Akteosidi, Stachys Sieboldii MIQ:n komponentti, voi olla lupaava antinefriittiaine: Akteosidin vaikutus puolikuutyypin anti-GBM-nefriittiin rotilla

Lisätietoja:ali.ma@wecistanche.com

Kazumi Hayashi, Tadashi Nagamatsu, Mikio Ito, Tomohisa Hattori ja Yoshio Suzuki

Farmakologian laitos, Farmasian tiedekunta, Meijon yliopisto, 150 Yagotoyama, Tenpaku-Ku, Nagoya 468, Japani

ABSTRAKTI

Vaikutuksetakteosidi(ACT) puolikuutyyppisessä anti-GBM:ssämunuaistulehdusrotilla tutkittiin. Kun rottia hoidettiinActeosideensimmäisestä päivästä anti-GBM-seerumin iv-injektion jälkeen,Acteosideesti proteiinin erittymisen lisääntymistä virtsaan. VuonnaActeoside- hoidettujen rottien kolesteroli- ja kreatiniinipitoisuudet ja vasta-ainetuotanto kanin r-globuliinia vastaan ​​plasmassa olivat alhaisemmat kuin nefriittisillä kontrollirotilla. Histologinen havainto osoitti, että tämä aine tukahdutti hypersellulaarisuuden ja puolikuun muodostumisen, kapillaarin seinämän kiinnittymisen Bowmanin kapseliin ja fibrinoidinekroosin glomeruluksissa. Lisäksi rotan IgG- ja C3-kertymiä GBM:ssä oli huomattavasti vähemmänActeosidehoidetussa ryhmässä kuin nefriittisen kontrolliryhmässä. Kun hoito aloitettiin 20. päivästä anti-GBM-seerumin suonensisäisen injektion jälkeen, jolla tauti oli todettu,Acteosidejohti samanlaiseen vaikutukseennefriittinenrotilla, kuten edellä mainittiin. Nämä tulokset viittaavat siihen, että Acteoside voi olla käyttökelpoinen lääke nopeasti etenevää glomerulonefriittiä vastaan, jolle on tunnusomaista vaikeat glomerulusvauriot, joissa on diffuusia puolikuuta.

Avainsanat: Crescent-tyyppinen anti-GBMmunuaistulehdus,Acteoside, Rotta-IgG, Rotta-C3

Click to Cistanche käyttää Acteosiden kanssa

Chyorogi Stachys sieboldii MIQ (Labiatae) on määrätty moniin sairauksiin, ja tätä mukulaa käyttävät ravinnoksi kiinalaiset, venäläiset ja japanilaiset. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että chyrogilla on anoksiaa estävää vaikutusta (1), hyaluronidaasiaktiivisuutta estävää vaikutusta (2) ja immunosuppressiivista vaikutusta (3).

Toisaalta on mainittu, että immuunivaste osallistuu munuaistulehduksen kehittymiseen. Konkreettisemmin sanottuna glomerulaarinen vaurio välittyy immuunikompleksin kerääntymisestä glomeruluksiin, jota seuraa immuuni-inflammatorinen reaktio, mukaan lukien komplementin aktivaatio ja muiden tulehdusvälittäjien vapautuminen. Viimeaikaisissa tutkimuksissa on kiinnitetty paljon huomiota soluvälitteisen immuunivasteen osuuteen glomerulonefriitin kehittymisessä (4, 5). Lisäksi Neild et ai. (6) raportoivat, että T-solujen toiminnan tukahduttaminen syklosporiini A:lla (CyA) esti glomerulaaristen leesioiden myöhemmän kehittymisen akuutissa sairausnefriittissä. Raportoimme, että mitoribiinilla (7), atsatiopriinilla (7), CyA:lla (8), metyyliprednisolonilla (9) ja joillakin kasvikomponenteilla (10) on immunosuppressiivinen vaikutus, ja ne osoittivat terveellistä vaikutusta anti-GBM-nefriittiin. Vaikka näillä immunosuppressiivisilla aineilla on antinefriittistä vaikutusta, niitä on vaikea käyttää kliinisissä kokeissa niiden sivuvaikutusten vuoksi (11). Siksi on odotettavissa, että kehitetään uusi immunosuppressiivinen aine munuaistulehduksen hoitoon kliinisessä vaiheessa.

Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli selvittääakteosidin nefriittiä estävä vaikutus, chyorogin komponentti, rottien puolikuun tyyppiseen anti-GBM-nefriittiin.

