Acteoside: Tutkimus antioksidanttisesta ja verenpainetta alentavasta vaikutuksesta

Ottaa yhteyttä:joanna.jia@wecistanche.com

Akteosidin ja sen analogien antioksidantti- ja verenpainetta alentavat vaikutukset

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* ja Miao-Lin HU1,*

Abstrakti. Acteoside(Act), fenyylietanoidiglykosidi, on aktiivinen yhdiste useissa kasveissa ja perinteisissä kasviperäisissä lääkkeissä. Toimi yhdessä sen rakenteellisen isomeerin kanssa,isoakteosidi(Isoact) ja analoginen, 6-O-asety-lakteosidi (6-O-asetylact), käytettiin tutkimuksessa tutkittaessaantioksidanttianti-angiotensiinikonvertoivaa entsyymiä (ACE) ja hemolyysiä estäviä vaikutuksiasisään vitroja verenpainetta alentava vaikutus spontaanisti hypertensiivisille rotille (SHR)sisään vivo. Osoitimme, että Act, Isoact ja 6-O-asetylact poisti tehokkaasti 1,1-difenyyli-2-pikryylihydratsyyliradikaaleja (IC50 arvoilla 11,4, 9,48 ja 9,55 μM, vastaavasti) ja superoksidiradikaaleja (IC50:llä 386,5, ja 39,1 μM, vastaavasti). Isoact ja 6-O-asetylactilla oli samanlaisia ​​radikaaleja poistavia vaikutuksia, vain Actia ja Isoactia käytettiin seuraavissa tutkimuksissa. Sekä Act että Isoact estivät ksantiinioksidaasin aktiivisuutta IC50-arvolla 53,3 ja 62,2 µM. Sekä Act että Isoact estivät myös merkittävästi ACE-aktiivisuutta ja 2,2'-atso-bis(2-amidinopropaani)dihydrokloridin indusoimaa hemolyysiä, mutta Actin vaikutukset olivat voimakkaammat kuin Isoactin. Annoimme sitten suun kautta yhden annoksen Actia tai Isoactia (10 mg/kg ruumiinpainoa) SHR:ään ja mittasimme systolisen verenpaineen (SBP) ja diastolisen verenpaineen (DBP) muutokset 24 tunnin aikana. Act, mutta ei Isoact, osoitti verenpainetta alentavaa vaikutusta SBP:n ja DBP:n alentamisessa. Tulokset viittaavat lain mahdolliseen käyttökelpoisuuteen terveysruokatuotteenaantioksidanttisuoja ja verenpaineen säätely.

Avainsanat: Acteoside; Verenpainetta alentava vaikutus; Angiotensiinia konvertoiva entsyymi (ACE); Antioksidantti; Hemolyysi.

aktiivinen ainesosa akteosidi säiliössä

JOHDANTO

Acteoside(Act), fenyylietanoidiglykosidi, joka sisältää kofeiinihappoa, 3',4'-dihydroksifenyylietanolia, glukoosia ja ramnoosia, eristettiin ensimmäisen kerran kukistaSyringa Vul- garis(Birkofer et ai., 1968) ja yhdessä rakenteellisen isomeerin kanssaisoakteosidi(Isoact) ja johdannainen6-O-asetyylilakteosidi(6-O-asetylact), on löydetty monista kasveista ja kasviperäisistä lääkkeistä, kutenLigstrum purpurascens(Wong et ai., 2001),Callicarpa dikotoma(Koo ym., 2006; Lee et ai., 2006),Cistanche deserticolajaBoschniakia rossica(Wu et ai., 2006),Scrophularia ningpoenis(Huang et al., 2008),Rehmannia glutinosa(Li et ai., 2006). Teolla ilmoitettiin olevan antimetastaattinen aktiivisuus B16-melanoomasoluissa C57BL/6-hiirimalleissa (Ohno et ai., 2002). Act, Isoact ja 6-O-asetylaktin osoitettiin äskettäin estävän solujen välisen CAM-1 ja verisuonten CAM-1 IL-1 -aktivoimaa ilmentymistä ihmisen napalaskimon endoteelisoluissa (Chen et al., 2009). Act suojaa myös naudan keuhkojen endoteelisoluja hydroksyyliradikaalin aiheuttamalta oksidatiiviselta stressiltä (Chiou et al., 2004) ja estää typpioksidin ja TNF:n tuotantoa estämällä AP-1-aktivaation lipopolysakkaridistimuloiduissa makrofageissa (Rao et al. , 2009). Actilla ja Isoactilla on hermostoa suojaavia vaikutuksiasisään vitro(Koo et ai., 2005). Koo et ai. (2006) raportoi, että Act ja sen aglykonit poistavat tehokkaasti 1,1-difenyyli-2-pikryylihydratsyylin (DPPH) ja typpioksidinsisään vitro. Kuitenkin harvat tutkimukset ovat vertailleet rinnakkainsisään vitro antioksidanttiActin ja sen rakenteellisesti läheisten yhdisteiden, kuten Isoactin ja 6-O- asetylaktia.

