3.3. In vitro -tutkimukset

3.3.1. Sytotoksisuuden arviointi ihmisen keratinosyyteissä

Asiaankuuluvien tutkimusten mukaancistancheon yleinen yrtti, joka tunnetaan nimellä "ihmeyrtti, joka pidentää elämää". Sen pääkomponentti oncistanosidi, jolla on erilaisia ​​vaikutuksia, kutenantioksidantti, tulehdusta estävä,jaimmuunijärjestelmän toiminnan edistäminen. Mekanismi cistanchen jaihon valkaisuunpiilee antioksidanttisessa vaikutuksessacistanche-glykosidit. Ihmisen ihossa oleva melaniini muodostuu tyrosiinin hapettumisesta, jota katalysoityrosinaasi, ja hapetusreaktio vaatii hapen osallistumista, joten kehon happivapaista radikaaleista tulee tärkeä melaniinin tuotantoon vaikuttava tekijä. Cistanche sisältää cistanosidia, joka on antioksidantti ja voi vähentää vapaiden radikaalien muodostumista kehossa, jotenestää melaniinin tuotantoa.

Napsauta Cistanche Powder Bulk

Lisätietoja:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

MTT-määritystä käytettiin testaamaan, voisivatko PPEE, PPEE-SLN:t ja KDPAG vaikuttaa solujen elinkelpoisuuteen käyttämällä ihmisen keratinosyyttejä. Eri konsentraatioita PPEE:tä, PPEE-SLN:iä, uutteettomia SLN:itä ja KDPAG:ta klo 0.{{10}}625–1mg/ml inkuboitiin 24 tunnin ajan ihmisen keratinosyyttisolulinjan kanssa (Kuva 2). Ihmisen keratinosyyttien solujen elinkelpoisuudessa ei havaittu merkittävää vähenemistä 24 tunnin aikana konsentraatioalueella 0.0625–0,5 mg/ml (p < 0,05). Kuitenkin 1 mg/ml:lla PPEE:tä, PPEE-SLNS:ää, uutetta sisältämättömiä SLN:itä ja KDPAG:ia 24 tunnin aikana suoritetun käsittelyn jälkeen ihmisen keratinosyyttien solujen elinkelpoisuudessa havaittiin merkittävä väheneminen, 93 prosenttia, 90 prosenttia, 95 prosenttia ja 89 prosenttia soluista selvisi vastaavasti. Siten myöhemmissä tutkimuksissa käytettiin PPEE-, PPEE-SLN- ja KDPAG-pitoisuuksia, jotka olivat yhtä suuria tai pienempiä kuin 0,5 mg/ml.

Antioksidanttiaktiivisuus arvioitiin käyttämällä DPPH-, ABTS-järjestelmiä ja -karoteenivalkaisutestiä. Kaikissa testatuissa näytteissä havaittiin pitoisuudesta riippuvainen tapa. DPPH-määrityksessä KDPAG osoitti suurinta huuhteluaktiivisuutta, jota seurasivat PPEE-SLN:t ja sitten PPEE. IC50-arvot olivat 6,35 ± 3,4{{30}} µg/ml, 8,79 ± 2,70 µg/ml ja 10,5 ± 1,81 µg/ml verrattuna C-vitamiiniin. käytetään standardina IC50-arvon ollessa 2 ± 0,01 µg/ml. Tämä suuntaus havaittiin myös ABTS-radikaaleja vastaan, joiden arvo oli 3,91 ± 1,43 µg/ml, 4,29 ± 1,12 µg/ml ja 6,10 ± 0,62 µg/ml, verrattuna standardi Vit. C IC50:llä 0,96 ± 0,02 µg/ml, mikä vahvistaa DPPH-määrityksen tulokset. Tällainen PP-lehtiuutteiden ja niiden fraktioiden huuhteluaktiivisuus on jo osoitettu molemmissa määrityksissä, mutta korkeammilla arvoilla kuin saadut [14,49]. Nämä havainnot viittaavat siihen, että antioksidanttien aktiivisuuteen vaikuttavat ympäristöolosuhteet, kasvin osat, kypsyysaste, sadonkorjuutapa ja uuttamiseen käytetyt liuottimet. Nämä tulokset ovat yhdenmukaisia ​​kirjallisuuden kanssa, sillä PP-lehtiuutteella havaittiin olevan parempi antioksidanttikapasiteetti kuin siemen-, kuori-, hedelmä- ja hedelmäuutteilla molemmissa määrityksissä [14,20,50]. Myös PP-lehtien korkean flavonoidipitoisuuden, erityisesti flavonolien, uskottiin olevan vastuussa antioksidanttiaktiivisuudesta [20].