MATERIAALIT JA MENETELMÄT

Eläimet

Urospuoliset Sprague-Dawley-kannan rotat, paino n. Kaikissa kokeissa käytettiin 160 g (Nihon SLC, Hamamatsu). Näitä eläimiä pidettiin ilmastoiduissa tiloissa 23 ± 1 C:ssa koejakson aikana.

Huumeet

Akteosidin (ACT) (Tsumura Co., Ltd., Tokio) kemiallinen rakenne on esitetty kuvassa 1. Tämä komponentti uutettiin chyorogin (Stachys sieboldii MIQ) ilmaosasta. ACT:n puhtaus varmistettiin HPLC:llä (kolonni: TSK gel ODS-80TM (4.0 id x 250 mm); liikkuva faasi: 20 prosenttia CH3CN/H2O, sisältää 10 AcOH; Virtausnopeus: 0,7 ml/min; Lämpötila: huoneenlämpötila; Detect: UV 254 nm) Tsumura Co., Ltd.:ssä. Näissä kokeissa käytetyn ACT:n puhtaus oli suurempi kuin 9970. ACT liuotettiin tislattuun veteen. Käytettiin myös dipyridamolia (Dip) (Boehringer Ingelheim, Saksa) ja atsatiopriinia (Aza) (Sigma, St. Louis, MO, USA); Nämä lääkkeet suspendoitiin 1070 arabikumiin.

Puolikuun tyyppisen anti-GBM-nefriitin induktio

Puolikuun tyyppinen anti-GBM-nefriitti indusoitiin immunisoimalla rotat, jotka olivat saaneet nefritogeenisen annoksen kanin anti-rotta GBM (anti-GBM) -seerumia kanin r-globuliinilla (rG) aiemmin raportoidun menetelmän pienellä modifikaatiolla ( 12). Tässä kokeessa rotat painoivat n. 160 g annettiin 0,6 ml/eläin anti-GBM-seerumia häntälaskimoon.

Testilääkkeiden vaikutus arvioitiin antamalla niitä 1. päivästä anti-GBM-seerumin injektion jälkeen (heterologinen vaihe) tai 20. päivästä antiGBM-seerumin injektion jälkeen (autologiset vaiheet). Kokeissa kerättiin 24-h virtsanäytteitä ja rotat jaettiin sitten 5 tai 6 8 rotan ryhmään siten, että kunkin ryhmän 24-tunnin virtsan keskimääräinen proteiinipitoisuus oli samantasoinen.

Testilääkkeiden antinefriittisen vaikutuksen arviointi

Heterologisen vaiheen lääkehoitokokeessa neljälle ryhmälle annettiin suun kautta 3, 10 tai 30 mg/kg/vrk ACT:tä tai 100 mg/kg/vrk dippiä, vastaavasti tilavuudessa 1 ml/100 g. ruumiinpainosta, päivittäin 1. päivästä tai päivää sen jälkeisenä päivänä anti-GBM-seerumin iv-injektiosta 40. päivään. Lääkehoitokokeissa autologisesta vaiheesta kolmelle tai neljälle ryhmälle annettiin suun kautta 3, 10 tai 30 mg/kg/vrk ACT:tä (A) tai 30 mg/kg/vrk ACT:tä, 100 mg/kg/vrk. Kasta tai 50 mg/kg/vrk Azaa (B) 1 ml:n tilavuudessa 100 g ruumiinpainoa kohti päivittäin 20. päivästä anti-GBM-seerumin suonensisäisen injektion jälkeen 40. päivään (A) tai 45. päivään. (B) päivä. Jäljelle jäävälle ryhmälle annettiin suun kautta vehikkeliä (tislattua vettä) testilääkkeiden sijasta ja se toimi nefriittikontrollina. Lisäksi käytettiin hoitamatonta (normaalia) ryhmää vertaamiseen nefriittiryhmiin.

Virtsan ja veren keräykset

{0}}tunnin virtsanäytteet saatiin pitämällä jokaista eläintä yksittäisessä metabolisessa häkissä 24 tunnin ajan. Virtsankeräyksen alussa jokainen eläin sai 8 ml tislattua vettä suun kautta ilman ruokintaa. Virtsaa sentrifugoitiin sitten nopeudella 3, 000 rpm 15 minuuttia 41 °C:ssa ja supernatanttia käytettiin proteiinin määrittämiseen. Kokeen viimeisenä päivänä kunkin nukutetun rotan munuaislaskimosta otettiin 2.0 ml verta kertakäyttöisellä ruiskulla ja laitettiin putkeen, joka sisälsi 0,125 ml hepariinia. Veri sentrifugoitiin 5,{12}} rpm plasman saamiseksi joidenkin parametrien määritystä varten.