Useita farmakologisten aineiden luokkia on käytetty kohonneen verenpaineen hoidossa (Mark ja Davis, 2000). Yhdellä verenpainelääkkeiden luokalla, joka tunnetaan nimellä angiotensiini I:tä konvertoivan entsyymin (ACE) estäjät (eli peptidaasi-inhibiittorit), on alhainen haitallisten sivuvaikutusten ilmaantuvuus, ja ne ovat suosituin verenpainelääkkeiden luokka.

aineita hoidettaessa potilaita, joilla on samanaikainen sekundaarinen sairaus (Fotherby ja Panayiotou, 1999). ACE (peptidyylidipeptidihydrolaasi EC 3.4.15.1) on dipeptidiä vapauttava Zn:tä sisältävä eksopeptidaasi, joka poistaa dipeptidin angiotensiini I:n C-päästä muodostaen angiotensiini II:n, erittäin verenpainetta alentavan yhdisteen. Useitaantioksidanttipeptideillä (pelkistetty glutationi ja karnosiiniin liittyvät peptidit) on ACE:ta estäviä aktiivisuuksia (Hou et ai., 2003). Ensimmäinen kliinisesti saatavilla oleva, oraalisesti aktiivinen ACE:n estäjä, kaptopriili, kehitettiin verenpaineen hoitoon (Ondetti et al., 1977; Borer, 2007). Teolla on raportoitu olevan typpioksidivälitteisiä rentouttavia vaikutuksia SD-rottien endoteelin koskemattomiin aorttarenkaisiin (Wong et al., 2001). Ahmad et ai. (1995) ovat raportoineet, että Act indusoi annosriippuvaisen systolisen verenpaineen (SBP) ja diastolisen verenpaineen (DBP) laskun suonensisäisen injektion jälkeen normotensiivisesti nukutettuihin Wistar-rotteihin. On kuitenkin epäselvää, ovatko suun kautta annettu Act ja/tai siihen liittyvät isomeerit verenpainetta alentavaa.sisään vivo. Tässä tutkimuksessa tutkimmesisään vitro antioksidanttikapasiteetti ja ACE:tä estävät vaikutukset sekäsisään vivoActin, Isoactin ja/tai 6- verenpainetta alentava vaikutusO- asetylaktia käyttämällä spontaaneja hypertensiivisiä rottia (SHR). Näiden tutkimusten odotetaan antavan hyödyllistä tietoa Actin kehittämisestä terveysruokatuotteena.

Materiaalit ja menetelmät

Materiaalit

2,2'-atso-bis(2-amidinopropaani)dihydrokloridi (AAPH), ACE (I-yksikkö, kanin keuhko), butyloitu hydroksitolueeni (BHT), DPPH, N-(3-[{{7) }}furyyli]akryloyyli)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, fenatsiinimetosulfaatti (PMS), ksantiini ja ksantiinioksidaasi ostettiin Sigma Chemical Co.:lta (St. Louis, MO, USA). Kaptopriili ostettiin Calbiochem Co.:lta (CA, USA). Act, Isoact ja 6-O-asetylact (kuvio 1) ostettiin Equal Corp.:lta (puhtaus > 98 prosenttia, Shanghai, Kiina). Muut kemikaalit ja reagenssit olivat Sigma Chemical Co:lta (St. Louis, MO, USA).

Huuhtelu toiminta / Toimia, Isoact, ja 6-O- asetylact vastaan dPPH radikaaleja kirjoittaja spektrofotometria

Tilavuus (0,3 ml) Actia, Isoactia ja 6-O-asetylaktia (lopulliset pitoisuudet olivat 1,56-50 µM), BHT:ta ja askorbiinihappoa (lopulliset pitoisuudet olivat 2,4-60 µM) lisättiin 0,1 ml:aan 1 M Tris-HCl-puskuria (pH 7,9). ) ja sekoitettiin sitten 0,6 ml:n kanssa 100 uM DPPH:ta metanolissa lopulliseen pitoisuuteen 60 uM 20 minuutin ajan valosuojassa huoneenlämpötilassa (Liu et ai., 2004; Lin et ai., 2008). Absorbanssin pieneneminen aallonpituudella 517 nm mitattiin ja ilmaistiin muodossa AA517 nm. Deionisoitua vettä käytettiin nollakokeena. DPPH-radikaalin puhdistusaktiivisuus (prosenttia) laskettiin yhtälöllä: (ΔA517blank - ΔA517näyte) ÷ ΔA517blank × 100. IC50 tarkoittaa puoliinhibitin pitoisuutta.

Estävä toiminta / Toimia ja Isoact vastaan ksantiini oksidaasi

Ksantiinioksidaasin aktiivisuus mitattiin määrittämällä virtsahapon muodostuminen 295 nm:ssä käyttämällä ksantiinia substraattina (Kalckar, 1947). Eri määrät Actia ja Isoactia (lopulliset pitoisuudet olivat 25, 50 ja 75 µM) esisekoitettiin 50 µl:aan 1 mU/ml ksantiinioksidaasia 4 asteessa 1 tunnin ajan ja sitten 300 µl:aan 1 mM ksantiinia. lisättiin. Absorbanssin muutokset aallonpituudella 295 nm rekisteröitiin 2 minuutin aikana ja ilmaistiin muodossa A295 nm/min. Ksantiinioksidaasia estävä aktiivisuus (prosentti) laskettiin seuraavasti: (ΔA295 nm/min musta - ΔA295 nm/min näyte) ÷ ΔA295 nm/min musta × 100. Deionisoitua vettä käytettiin näyteliuoksen sijasta nollakokeessa. IC50 tarkoittaa puoliinhibitin pitoisuutta.