PPEE, PPEE-SLN ja KDPAG osoittivat anti-elastaasi-, anti-kollagenaasi- ja anti-tyrosinaasiaktiivisuutta korkealla prosentuaalisella inhibitiolla pitoisuudella 300 ug/ml ja suhteellisen alhaisilla IC50-arvoilla (taulukko 3) verrattuna vastaaviin positiivisiin kontrolleihinsa.

3.4. PPEE-SLN- ja PPEE-SLN-kerman arviointi

Valmistetut PPEE-SLN-formulaatiot osoittivat partikkelikoot 170 nm - 176 nm; tämä osoittaa, että pinta-aktiivisen aineen lisääminen kiinteisiin lipidinanohiukkasjärjestelmiin saa rajapinnan kalvon kondensoitumaan ja stabiloitumaan. Formulaatiot osoittavat alhaisia ​​polydispersiteettiindeksin arvoja (0,23{{10}}–0,450), mikä osoittaa hiukkaskokojakauman homogeenisuuden, kun ZP on välillä −21,8 ja −22,0, mikä varmistaa korkean stabiilisuuden tuotteet (Kuva 3a, b). Kirjattu 70–77 prosentin PPEE-SLN:n kapselointitehokkuus johtuu lipidistä (glyserolimonostearaatti), joka pystyy sulkemaan helmien pintahuokoset. TEM- ja SEM-mikrokuvat paljastivat nanohiukkasten muodostumisen kapealla hiukkaskokojakaumalla, sileillä, pallomaisilla ja homogeenisilla nanovesikkeleillä (kuva 3c, d). FTIR:ssä PPEE:llä on tyypilliset piikit kohdissa 3352 cm-1, joka vastaa aromaattista sekundaarista amiinia NH-venytystä, 2974,23 cm-1 vastaa aromaattista CH-venytystä, 1735,93 cm-1 vastaa C=O-venytystä ja 1257,59 cm-1. 1, joka vastaa CN-alifaattisen amiinin venytystä, kuten näkyy (kuvio 4). PPEE:n ja lipidien fysikaalisen seoksen FTIR-spektreillä on samat tyypilliset piikit johtuen aromaattisen sekundaarisen amiinin NH venymisestä 3348,42 cm-1, C=O-venymisestä 1735,93 cm-1:ssä ja CN-alifaattisen amiinin venymisestä 1257,59 cm:ssä. −1. Siten on ilmeistä, että kaikki PPEE-spektreissä esiintyneet tunnusomaiset piikit replikoituivat lähes samalla alueella PPEE-SLN-fysikaalisen seoksen spektrissä, mikä osoittaa, että lääkkeiden ja lipidien välillä ei ole merkittävää vuorovaikutusta. PPEE-SLNs-voiteet (2 prosenttia ja 5 prosenttia) olivat kellertäviä, sileä ulkonäkö, sileä pinta ja sopiva pH-arvo välillä 5–5,8 ± 0,15, mikä vahvistaa formulaatioiden yhteensopivuuden ihon eritteiden kanssa, ei ärsytä ihmisen ihoa, ei punoitusta tai turvotusta, helposti pestävä vedellä ja hyvä levittävyysarvo vaihteli välillä 10-13 g cm/s, viskositeetti 500 ± 6,24 - 600 ± 7,52 CPS nopeudella 10 rpm, ei näyttöä faasien erottumisesta ja hyvä konsistenssi opintojakson aikana. Bakteerien ja homeiden kokonaismäärä oli alle 100 CFU/ml ja ihonhoitotuotteiden hyväksymisalueella. 2-prosenttinen voide osoitti PPEE-SLN:iden alkupurskeen vapautumisen noin 15,21 ± 1,44 prosenttia ensimmäisen 1 tunnin aikana; sen jälkeen kermaan jääneet PPEE-SLN:t vapautuivat vähitellen; 60,32 ± 2,54 prosenttia vapautui 12 ja 62 ± 1,44 prosenttia lähes 24 tunnin kuluttua. Toisaalta 5-prosenttinen voide osoitti PPEE-SLN:iden alkupurskeen vapautumisen noin 20,21 ± 2,70 prosenttia ensimmäisen 1 tunnin aikana; sen jälkeen kerman sisään jääneet PPEE-SLN:t vapautuivat asteittain, 77,12 ± 2,88 prosenttia vapautui 12 ja 80 ± 2,91 prosenttia melkein 24 tunnin kuluttua. Molemmat emulsiovoidevalmisteet osoittivat PPEE:n pidennettyä vapautumista 24 tunnin aikana (kuvio 5). Lisäksi tutkimuksemme osoitti, että kerman formulaatiot (2 prosenttia ja 5 prosenttia) ovat stabiileja kaksi kuukautta.