Virtsan proteiinin ja plasman kolesteroli- ja kreatiniinipitoisuuksien määritykset

Proteiinin erittyminen virtsaan määritettiin Kingsburyn et ai. (13) ja ilmaistaan ​​mg/24 tunnin virtsassa. Kolesterolipitoisuus määritettiin kaupallisella määrityssarjalla (Determine TC-5; Kyouwa Medix Co., Ltd, Tokio) (14) ja ilmaistiin mg/dl plasmana. Kreatiniinipitoisuus määritettiin käyttämällä kreatiniinin määrityspakkausta (CRE-EN; Kainos, Inc., Tokio) ja ilmaistiin mg/dl plasmaa/100 g ruumiinpainoa.

Plasman vasta-ainetiitterin mittaus -G:tä vastaan

Plasman vasta-ainetiitteri rG:tä vastaan ​​määritettiin epäsuoralla hemagglutinaatiolla käyttämällä herkistettyjä lampaan punasoluja (15).

Plasman komplementin CH50-tason mittaus

Plasman komplementin CH50-taso määritettiin Mayerin menetelmällä (16).

Histopatologisten parametrien arviointi

Valomikroskooppista tutkimusta varten munuaiset eristettiin pentobarbitaalilla nukutetuista rotista, dehydratoitiin ja kiinnitettiin upottamalla kudokset asteittain erilaisiin etyylialkoholin huolellisiin perinteisiin matalasta korkeaan. Kudokset upotettiin sitten parafiiniin ja leikattiin 2-3 em:n paksuisiksi viipaleiksi. Puolikuun tyyppisen anti-GBM-nefriitin tutkimuksissa leikkeitä värjättiin hematoksyliinilla ja eosiinilla sekä Massonin trikromilla. Tumien lukumäärä (hypersellulaarisuus), puolikuun muodostuminen, Bowmanin kapselin tarttuminen kapillaarin seinämään (adheesio) ja fibrinoidinekroosi glomeruluksissa havaittiin valomikroskoopilla. Näiden parametrien arvioimiseksi valittiin satunnaisotannalla ekvatoriaalinen poikkileikkaus. Viisikymmentä glomerulusta/poikkileikkausta havaittiin, ja puolikuun muodostumisen, adheesion ja fibrinoidinekroosin esiintymisnopeus ilmaistiin glomerulusten prosenttiosuuksina (esiintyvyys), joissa oli näitä morfologisia muutoksia, kuten aiemmin on kuvattu (17). Arvioinnin suoritti eri henkilö, joka ei tiennyt kunkin näytteen henkilöllisyyttä. Hypersellulaarisuuden arvioimiseksi valittiin ekvatoriaalinen poikkileikkaus satunnaisotosmenetelmällä. Tumien lukumäärä (mukaan lukien glomerulaaristen solujen ytimet ja eksudatiiviset leukosyytit) laskettiin ja ilmaistiin keskimääräisenä lukumääränä glomerulaarista poikkileikkausta kohti 10 glomeruluksessa/leikkaus.

Immunohistokemia

Kudoksissa rotan IgG:n immunoentsymaattista värjäystä varten parafiinileikkeet leikattiin edellä kuvatulla tavalla ja leikkeitä käsiteltiin 0,1 prosentilla proteaasilla 0.05 M Tris- HCl-puskuria 7 minuuttia ja pestiin sitten jäähdytetyssä 0,01 M fosfaattipuskuroidussa suolaliuoksessa (PBS), pH 7,4. Sitten leikkeitä inkuboitiin hiiren monoklonaalisen anti-rotan IgG-vasta-aineen (mAb) (Cappel, West Clester, PA, USA) kanssa laimennuksessa 1:100 90 minuuttia. Leikkeet pestiin uudelleen PBS:llä, käsiteltiin 0,3-prosenttisella vetyperoksidilla metanolissa 20 minuutin ajan endogeenisen peroksidaasin estämiseksi ja inkuboitiin biotinyloidun affiniteettipuhdistetun anti-hiiri-IgG:n ja avidinoidun piparjuuriperoksidaasin kanssa 3,3'-diaminobentsidiinitetrahydrokloridin (DAB) kanssa. (Vecta Stain ABC Kit; Vector Institute, Burlingame, CA, USA). Kaikki vaiheet suoritettiin huoneenlämpötilassa.

