluointiajoilla. Tämä suorituskyky antoi meille mahdollisuuden ylläpitää ssDNA:ta paremmalla spesifisyydellä kohdeyhdisteille.

rGO‐SELEX-prosessilla tuotetun rikastetun kirjaston NGS-tiedot tuottivat 404071 sekvenssiä. Valitsimme näistä tiedoista 119 sekvenssiä, lajittelimme ne 11 ryhmään rakenteen samankaltaisuuden perusteella ja valitsimme edustavat sekvenssit aptameeriehdokkaille (kuvio 1A).

3.2|Aptamiini C:n valinta

Aptamin C -kandidaattien toissijaiset rakenteet ennustettiin käyttämällä vapaata M-Fold-ohjelmistoa.32,33 Ehdokkaat ryhmiteltiin niiden sijainnin, pituuden, muodon sekä suurimman potentiaalisen rakenteen varren ja silmukan lukumäärän mukaan (kuva 1B). DHA, oksidiC-vitamiini, havaitaan sen reaktiossa indikaattorina toimivan o-fenyleenidiamiinin (OPDA) kanssa.34 Jos aptameeri sitoutuu ja estää senhapettumista, C-vitamiiniksi ja estää sen hapettumisen, C-vitamiinin ja OPDA:n kondensaatiotuotteen 3-(dihydroksietyyli)-furo-[3,4-b]-kinoksaliini-1-onin fluoresenssisignaali on pienempi kuin aptameeriton ohjaus. Käyrä kustakin ehdokasaptameeristä sekoitettuna C-vitamiinin ja hapettimen kanssa positiivisten kontrollien kanssa,C-vitamiiniplus hapetin- ja sekoitussekvenssit sekoitettuna C-vitamiinin ja hapettimen kanssa (kuva 1C). Viidellä aptameerilla, Aptamin Cb, Cc, Cf, Cg ja Ck, osoitettiin olevan hapettumisenestovaikutuksia.

3.3|C-vitamiinin hapettumisen esto Aptamiini C:llä

Aptamiini C:llä on korkea sitoutumisaffiniteettiC-vitamiini. Aptamiini C:n sitoutuminen C-vitamiiniin määritettiin käyttämällä ITC-analyysiä. Sitoutumisisotermistä voidaan saada sitoutumisreaktion entalpia (ΔH), entropia (ΔS) ja stoikiometria (n). Aptamiini Cb:n eksoterminen sitoutuminen havaittiin ITC-mittauksella ja entalpia (ΔH) laskettiin 302,5 ± 3,788, entropia (ΔS) laskettiin 18,9, stoikiometria (n) laskettiin 56,7 ± {{21 }},426, ja dissosiaatiovakiot (Kd) laskettiin 2,13 uM C-vitamiinille. Aptamin Cf:n eksoterminen sitoutuminen havaittiin ITC-mittauksesta ja entalpia (ΔH) laskettiin arvoksi 279,2 ± 2,992, entropia (ΔS) laskettiin 18,4, stoikiometria(n) laskettiin 167 ± 1,15 ja dissosiaatiovakiot (Kd) laskettiin 0,89 uM C-vitamiinille. Aptamiini Ck:n eksoterminen sitoutuminen havaittiin ITC-mittauksesta ja entalpiasta (ΔH) ) laskettiin 250,4 ± 3,742, entropia (ΔS) laskettiin 19,8, stoikiometria (n) laskettiin 82,2 ± 0,732 ja dissosiaatiovakiot (Kd) laskettiin 0,90 µmol/L C-vitamiinia (kuva 2A). ITC-mittaukset osoittavat, että entropian muutos, kun se yhdistetään Aptamin C:hen, on tärkeä liikkeellepaneva voimaC-vitamiini. EstäähapettumistaC-vitamiinista nestemäisessä tilassa, kaikki liuokset valmistettiin typellä käsitellyllä deionisoidulla vedellä. Fluoresenssi ilmaistiin ja analysoitiin kvantitatiivisesti, kun OPDA (o-fenyleenidiamiini) sitoutui DHA:han, jonkahapettumistaC-vitamiinin hapettumisastetta Aptamiini C:n pitoisuuden (125, 250, 500 ja 1000 nmol/L) mukaan verrattiin ja vahvistettiin OPDA-määrityksellä. Tulokset osoittivat, ettäC-vitamiinikonversio dehydroaskorbiinihapoksi oli hitaampaa, kun Aptamin C:n pitoisuus oli korkeampi. (Kuva 2B). Nämä tiedot osoittavat, että Aptamin C on annoksesta riippuvainen C-vitamiinin hapettumisen estäjä.