Huuhtelu toiminta / Toimia, Isoact, ja 6-O- asetylact vastaan superoksidi radikaaleja kirjoittaja spektrofotometria

Superoksidiradikaali muodostettiin PMS-NA-DH-järjestelmällä (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Kaikki 0,2 ml:n näytteet, jotka sisältävät erilaisia ​​määriä Acta, Isoactia ja 6-O-asetylaattia (lopullinen pitoisuus oli 15,6, 31,3, 62,5, 125 ja 250 µM) lisättiin peräkkäin 0,2 ml:aan 630 µM nitrosinistä tetratsoliumia, 0,2 ml 33 uM PMS:ää ja 0,2 ml 156 uM NADH:ta 100 mM fosfaattipuskurissa (pH 7,4). Deionisoitua vettä käytettiin näyteliuoksen sijasta nollakokeena. Askorbiinihappoa (lopullinen konsentraatio oli 6, 9, 12 ja 24 uM) käytettiin positiivisena kontrollina. Absorbanssin muutokset aallonpituudella 560 nm rekisteröitiin 2 minuutin aikana ja ilmaistiin muodossa A560 nm/min. Superoksidiradikaalien puhdistusaktiivisuus (prosenttia) laskettiin seuraavasti: (ΔA560 nm/min musta - ΔA560 nm/min näyte) ÷ ΔA560 nm/min musta × 100. IC50 tarkoittaa puoliinhibitiopitoisuutta.

päättäväisyys / Ässä estävä toiminta / Toimia ja Isoact kirjoittaja HPLC

Jokainen 50 µl Acta (0.2, 0.4, 0.5 ja 2.0 µmol) ja Isoact ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 ja 2.0 µmol) esisekoitettiin 15 µl:aan 1U/ml ACE:ta 5 minuutin ajan ja sitten lisättiin 200 ui 0,5 mM FAPGG:tä ja annettiin reagoida huoneenlämpötilassa 10 minuuttia (Anzenbacherova et ai., 2001). 800 ui metanolia lisättiin reaktion pysäyttämiseksi. Tyhjä koe oli vain FAPGG. Kontrollikokeessa ACE reagoi FAPGG:n kanssa samoissa olosuhteissa. FAPGG:n ja FAP:n kromatografinen erotus suoritettiin Hitachin (Japani) kromatografialla 10 ui:n silmukalla. HPLC-analyysi suoritettiin Biosil Aqua-ODS-W 5 u pylväällä (Biotic Chemical Co., Ltd., Taiwan, 250 x 4,6 mm id), hiukkaskoko 5 um. Reagoinut seos erotettiin isokraattisesti liikkuvalla faasilla, joka koostui 0,02 M nonyyliamiinista (säädetty pH 2,4:ään fosforihapolla) ja asetonitriilistä suhteessa 67,5:32,5 (tilavuus/tilavuus) (Anzenbacherova et ai., 2001). Virtausnopeus oli 1 ml/min; injektiotilavuus oli 10 ui; ilmaisin asetettiin 345 nm:iin. Actin ja Isoactin ACE-estot (prosenttia) laskettiin seuraavasti: [(FAPGGblankin pinta-ala − FAPGGkontrollin alue) − (FAPGGblankin alue − FAPGG-näytteen alue) ÷ (FAPGGblankin pinta-ala − FAPGGkontrollin pinta-ala) × 100.

Estävä toiminta / Toimia ja Isoact vastaan AAPH-välitteinen hemolyysi

Rotan punasolujen (RBC) vapaaradikaaliketjuhapetus AAPH-välitteisen hemolyysin kautta (Miki et ai., 1987). Rotan veri laitettiin heparinisoituihin putkiin ja sentrifugoitiin 1000 xg10 min. Sen jälkeen, kun pakatut punasolut oli pesty kolmesti 0,15 M NaCl:lla, saatiin sentrifugoimalla 1000 xg10 min. Eri määrät Actia ja Isoactia (lopulliset pitoisuudet olivat 2, 5 ja 10 µM) sekoitettiin 25 µl 20-prosenttista RBC-suspensiota (tilavuus/tilavuus, 10 mM PBS:ssä) ja 25 µl 500 mM AAPH-liuosta 37 asteessa 0 °C:ssa. , 1, 1,5, 2, 2,5, 3 ja 3,5 tuntia kevyesti ravistellen. Jokainen seos sentrifugoitiin 1000 xg10 minuutin ajan ja supernatantti mitattiin aallonpituudella 536 nm. Deionisoitua vettä käytettiin AAPH-liuoksen tai näyteliuoksen sijasta, vastaavasti, nollaryhmänä tai kontrolliryhmänä. Actin ja Isoactin hemolyysin esto (prosentti) 3 tunnin tai 3,5 tunnin kohdalla laskettiin seuraavasti: (ΔA536 nmkontrolli - ΔA536 nmsnäyte) ÷ ΔA536 nmkontrolli × 100.