Kudokset proliferoivan solun ydinantigeenin (PCNA) immunoentsymaattista värjäystä varten, joka on solujen lisääntymisen merkkiaine, kiinnitettiin 10-prosenttisessa formaliinissa PBS:ssä, ja parafiiniin upotetut kudokset värjättiin samalla menetelmällä kuin rotta-IgG, paitsi mAb:n (19A2; Coulter Immunology, Hialeah, FL, USA) käyttö PCNA:lle.

Rotan IgG:n, C3:n ja PCNA:n kvantifiointi kudosleikkeistä

Immunoreaktiivisen rotan IgG:n ja C3:n kokonaispinta-ala glomeruluksessa mitattiin 30 glomeruluksessa leikkausta kohti käyttämällä kuva-analysaattoria (Toyobo Image Analyzer V1; Toyobo Co., Ltd., Tokio) ja esitettiin mm2/glomerulaarinen poikkileikkaus (GCS) ). PCNA-positiiviset solut glomeruluksessa laskettiin kuva-analysaattorilla ja tulokset ilmaistiin solujen lukumääränä/GCS.

Tilastolliset analyysit

Tiedot edustavat keskiarvoa ± SD, ja tulokset arvioitiin tilastollisesti ANOVA:lla. Kun nämä tulokset olivat parametrisia, ne arvioitiin tilastollisesti Duncanin testillä. Kun tulokset olivat ei-parametrisia, ne arvioitiin tilastollisesti Kruskal-Wallis-testillä. Estoprosentti laskettiin seuraavasti:

Estoprosentti ( prosentti )=(kontrolli - testilääke) x 100 / (kontrolli - normaali)

TULOKSET

Acteosidin vaikutus puolikuun tyyppiseen anti-GBM-nefriittiin

Virtsan proteiinin erittyminen (kuvat 2 ja 3): Kun ACT-hoito aloitettiin anti-GBM-seerumiruiskeen (heterologinen vaihe) jälkeisestä päivästä, ensimmäinen merkittävä virtsan proteiinin suppressio havaittiin 5. päivänä annoksella 30 mg /kg, po; 20. päivänä 3 ja 10 mg/kg, po; ja 40. päivänä kasteella 100 mg/kg, po

Kun ACT annettiin 20. päivästä antiGBM-seerumin injektion jälkeen (autologinen vaihe), ACT 10 ja 30 mg/vrk esti proteiinin virtsaan erittymisen lisääntymistä 30. päivään mennessä. Toisaalta Aza annoksella 50 mg/kg oli heikompi kuin ACT annoksella 30 mg/kg, vaikkakaan ei merkittävästi, eikä Dipillä ollut vaikutusta.

Plasman kolesteroli- ja kreatiniinipitoisuudet (taulukko 1): Plasman kolesteroli- ja kreatiniinipitoisuudet määritettiin 40. tai 45. päivänä. Plasman kolesterolipitoisuudet nefriittisissä kontrollirotissa olivat huomattavasti kohonneet. Sitä vastoin kolesterolipitoisuuden nousu aleni ACT:llä (30 mg/kg) heterologisesta faasista 60 prosenttia kontrollitasosta ja ACT:llä (30 mg/kg) autologisesta faasista 62'o kontrollista. taso. Plasman kreatiniinipitoisuus nefriittisillä rotilla oli myös kohonnut. Toisaalta molemmilla vaiheilla käsiteltyjen rottien ACT:ssä (30 mg/kg) plasman kreatiniinipitoisuus oli samanlainen kuin normaaleilla rotilla.

Plasman vasta-ainetiitteri rG:tä vastaan: Nefriittiset rotat olivat osoittaneet selvästi kiihtynyttä vasta-ainetuotantoa. Nopeutunut vasta-ainetuotanto tukahdutettiin 72 prosenttiin kontrollitasosta käsittelemällä ACT:llä (10 ja 30 mg/kg) heterologisesta faasista (taulukko 2), ACT:llä (30 mg/kg) autologisesta vaiheesta ja Aza-hoidolla. 70 ja 51 prosenttia vertailutasosta (tietoja ei näytetä), eikä Dip vaikuttanut siihen.