Teimme kokeita selvittääksemme, voisiko Aptamin C estäähapettumistaC-vitamiinia pitkän ajan kuluessa. Aptamiini C -yhteiskäsiteltyC-vitamiini, ja käsittelemätön C-vitamiini altistettiin valolle ja annettiin seistä huoneenlämmössä 8 viikkoa. Seurauksena oli, että kun käsittelemätön C-vitamiini jätettiin yksin, pelkistysaste putosi alle puoleen 2 viikossa, ja lähes kaikki niistä hapettuivat 4 viikon kuluttua. Aptamiini C:n läsnä ollessa C-vitamiini väheni noin puoleen 8 viikkoon (kuvio 2C). Tämä viittaa siihen, että Aptamin C estää C-vitamiinin hapettumista pitkän ajan kuluessa.

cistanche-kehonrakennus

3.4|Solunsisäisen kollagenaasin (MMP-1) ja kollageenin analyysi

Kollagenaasiaktiivisuuden analyysissä matriisin metalloproteinaasi-1:n (MMP-1) tuotanto väheni merkittävästi annoksesta riippuvaisella tavalla, 706 prosenttia, 9,29 prosenttia ja 31,81 prosenttia {{1{-pitoisuuksilla. {12}}}.01 plus 0.5 ug/ml, 0.1 plus 5 ug/ml ja 0.5 plus 25 ug/ ml, vastaavasti (kuvio 3A). Kollageenisynteesin analyysissä prokollageenin tyypin Ι karboksiterminaalinen peptidi (PIP) lisääntyi merkittävästi annoksesta riippuvaisella tavalla, 25{{20}} prosentin lisäys arvolla 0,01 plus 0,5 ug/ml 41,99 prosenttia pitoisuudessa 0,1 plus 5 ug/ml ja 71,18 prosenttia pitoisuudessa 0,5 plus 25 ug/ml (kuvio 3B).

3,5|Kliininen tutkimus ihon ryppyjä parantavista vaikutuksista ihmisen ihoon

Ryppyparametrien tilastollinen analyysi suoritettiin 3D-kuva-analysointijärjestelmällä testattavan tuotteen ihon ryppyjä parantavien vaikutusten arvioimiseksi ihmisen iholla. Vertailuryhmään verrattuna "ryppyjen keskisyvyys" -parametri pieneni 4,77 prosenttia 4 viikon kohdalla ja 4,25 prosenttia 8 viikon kohdalla, "keskimääräinen syvyys suurin ryppy" -parametri pieneni 3,37 prosenttia 4 viikon kohdalla ja 4,53 prosenttia 8 viikon kohdalla." Suurin syvyys suurin ryppy" -parametri pieneni 4,36 prosenttia 4 viikon kohdalla ja 7,19 prosenttia 8 viikon kohdalla, "ryppyjen kokonaispituus" -parametri pieneni 1,61 prosenttia 4 viikon kohdalla ja 2,67 prosenttia 8 viikon kohdalla, "Ra" -parametri pieneni 4,22 prosenttia. 4 viikon kohdalla ja 3,90 prosenttia 8 viikon kohdalla, "Ry"-parametri pieneni 2,66 prosenttia 4 viikon kohdalla ja 7,11 prosenttia 8 viikon kohdalla, "Rz"-parametri pieneni 3,69 prosenttia 4 viikon kohdalla ja 6,22 prosenttia 8 viikon kohdalla, vähennys oli 3,69 prosenttia –7,11 prosenttia (kuva 4).

4|PÄÄTELMÄ

C-vitamiinion kaupallisesti tärkeä mutta epävakaa molekyyli, joten sen stabiiliuden parantaminen on kiinnostavaa useille markkina-aloille. Työmme osoittaa, että Aptamin C, DNA-aptameerit, mahdollisesti pidentää säilyvyysaikaa ja lisää tällaisten tuotteiden tehoa viivyttämälläC-vitamiini hapettumistaratkaisussa. Esittelimme Aptamin C -kompleksin kliinistä tehoa ryppyjen parantamisessa ja ihon kosteuttamisessa. Aptamin C -kompleksi voi myös auttaa lievittämään ihoa kovissa olosuhteissa.

parantaa ihon valkaisua