Verenpainetta alentava tehosteita / Toimia ja Isoact päällä Shr

Suun kautta annetun Actin, Isoactin ja kaptopriilin vaikutukset syöttöletkun (20 × 80 mm) kautta alentuneeseen SBP:hen ja alentuneeseen DBP:hen määritettiin aikaisempien raporttien menetelmän mukaisesti (Lin). et ai., 2006; Lin et ai., 2008; Han et ai., 2011). Kaikki eläinkokeet noudattavat julkaistuja ohjeita (National Science Council, 1994). Urospuoliset SHR:t (8 viikon ikäiset, National Laboratory Animal Center, Taipei) sijoitettiin yksitellen teräshäkkeihin, joita pidettiin 24 asteessa 12-h valo-pimeä-jaksolla ja heillä oli vapaa pääsy tavalliseen hiiren/rotan ruokaan ( Prolab RMH2500, 5P14 Diet, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) ja vesi. SHR:t jaettiin satunnaisesti kontrolli- ja näytekäsittelyihin SBP- ja DBP-määrityksiä varten (kuusi rottaa ryhmää kohden). Lyhytaikaisessa verenpainetta alentamassa kokeessa annettiin kerran suun kautta 0,5 ml 10 mg Acta tai Isoactia/kg SHR:ää tai 5 mg kaptopriilia/kg SHR:ää, ja hännän verenpaine mitattiin 2, 4, 6 ja 24. h yhden oraalisen annon jälkeen. 0,5 ml tislattua vettä käytettiin nollakokeeseen. Epäsuoraa verenpainemittaria (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokyo, Japani) käytettiin SBP:n ja DBP:n mittaamiseen neljä kertaa kussakin määrityksessä jokaisessa hoidossa.

tiedot analyysi

Arvot esitetään keskiarvoina ± SD ja analysoidaan käyttämällä yksisuuntaista ANOVA:ta, jota seuraa post hoc Tukeyn testi useiden keskiarvojen vertailua varten. Opiskelijatt-testi suoritettiin, kun vain kahta dataryhmää verrattiin (kuten Actin ja Isoactin välillä samalla pitoisuudella). P-arvoa < 0,05="" pidetään="" tilastollisesti="" merkitsevänä.="" tilastollinen="" analyysi="" suoritettiin="" käyttämällä="" spss="" for="" windows="" -versiota="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

akteosidiin cistanche parantaa muistia

Tulokset

Huuhtelu toiminta / PPH ja superoksidi radikaaleja

Act, Isoact ja 6-O-asetylact osoitti annoksesta riippuvaa DPPH:ta poistavaa aktiivisuutta pH:ssa 7,9 (kuvio 2). IC50-arvot olivat 11,4, 9,48 ja 9,55 µM Actille, Isoactille ja 6-O-asetyylilakti. Askorbiinihapon ja BHT:n positiivisten kontrollien IC50-arvot olivat 13,1 ja 18,5 uM, vastaavasti.

Esto / ksantiini oksidaasi toiminta

Actin ja Isoactin osoitettiin osoittavan annoksesta riippuvaa ksantiinioksidaasin estoa (kuvio 3). IC50:n laskettiin olevan 53,3 ja 62,2 uM, tässä järjestyksessä, Actille ja Isoactille.

Esto / superoksidi dismutaasi toiminta

Koska sekä Act että Isoact estivät ksantiinioksidaasin aktiivisuutta, käytimme PMS-NADH-järjestelmää superoksidiradikaalien luomiseen (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008). Toimia,

Isoact ja 6-O-asetylaktilla oli annoksesta riippuvaisia ​​superoksidiradikaaleja poistavia aktiivisuuksia (kuvio 4). IC50-arvot olivat 66,0, 38,5 ja 39,1 µM Actille, Isoactille ja 6-O-asetyylilakti. Askorbiinihapon positiivisen kontrollin IC50-arvot olivat 9,0 µM. Kuvien 2 ja 4 tuloksista kävi selväksi, että Isoact ja 6-O-asetylaatilla oli samanlaisia ​​radikaaleja poistavia aktiivisuuksia DPPH:ta ja superoksidiradikaaleja vastaan, ja siten vain Act ja Isoact valittiin biologisen aktiivisuuden lisäseuloihin.