Histologinen havainto (taulukko 3, kuviot 4 ja 5): Nefriittisten munuaiskerästen valomikroskooppinen tutkimus paljasti leesiot, joille on tunnusomaista vakava puolikuun muodostuminen, adheesio, fibrinoidinekroosi ja mesangiaalisolujen proliferaatio. Histologinen havainto osoitti, että ACT (sekä heterologisesta että autologisesta vaiheesta) esti hypersellulaarisuutta ja puolikuun muodostumisen, adheesion ja fibrinoidinekroosin ilmaantuvuutta glomeruluksissa 40. tai 45. päivään mennessä. Dip- ja Aza-käsiteltyjen nefriittirottien vauriot olivat myös pienempiä kuin nefriittisten kontrollirottien vauriot. Kuitenkin, kun nefriittisiä rottia hoidettiin Dipillä autologisesta vaiheesta, Dip vaikutti vain vähän histologisiin muutoksiin (tietoja ei esitetty).

Glomerulaaristen solujen lisääntymistä, eli PCNA-positiivisten solujen lisääntymistä glomeruluksissa, havaittiinnefriittiset rotat. Sitä vastoin 30. päivänä 52 prosentin vähennyssoluproliferaatiossa havaittiin, ja tämä liittyi wglomerulaaristen solujen merkittävä väheneminenlulariteetti verrattuna kontrolliin (taulukko 3).

Immuunireagenssin saostuminen (taulukko 2 ja kuvio 6): Nefriittisten kontrollirottien GBM:ssä oli mahdollista havaita rotan IgG- ja C3-kertymiä; niitä ei kuitenkaan löydetty normaaleista rotista. ACT (30 mg/kg) heterologisesta faasista vähensi rotan IgG:n kertymistä GBM:lle 72 prosentilla kontrollitasosta. Lisäksi ACT (3, 10 ja 30 mg/kg) heterologisesta faasista vähensi rotan C3:n kertymistä GBM:lle 60-69 prosenttia 40. päivään mennessä. Jopa kun ACT annettiin autologisesta vaiheesta, rotan IgG:n ja C3:n kertymisen esto oli samanlainen kuin yllä olevat tulokset. Kaato ei vaikuttanut rotan IgG:n ja C3:n laskeutumiseen. Aza kuitenkin vähensi rotan IgG:n ja C3:n kertymistä GBM:lle 67 ja 68 prosentilla, vastaavasti (tietoja ei esitetä).

ACT:n vaikutus komplementin aktiivisuuteen ja C3-kertymiin GBM:ssä alkuperäisen tyypin anti-GBM-nefriitissä (kuva 7)

Alkuperäisen tyypin anti-GBM-nefriitti indusoitiin rotilla injektoimalla 0,6 ml anti-GBM-seerumia heidän häntälaskimoinsa, kuten aiemmin on kuvattu (18). Nefriittiset rotat esikäsiteltiin ja jälkikäsiteltiin ACT:llä annoksella 30 mg/kg, po- ja kobramyrkkytekijällä (CVF) (Sigma) 10 fig/rotta, ip, kolme kertaa, joka 8. tunti. ACT- ja CVF-hoidot vähensivät proteiinin erittymistä virtsaan estävällä prosentilla noin. 35 astetta ja 71 prosenttia. CH50 nefriittisissä kontrollirotissa oli selvästi pienempi kuin normaaleissa rotissa 24 tuntia munuaistulehduksen induktion jälkeen. ACT esti vähentynyttä CH50:tä ja lisännyt C3:n kertymistä GBM:ään nefriittisillä kontrollirotilla. CVF poisti CH50- ja C3-pinnoituksen. Lisäksi in vitro -kokeessa ACT esti komplementin aktivaation 37 prosentilla. Kun ACT:tä annettiin normaaleille rotille, ACT vähensi komplementin aktivaatiota ex vivo -kokeessa (tietoja ei esitetty).