3.5. In vivo -tutkimukset

Kahdenkymmenen päivän voidehoidon jälkeen ryppyjen vastaiset pisteet arvioitiin. PPEE-SLNs-voiteen ryppyjä ehkäisevä vaikutus oli annoksesta riippuvainen, ja 5 prosentin PPEE-SLNs-voiteen ryhmässä (G5) havaittu vaikutus oli verrattavissa tulokseen positiivisessa kontrolliryhmässä (G3), jota hoidettiin markkinoilla olevaa tuotetta (kuva 6) ja osoitti huomattavasti parempia ryppyjä ehkäiseviä tuloksia verrattuna tavalliseen ryppyjä ehkäisevään voiteeseen. Valokuvat on esitetty kuvassa 7. Ryhmät (G3–G5) osoittivat erittäin sileät ja paremmat ihopinnat. G1-eläimillä ei ollut ihomuutoksia. Sitä vastoin G2 osoitti paksuja ja syviä ryppyjä.

UV-säteilyn vaikutuksesta elastiset kuidut vähenivät merkittävästi normaaliryhmään verrattuna. Käsittelemättömien ja käsiteltyjen hiirten ihokuvia tarkkailtiin mikroskoopilla (kuvio 8). G1:llä oli normaali ihon paksuus sekä dermiksessä että epidermiksessä ja se sisälsi fibroblasteja normaalin elastisten kuitujen paksuuden lisäksi ilman fragmentoitumista. Verrattuna G1:een UV-säteilytettyjen hiirten iho (G2) osoitti merkittävää lisäystä sekä orvaskeden että dermiksen paksuuntumisessa sekä fibroblastien ja elastisten kuitujen muodostumisen vähentyessä UV-säteilyn vaikutuksesta. 5 prosentin (G5) ja 2 prosentin (G4) PPEE SLNs -emulsiovoiteen paikallinen käyttö oli verrattavissa kaupallisen tuotteen saaneeseen G3:een. Kaikki G4 ja G5 vähensivät merkittävästi dermiksen ja orvaskeden paksuutta ja lisäsivät fibroblastien määrää, koska niiden määrä määrittää kollageenikuitupitoisuuden, mikä auttaa korjaamaan vaurioitunutta ihoa ja vähentämään ihon ikääntymisvaikutusta (Kuva 9a,b) . Molemmilla ryhmillä oli myös ennaltaehkäiseviä vaikutuksia elastisten kuitujen hajoamista vastaan ​​UV-säteilyn vaikutuksesta, joten voimme päätellä, että käsittely jommallakummalla annoksella PPEE-SLNs kermaa osoitti suojaavaa vaikutusta UV-säteilyä vastaan.

Lisätietoja: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501