Ässä estävä toimintaa / Toimia ja Isoact

Alustavassa testissä havaitsimme, että Act ja Isoact häiritsivät ACE-substraatin FAPGG:n ja sen hydrolysoidun tuotteen FAP absorbanssia 345 nm:ssä jatkuvassa spektrofotometrisessa määrityksessä käytettynä (Holmquist et ai., 1979). Siksi erotusta yhdistettynä Actin tai Isoactin ja FAPGG:n havaitsemiseen HPLC:llä käytettiin ACE:n estoaktiivisuuksien seuraamiseen. Kuviot 5A - kuviot 5D ovat tyypillisiä HPLC-kromatogrammeja 1 0 µl:n nollakokeen reaktioseoksista (vain FAPGG, kuvio 5A); kontrollitesti (ACE reagoi uudelleen FAPGG:n kanssa tuottaen FAP:n, kuvio 5B); 0,5 µmol Actia (312,5 µg), ACE:ta ja FAPGG:tä (kuvio 5C); ja 0,5 umol Isoactia (312,5 ug), ACE:ta ja FAPGG:tä (kuvio 5D). FAPGG:n pinta-ala kuviossa 5B oli pienin ja kuviossa 5A suurin neljästä tyypillisestä HPLC-kromatogrammista. FAPGG:n alueet kuvioissa 5C ja 5D ovat riippuvaisia ​​Actin ja Isoactin eri konsentraatioiden ACE:tä inhiboivista aktiivisuudesta. Actin ja Isoactin lasketut ACE-inhibitiot on esitetty kuviossa 5E. Act osoitti korkeampia ACE:tä estäviä aktiivisuuksia kuin Isoactilla, ja edellisen IC50:ksi laskettiin 472 uM pinta-alan mukaan HPLC-kromatogrammeissa.

Estävä toiminta / Toimia ja Isoact vastaan AAPH-välitteinen hemolyysi

Actin ja Isoactin estäviä aktiivisuuksia AAPH-välitteistä hemolyysiä vastaan ​​pitoisuuksilla 2, 5 ja 10 uM arvioitiin 3,5 tunnin aikana (Miki et ai., 1987). Kuvan 6A tulokset osoittavat, että hemolyysi rotan punasoluissa lisääntyi dramaattisesti (ilmaistuna ΔA536 nm) 3-h tai 3.5-} tunnin reaktioiden jälkeen AAPH-radikaalien läsnä ollessa (kontrolliryhminä, valkoinen syklisymboli ). Hemolyysiä havaittiin vain vähän tai ei ollenkaan AAPH-radikaalien puuttuessa 3{13}}h reaktion aikana (tyhjinä ryhminä, musta syklisymboli). Siksi Actin ja Isoactin hemolyysin esto 3 tunnin tai 3,5 tunnin kohdalla laskettiin seuraavasti: (ΔA536 nmkontrolli − ΔA536 nmsnäyte) ÷ ΔA536 nmkontrolli × 100. Kuva 6B

osoittaa, että sekä Act että Isoact pitoisuuksina 2, 5 ja 10 uM osoittivat konsentraatiosta riippuvaa AAPH:n aiheuttamaa hemolyysin estoa Actin estovaikutusten ollessa merkittävästi voimakkaampia kuin Isoactin kullakin käytetyllä pitoisuudella.

Verenpainetta alentava tehosteita / Toimia ja Isoact päällä Shr

SHR:t saivat kerran suun kautta Acta ja Isoactia (10 mg/kg SHR), ja muutoksia SBP:ssä ja DBP:ssä rekisteröitiin 24 tunnin aikana. Ilmoitimme aiemmin, että SHR:n verenpaine (SBP ja DBP) muuttui 24- tunnin aikana (Lin et al., 2006; Han et al., 2011). Siksi käytettiin vertailua kiinteänä ajankohtana (kuten 2, 4, 6, 8 ja 24 tuntia) nollanäytteen ja näytteen välillä sen sijaan, että itse annettiin oraalista antoa ja sen jälkeen. Havaittiin, että Act, mutta ei Isoact, vähensi tehokkaasti SHR:n SBP:tä ja DBP:tä nollakoeryhmään (tislattu vesi) verrattuna. SBP väheni merkittävästi Act-ryhmässä 2, 4 ja 6 tunnin kohdalla, vastaavasti 18,8, 16,5 ja 14,9 mmHg, mutta verenpaineen lasku (3,3 mmHg) 24 tunnin kohdalla Act-hoidon jälkeen ei ollut sta-

taiteellisesti merkittävä (kuva 7A). Kuten kuvasta 7B näkyy, DBP laski Act-ryhmässä 2, 4 ja 6 tunnin kohdalla (8,5, 7,6 ja 12{10}} mmHg, vastaavasti), vaikka vain 6 tunnin kohdalla saatu tulos oli tilastollisesti merkitsevä. (P< 0.05).="" todettiin,="" että="" actilla="" ja="" kaptopriililla="" (positiivisena="" kontrollina)="" oli="" samanlainen="" vaikutus="" sbp:hen="" varhaisissa="" vaiheissa="" (2,="" 4="" ja="" 6="" tuntia)="" suun="" kautta="" antamisen="">