KESKUSTELU

Nopeasti etenevä glomerulonefriitti ja munuaissairaudet Goodpasturen oireyhtymässä ovat pahanlaatuisia sairauksia, jotka vaikeutuvat munuaisten vajaatoimintaan 2–3 kuukauden kuluessa taudin kehittymisestä (19). Tämän munuaistulehduksen ominaispiirteisiin liittyi hypersellulaarisuus, huomattava neutrofiilien ja monosyyttien infiltraatio ja puolikuun muodostuminen glomeruluissa. Cocktail-hoitoa immunosuppressiivisilla aineilla, verihiutalelääkkeillä ja steroideilla on käytetty pääasiassa tähän sairauteen. Toisaalta, vaikka CyA on ylivoimainen immunosuppressantti, jolla on suotuisa vaikutus kokeelliseen munuaistulehdukseen (6, 8), on raportoitu, että CyA aiheuttaa munuaisten vajaatoimintaa ja aiheuttaa peruuttamattomia histologisia muutoksia glomeruluissa (11). Metyyliprednisolonilla on monia sivuvaikutuksia. Lisäksi kaksi ongelmaa ovat rebound-ilmiö ja vieroitusoireyhtymä tämän lääkkeen pitkän hoidon jälkeen. Siksi munuaistulehduksen hoitoon on kehitettävä uusi immunosuppressioaine, jolla on vähemmän sivuvaikutuksia.

Puolikuun tyyppinen anti-GBM-nefriitti on kokeellinen malli, joka osoittaa histologisia ja patologisia muutoksia, jotka ovat samanlaisia ​​kuin nopeasti etenevässä glomerulonefriitissä ja Goodpasturen oireyhtymän munuaissairaudessa (20). Tämän nefriitin kehittyminen ja eteneminen koostuu kahdesta vaiheesta, joita välittävät immuunivasteet. Varhainen reaktio, niin kutsuttu heterologinen vaihe, johtuu anti-GBM-vasta-aineen kerrostumista, jota seuraa komplementista riippuvainen polymorfonukleaaristen granulosyyttien kerääntyminen (21, 22). Myöhäinen vaihe (autologinen vaihe) kehittyy GBM:n varrelle kerrostuneiden autologisten vasta-aineiden sitoutumisella ja monosyyttien/makrofagien sisäänvirtauksella glomeruluksiin tämän reaktion jälkeen (22, 23). Tälle munuaistulehdukselle on ominaista kaksivaiheinen virtsan proteiini ja hypersellulaarisuus, johon liittyy puolikuun muodostuminen ja fibrinoidinekroosi. Puolikuun muodostumisen uskotaan olevan siirtyneiden makrofagien ja lisääntyneiden epiteelisolujen välittämiä (22, 24).

Ilmoitimme aiemmin, että mitoribiini ja Aza, immunosuppressiivinen aine (7), estivät plasman vasta-aineen nousua kanin IgG:tä ja Pachymania, joka on Poria cocosin pääkomponentti (18), vähensivät C3:n kerrostumista GBM:ään, ja molemmat olivat huomattavan tehokas anti-GBM-nefriittiä vastaan.

ACT-hoidot tukahduttivat anti-GBM-glomerulonefriitin kehittymisen arvioituna proteinurian ja plasman kolesterolin vähenemisenä, munuaisten toiminnan heikkenemisen ehkäisynä ja etenevien histologisten muutosten ehkäisyssä, mukaan lukien glomerulaaristen puolikuuten ja hypersellulaarisuuden kehittyminen. 40. päivänä pelkkä ACT annoksella 30 mg/kg vähensi merkitsevästi rotan IgG:n kerääntymisen määrää GBM:lle, jota välitti vasta-ainetuotannon suppressio tässä nefriittimallissa. Toisaalta ACT vähensi GBM:n C3-kertymien määrää 3, 10 tai 30 mg/kg. Lisäksi ACT esti merkittävästi komplementin aktivaatiota sekä in vitro että ex vivo -kokeissa. ACT esti CH50:n vähenemisen nefriittisissä kontrollirotissa. Yllä olevat tiedot viittaavat siihen, että ACT estää munuaisvauriota estämällä komplementin aktivaatiota, koska komplementin kalvohyökkäyskompleksi (MAC) osallistuu glomerulaarisen vaurion patogeneesiin (25), ja sublyyttisellä MAC:lla on mahdollisia tulehduksen välittäjiä, jotka voivat liittyä glomerulusvaurioon. mesangiaalisolujen lisääntyminen ja solunulkoisen matriisin diffuusiot, kuten reaktiiviset happilajit (26), proteaasi (27), prostaglandiinit (28) ja interleukiini-1, kuten sytokiinit (29), sekä kollageeni (30).

Uskotaan, että komplementin aktivaatio liittyy läheisesti leukosyyttien infiltraatioon. Viimeaikaisissa tutkimuksissa on raportoitu, että C5a provosoi monosyyttien ja neutrofiilien tarttumista mesangiaalisoluihin ja endoteelisoluihin, vastaavasti (31, 32). Siksi aiomme jatkotutkimuksessa tutkia ACT:n vaikutusta leukosyyttien kertymiseen glomeruluksissa.

VIITTEET

1 Yamahara J, Kitani T, Kobayashi H ja Kawahara Y: Studies on Stachys sieboldii MIQ. II Anoksian vastainen vaikutus ja aktiiviset aineosat. Yakugaku Zasshi 110, 932-935 (1990) (abstriininen englanti)

2 Takeda Y, Fujita T, Satoh T ja Kakegawa H: Stachys sieboldii MIQ:n glykosidisista ainesosista. ja niiden vaikutukset hyaluronidaasiaktiivisuuteen. Yakugaku Zasshi 105, 955-959 (1985) (Abstr englanniksi)

3 Sasaki H, Nishimura H ja Morita T: Rehmannia gluttons var. hueichingensis. Planta Med 55, 458-462 (1989)

4 Saito T ja Atkins RC: Yksitumaisten leukosyyttien vaikutus kokeellisen fokaalisen glomerulaarisen skleroosin etenemiseen. Kidney Int 37, 1076-1083 (1990)

5 Tipping PG, Neale TJ ja Holdsworth SR: T-lymfosyyttien osallistuminen vasta-aineiden aiheuttamaan kokeelliseen glomerulonefriittiin. Kidney Int 27, 530-537 (1985)

6 Neild GH, Ivory K ja Williams DG: Syklosporiini A estää kaniinien sactus seerumitautia. Clin Exp Immunol 52, 586-594 (1983)

7 Okamoto K, Ito M ja Suzuki Y: Tutkimukset antinefriittisestä vaikutuksesta mitoribiiniin (p-INN, Bredinin®), uuteen immunosuppressiiviseen aineeseen, ja atsatiopriiniin (2): Vaikutus puolikuutyyppiseen anti-GBM-nefriittiin rotilla. Jpn J Pharmacol 34, 33-41 (1984)

8 Nagamatsu T, Kojima N, Kondo N, Hattori T, Kojima R, Ito M ja Suzuki Y: Anti-GBM-nefriitin estäminen siklosporiini A:lla rotilla. Jpn J Pharmacol 58, 27-36 (1992)

9 Taniguchi H, Nagamatsu T, Kojima R, Ito M ja Suzuki Y: Merkittävä antinefriittivaikutus ja metyyliprednisolonisultanaatin vähemmän haittavaikutukset ajoittaisella antamisella rotille. Jpn J Pharmacol 64, 79-88 (1994)

10 Hattori T, Furuta K, Hayashi K, Nagamatsu T, Ito N ja Suzuki Y: Kasvikomponenttien antinefriittivaikutuksia koskevat tutkimukset (6): Fellogenin (OB-5) antinefriittiset vaikutukset ja mekanismit puolikuussa. tyypin anti-GBM-nefriitti rotilla (2). Jpn J Pharmacol 60, 187-195 (1992)

11 Mason J: Sandimmunen vaikutukset munuaisiin. Clin Res Bull 6, 47-51 (1989)

12 Ito M, Yamada H, Okamoto Y ja Suzuki Y: Puolikuun tyyppinen nefriitti, jonka aiheuttaa anti-glomerulaarinen tyvikalvo (GBM) seerumi rotilla. Jpn J Pharmacol 33, 1145-1154 (1983)

13 Kingsbury FB, Clark CP, Williams G ja Post AL: Albumiinin nopea määritys virtsasta. J Lab Clin Med 11, 981-989 (1926)

14 Zurkowski P: Nopea menetelmä kolesterolin määrittämiseen yhdellä reagenssilla. Clin Chem 10, 451-453 (1964)

15 Mcleish KR, Clark CP, Williams G ja Post AL: Prostaglandiini E:n vasta-ainesynteesin suppressio mekanismina hiiren immuunikompleksin glomerulonefriitin ehkäisyssä. Lab Invest 47, 147-152 (1982)

16 Mayer MM: Komplementti ja komplementin kiinnitys. Teoksessa Experimental Immunochemistry, ss 133-240, Charles C. Thomas, Springfield (1961)