akteosidiCistanchessa on hyviä vaikutuksia antioksidantteihin

KESKUSTELU

Aktiiviset happilajit ja vapaiden radikaalien välittämät reaktiot osallistuvat rappeuttaviin tai patologisiin prosesseihin, kuten ikääntymiseen, syöpään, sepelvaltimotautiin ja Alzheimerin tautiin (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith et ai., 1996). Useat raportit ovat keskittyneet seulomiseenantioksidanttitoimintaa luonnonvaroista. Tässä tutkimuksessa vertailimme ensinantioksidanttiActin, Isoactin ja 6-O-asetylaatti. Act ja Isoact ovat rakenteellisia isomeerejä, joissa kofeiinihappoosan ainesosa on sitoutunut glukoosin C-4-hydroksyyliryhmään ja jälkimmäisessä glukoosin C-6-hydroksyyliryhmään. Vaikka ramnoosin ja 3',4'-dihydroksifenyylietanolin aineosat ovat sitoutuneet glukoosiosan C-3- ja C-1-hydroksyyliryhmiin samassa Act- ja Isoact-molekyylissä, { {8}}O-asetylact on Act-johdannainen, jossa etikkahappo on sitoutunut glukoosiosan C-6-hydroksyyliryhmään (kuva 1). Koo et ai. (2006) raportoi, että Act ja sen aglykonit osoittivat DPPH:ta poistavia aktiivisuuksia, ja näiden toimintojen järjestys (ilmaistuna IC50:nä) oli Act (1,28 µM) > kahvihappo (2,22 µM) > 3',4'-dihydroksifenyylietanoli ( 7,72 uM) > -tokoferoli (15,1 uM). Tässä raportissa (kuva 2) DPPH-puhdistustoimintojen järjestys (ilmaistuna IC50:nä) on 6-O-asetylaatti (9,55 uM) ≈ Isoact (9,48 uM) > Act (11,4 uM). Nämä arvot olivat verrattavissa tai parempia kuin askorbiinihapon (IC50 13,1 uM) ja BHT:n (IC50 18,5 uM) arvot DPPH-radikaalien poistamiseksi. Actin korkeampi IC50 tässä raportissa saattaa johtua lopullisesta 60 µM DPPH:n pitoisuudesta Koon et al. käyttämän 30 µM:n sijaan. raportoitu (2006). Koska DPPH-radikaalin sanotaan kuuluvan elektroninsiirtoreaktioon (Huang et al., 2005), oletetaan, että johdannainen glukoosiosan C-6-hydroksyyliryhmässä, kuten asetyyliryhmä {{21 }}O- Isoactin asetylaatti- ja kofeiinihappoosa voi saada aikaan helpommin elektroninsiirtoreaktion kuin C-6-vapaan hydroksyyliryhmän Actin glukoosiosassa DPPH-puhdistusmäärityksessä.

Toimi, 6-O-asetylaatilla ja Isoactilla on raportoitu olevan superoksidia poistavaa aktiivisuutta in vitro käyttäen ksantiini/ksantiinioksidaasijärjestelmää superoksidiradikaalien muodostamiseksi (Wang et ai., 1996; Gao et ai., 1999). Nykyinen tutkimuksemme osoitti kuitenkin, että Act osoitti ksantiinioksidaasia estäviä aktiivisuuksia (kuvio 3). Siksi superoksidiradikaali luotiin käyttämällä PMS-NADH-järjestelmää tässä raportissa (Liu et al., 2004; Lin et al., 2008) ksantiini/ksantiinioksidaasijärjestelmän sijaan. Todellakin, käyttämällä ksantiini/ksantiinioksidaasijärjestelmää superoksidiradikaalien muodostamiseen, Wang et ai. (1996) saivat IC50-arvon 63 uM Act superoksidiradikaaleja vastaan, ja tämä arvo on lähellä arvoa ksantiinioksidaasin aktiivisuuden estämiselle Actilla, kuten tässä tutkimuksessa on raportoitu (53,3 uM). On raportoitu, että kofeiinihapolla oli ksantiinioksidaasia estäviä aktiivisuuksia (Chiang et ai., 1994). Voidaan olettaa, että joidenkin fytokemikaalien, joiden rakenteet liittyvät kofeiinihappoihin, kuten Act tai Isoact (Wang et ai., 1996; Gao et ai., 1999), superoksidia poistavilla toiminnoilla, joissa käytetään ksantiini/ksantiinioksidaasia tuottavaa järjestelmää, saattaa olla ovat ainakin osittain vaikuttaneet ksantiinioksidaasin estämiseen. Mielenkiintoista on, että Wang et ai. (1996) havaitsivat, että Act (0,5 ja 2,5 mM) ei estänyt ksantiinioksidaasin aktiivisuutta, joka määritettiin happielektrodilla hapen kulutuksen perusteella ksantiinihapetuksen aikana. Siksi on tärkeää pitää mielessä, että erilaiset menetelmät superoksidia poistavan aktiivisuuden määrittämiseksi voivat tuottaa ristiriitaisia ​​tietoja.

Li et ai. (1993) ovat raportoineet Actin ja Isoactin samanlaisen eston asteen AAPH-välitteistä hemolyysiä vastaan ​​hiirten punasoluissa. Osoitimme kuitenkin tässä, että Act osoitti paljon korkeampaa estoaktiivisuutta AAPH:n aiheuttamaa hemolyysiä vastaan ​​rottien punasoluissa kuin Isoactilla (kuvio 6). On epäselvää, saattoiko tällainen epäjohdonmukaisuus johtua jyrsijälajien eroista.

Kang et ai. (2003) raportoivat, että Act osoitti ACE:ta estäviä aktiivisuuksia, ja IC50 oli 373,3 ug/ml, jonka laskettiin olevan 598 uM käyttämällä Hip-His-Leua substraatteina. Tässä raportissa Act osoitti korkeampia ACE:tä estäviä aktiivisuuksia kuin Isoactilla, ja edellisen IC50:ksi laskettiin 472 uM pinta-alaltaan HPLC-kromatogrammeissa (kuvio 5). Teolla on raportoitu olevan typpioksidivälitteisiä rentouttavia vaikutuksia SD-rottien endoteelin koskemattomiin aorttarenkaisiin (Wong et al., 2001). Vaikka Actin on osoitettu alentavan verenpainetta Wistar-rotilla,

tutkimuksessa käytettiin Actin suonensisäistä injektiota nukutettuun rotaan adsorptiotekijän sulkemiseksi pois (Ahmad et ai., 1995). Tässä annoimme Acta suullisesti SHR:ille ja määritimme verenpaineen muutokset. Havaitsimme, että suun kautta annetulla tosiasialla, mutta ei Isoactilla, oli verenpainetta alentavia vaikutuksia alentamalla SBP:tä ja DBP:tä 24 tunnin kuluessa kerta-annoksen jälkeen (kuva 7). Actilla annoksella 10 mg/kg ruumiinpainoa oli lähellä kaptopriilin vaikutusta annoksella 5 mg/kg SHR SBP:tä alentaessaan ja se alensi DBP:tä paremmin kuin kaptopriili.

Lopuksi Act oli esilläantioksidanttiaktiivisuudet, ACE:tä estävät vaikutukset ja verenpainetta alentavat vaikutukset SHR:iin. Tässä esitellyt tulokset hyödyttävät pyrkimystä kehittää kasviperäisiä lääkkeitä tai niihin liittyviä tuotteita käyttämällä lakia, joka on löydetty monista kasveista ja kasviperäisistä lääkkeistä, antioksidanttisuojaan ja terapeuttisiin vaikutuksiin tulevaisuudessa.

Cistancheakteosidiantioksidantti ja ikääntymisen esto

1 Ruokatieteen ja biotekniikan osasto, National Chung Hsing University, Taichung, Taiwan

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Taiwan

3School of Pharmacy, Taipein lääketieteellinen yliopisto, Taipei, Taiwan

4 Graduate Institute of Biomedical Materials and Engineering, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

5 Perinteisen kasviperäisen lääketieteen tutkimuskeskus, Taipei Medical University Hospital, Taipei, Taiwan

6 Graduate Institute of Pharmacognosy, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

(Vastaanotettu 12. maaliskuuta 2012; hyväksytty 20. huhtikuuta 2012)

MAINITTU KIRJALLISUUS

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani ja SP Ahmad. 1995.Acteoside: uusi verenpainelääke. Phytother. Res. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Ruokavalion syöpää aiheuttavat aineet ja karsinogeenit: happiradikaalit ja rappeuttavat sairaudet. Science 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacher, K. Macek ja J. Kvetina. 2001. Entsyymi (angiotensiinikonvertaasi) estäjien määritys entsymaattiseen reaktioon, jota seuraa HPLC.J. Pharmaceut. Biomed. Anaali. 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser ja U. Thomas. 1968.Acteosideja neoakteosidi: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc- ripustettu 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Angiotensiinia konvertoivan entsyymin esto: maamerkki edistysaskel sydän- ja verisuonisairauksien hoidossa. euroa Heart J. Suppl. 9 (Lisäosa E): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang ja ML Hu. 2009.Acteosideja 6-O-asetyylilakteosidi heikentävät IL-1:n indusoimia soluadheesiomolekyylejä estämällä ERK:ta ja JNK:ta ihmisen verisuonten endoteelisoluissa. J. Agric. Ruokaa

Chem. 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo ja FJ Lu. 1994. Ksantiinioksidaasin estäjät Alsophila spinulosa (Hook) Tryonin lehdistä. J. Enzyme Inhibit. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin ja CF Chen. 2004.Acteosidesuojaa endoteelisoluja vapaiden radikaalien aiheuttamalta oksidatiiviselta stressiltä. J. Pharm. Pharmacol. 56: 743-748.

Fotherby, MD ja B. Panayiotou. 1999. Verenpainetta alentava hoito aivohalvauksen ehkäisyssä: mitä, milloin ja kenelle? Drugs 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi ja M. Nukina. 1999. Fenyylipropanoidiglykosidien radikaaleja poistava aktiivisuus Caryopteris incanassa. Biosci. Biotechnol. Biochem. 63: 983-988.