17 Hattori T, Ito M, Nagamatsu T ja Suzuki Y: Tutkimukset TJ-8014:n, uuden japanilaisen kasviperäisen lääkkeen, munuaistulehdusta estävästä vaikutuksesta (3): Vaikutukset puolikuun tyyppiseen anti-GBM-nefriittiin rotilla. Jpn J Pharmacol 52, 131-140 (1990)

18 Hattori T, Hayashi K, Nagao T, Furuta K, Ito M ja Suzuki Y: Kasvikomponenttien antinefriittisiä vaikutuksia koskevat tutkimukset (3): Poria cocos Wolfin pääkomponentin, pakymaanin vaikutus alkuperäiseen nal-tyyppiseen anti-GBM:ään nefriitti rotilla ja sen mekanismit. JpnJ Pharmacol 59, 89-96 (1992)

19 Shibata S, Miyakawa Y, Naruse T, Nagasawa T ja Takuma T: Glykoproteiini, joka indusoi nefrotoksista vasta-ainetta: Sen eristäminen ja puhdistaminen rotan glomerulusten tyvikalvosta. J Immunol 102, 593 601 (1969)

20 Falk RJ: ANCA:han liittyvä munuaissairaus. Kidney Int 38, 998-1010 (1990) 21 Mulligan MS, Johnson KJ, Todd RF III, Issekutz TB, Miyasaka M, Tamatani T, Smith CW, Anderson DC ja Ward PA: Vaatimukset leukosyyttien adheesiomolekyyleille nefrotoksisessa nefriitissä. J Clin Invest 91, 577-587 (1993)

22 Nahas AME: Kasvutekijät ja glomeruluskleroosi. Kidney Int 41, Supp 36, S15-S20 (1992)

23 Boyce NW, Holdsworth SR, Dijkstra CD ja Atkins RC: Intraglomerulaaristen mononukleaaristen fagosyyttien kvantifiointi rotan kokeellisessa glomerulonefriitissä käyttämällä spesifisiä monoklonaalisia vasta-aineita. Patology 19, 290-293 (1987)

24 Becker GJ, Hancock WW, Stow JL, Glasgow EF, Atkins RC ja Thomson NM: Makrofagien osallistuminen kokeelliseen krooniseen immuunikompleksiglomerulonefriittiin. Nephron 32, 227-233 (1982) 25 Perkinson DT, Baker PT, Couser WG, Johnson BJ ja Adler S: Kalvohyökkäyskompleksin kerrostuminen kokeellisessa glomerulaarisessa vauriossa. Am J Pathol 120, 121-128 (1985)

26 Alder S, Baker PJ, Johnson RJ, Ochi RF, Pritzl P ja Couser WG: Komplementtikalvohyökkäyskompleksi stimuloi reaktiivisten hapen metaboliittien tuotantoa viljeltyjen rottien mesangiaalisoluissa. J Clin Invest 77, 762-767 (1986)

27 Johnson RJ, Couser WG ja Alpers CE: Ihmisen neutrofilistiiniproteaasi, esteraasi ja katepsiini G voivat välittää glomerulusvaurioita in vivo. J Exp Med 168, 1169-1174 (1988)

28 Cybusky AV, Lieberthal W, Quigg RJ, Rennke HG ja Salant DJ: Tromboksaanin rooli komplementtivälitteisessä glomerulaarisessa vauriossa. Am J Pathol 128, 45-51 (1987)

29 Lovett D, Hansch G, Resch K ja Gemsa D: Glomerulaaristen mesangiaalisolujen aktivointi terminaalisilla komplementtikomponenteilla. Prostanoidin ja interleukiini-l:n kaltaisen tekijän vapautumisen stimulointi. Immunobiology 168, 34-35 (1986)

30 Torbohm I, Schonermark M, Wingen AM, Berger B, Rother K ja Hansch GM: C5b_8 ja C5b_9 moduloivat ihmisen munuaiskerästen epiteelisolujen kollageenin vapautumista. Kidney Int 37, 1098-1104 (1990)

31 Lo SK, Detmers PA, Levin SM ja Wrigh SD: Neutrofiilien ohimenevä adheesio endoteeliin. J Exp Med 169, 1779 -1793 (1989) 32 Brady HR, Denton MD, Jimenez W, Takata S, Palliser D ja Brenner BM: Kemoattraktantit aiheuttavat monosyyttien kiinnittymistä ihmisen mesangiaalisoluihin ja mesangiaalisoluvaurioita. Kidney Int 42, 480-487 (1992)