Gey, KF 1990antioksidanttisydän- ja verisuonitautien hypoteesi: epidemiologia ja mekanismit. Biochem. Soc. Trans. 18: 1041-1045.428 Botanical Studies, Voi. 53, 2012

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu ja WC Hou. 2011. Käsitellyn valkosipulin verenpainetta alentavat vaikutukset spontaanisti hypertensiivisillä rotilla ja hypertensiivisillä ihmisillä. Bot. Nasta. 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning ja JF Riordan. 1979. Jatkuva spektrofotometrinen määritys angiotensiiniä konvertoivalle entsyymille. Anaali. Biochem. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen ja YH Lin. 2003. Antioksidanttipeptidit, joilla on angiotensiinia konvertoivaa entsyymiä estäviä vaikutuksia ja sovelluksia angiotensiinia konvertoivan entsyymin puhdistamiseen. J. Agric. Food Chem. 51: 1706-1709.

Huang, D., B. Ou ja RL Prior. 2005. Kemia takanaantioksidanttikapasiteettimääritykset. J. Agric. Food Chem. 53: 1841-1856.

Huang, CG, YJ Shang, J. Zhang, JR Zhang, WJ Li ja BH Jiao. 2008. Fenyylipropanoidiglykosidien hypourikeemiset vaikutuksetakteosidiScrophularia ningpoeniksen seerumin virtsahappotasoista kaliumoksonaatilla esikäsitellyissä hiirissä. Amer. J.

Leuka. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee ja YC Kim. 2006.ActeosideCallicarpa dichotoma heikentää skopolamiinin aiheuttamia muistihäiriöitä. Biol. Pharm. Sonni. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu ja Z. Jia. 1993. Fenyylipropanoidiglykosidien suojaaminen Pedicularis-bakteerista oksidatiivista hemolyysiä vastaan ​​in vitro. Planta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang ja ZB Hu. 2006. HPLC-määritysakteosidiRadix Rehmanniaessa. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu ja WC Hou. 2008.Antioksidantti, antisemikarbatsidille herkkä amiinioksidaasi ja Phyllanthus urinariasta eristetyn geraniiinin verenpainetta alentavat aktiivisuudet. Food Chem. Toxicol. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin ja WC Hou. 2004. Asparagiinihapon ja glutamiinihapon monohydroksamaattejaantioksidanttija angiotensiinia konvertoivaa entsyymiä estävät aktiivisuudet. J. Agric.Food Chem. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Puriiniyhdisteiden differentiaalinen spektrofotometria tietyn entsyymin avulla. J. Biol. Chem. 167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee ja HS Lee. 2003. Angiotensiinia konvertoivaa entsyymiä estävät fenyylipropanoidiglykosidit Clerodenron trichotomumista. J. Ethnopharmacol. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee ja YC Kim. 2005. Callicarpa dichotoman fenyylietanoidiglykosidien hermostoa suojaavat toimet in vitro. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh ja YC Kim. 2006.Acteosideja sen aglykonit suojaavat rotan aivokuoren solujen primääriviljelmiä glutamaatin aiheuttamalta eksitotoksisuudesta. Life Sci. 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin ja WC Hou. 2006. Jamin (Dioscorea alata cv. Tainong No.1) mukuloiden varastointiproteiinin ja sen peptisten hydrolysaattien vaikutukset spontaanisti hypertensiivisille rotille. J. Sei. Food Agric. 86: 1489-1494.

Mark, KS ja TP Davis. 2000. Aivohalvaus: kehittäminen, ehkäisy ja hoito peptidaasi-inhibiittoreilla. Peptidit 21:1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto ja E. Niki. 1987. Rotan punasolujen vapaiden radikaalien ketjuhapetus molekyylihapella ja sen estäminen -tokoferolilla. Arch Biochem. Biophys. 258: 373-380.

Kansallinen tiedeneuvosto. 1994. Koe-eläinten hoito- ja käyttöopas. National Science Council, Taiwan.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara ja I. Saracoglu. 2002. Antimetastaattinen aktiivisuusakteosidi, fenyylietanoidiglykosidi. Biol. Pharm. Sonni. 25: 666-668.

Vendetti, MA, B. Rubin, DW Cushman. 1977. Angiotensiinia konvertoivan entsyymin spesifisten estäjien suunnittelu: uusi oraalisesti aktiivisten verenpainetta alentavien aineiden luokka. Science 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh ja YM Tzeng. 2009. Anisomeles Intian ainesosat ja niiden anti-inflammatoriset vaikutukset. J. Ethnopharmacol. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal ja N. Kowal 1996. Oksidatiiviset vauriot Alzheimerin taudissa. Nature 382: 120-121.Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao ja Z. Jia.

1996. Pedicularis-bakteerin fenyylipropanoidiglykosidin huuhteluvaikutukset superoksidianioniin ja hydroksyyliradikaaliin spinloukkumenetelmällä. Biochem. Pharmacol. 51: 687- 691.

Wong, IYF, Y. Huang, ZD He, CW Lau ja ZY Chen. 2001. Ligstrum purpurascens -uutteen rentouttavat vaikutukset ja puhdistettuakteosidirotan aortan renkaissa. Planta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung ja TH Tsai. 2006. MäärittäminenakteosidiCistanche deserticolassa ja Boschniakia rossicassa ja sen farmakokinetiikka vapaasti liikkuvissa rotissa käyttäen LC-MS/MS:ää. J. Chromatogr. B 844: 89-95.