Abstrakti: Polyfenolit ovat tunnettuja ravinnon antioksidantteja. Ne ovat viime aikoina herättäneet suurta kiinnostusta ihon ikääntymisen ja auringon UV-säteilyn aiheuttaman hyperpigmentaation estämiseen. Prunus persican (L.) lehtiä pidetään sivutuotteina, ja niillä on raportoitu olevan huomattava antioksidanttiaktiivisuus niiden korkean polyfenolipitoisuuden vuoksi. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli kehittää kosmeettinen ikääntymistä estävä ja ihoa valkaiseva voidevalmiste, jossa käytetään Prunus persican (L.) (PPEE) etanolilehtiuutetta, joka on ladattu kiinteisiin lipidinanohiukkasiin (SLN) ihon leviämisen tehostamiseksi. PPEE:n kemiallinen tutkimus osoitti merkitsevästi korkean kokonaisfenoli- ja flavonoidipitoisuuden ja merkittäviä antioksidanttivaikutuksia (DPPH-, ABTS- ja karoteenimääritykset). Ainutlaatuinen asyloitu kaempferoliglykosidi, jolla on harvinainen rakenne, kaempferoli 3-O- -4C1-(600 -O-3,4-dihydroksifenyyliasetyyliglukopyranosidi) ( KDPAG) eristettiin ensimmäistä kertaa ja sen rakenne selvitettiin täysin. Se edustaa ensimmäistä esimerkkiä asyloinnista 3,{{10}}dihydroksifenyylietikkahapolla flflavonoidikemiassa. Ihmisen keratinosyyttisolulinjaa vastaan ​​tehdyt in vitro sytotoksisuustutkimukset paljastivat PPEE:n ja PPEE-SLN:iden ei-toksisuuden. Lisäksi PPEE, PPEE-SLN ja KDPAG osoittivat hyvää anti-elastaasiaktiivisuutta, joka on verrattavissa N (metoksisukkinyyli)-Ala-Ala-Pro-Val-kloorimetyyliketonin aktiivisuuteen. Lisäksi PPEE-SLN:t ja KDPAG osoittivat merkitsevästi (p < 0,001) korkeammat anti-kollagenaasi- ja anti-tyrosinaasiaktiivisuudet verrattuna EDTA:han ja vastaavasti kojiinihappoon. Eri PPEE-SLN-voidekoostumukset (2 prosenttia ja 5 prosenttia) arvioitiin mahdollisen ryppyjä ehkäisevän vaikutuksen suhteen UV:n aiheuttamaa valovanhenemista vastaan ​​hiirimallissa käyttämällä ryppyjen pisteytysmenetelmää, ja niiden osoitettiin tarjoavan erittäin merkittävän UV-suojavaikutuksen, kuten todistettiin. kudosbiomarkkereilla (SOD) ja histopatologisilla tutkimuksilla. Näin ollen nykyinen tutkimus osoittaa, että Prunus persican lehtien sivutuotteet tarjoavat mielenkiintoisen, arvokkaan resurssin luonnonkosmeettisille ainesosille. Tämä tarjoaa asiaan liittyvää tietoa PPEE-SLN:ien mahdollisen turvallisen käytön tutkimiseen paikallisissa anti-aging kosmeettisissa koostumuksissa, joilla on parannetut ihon läpäisyominaisuudet.

Asiaankuuluvien tutkimusten mukaancistancheon yleinen yrtti, joka tunnetaan nimellä "ihmeyrtti, joka pidentää elämää". Sen pääkomponentti oncistanosidi, jolla on erilaisia ​​vaikutuksia, kutenantioksidantti, tulehdusta ehkäisevä, jaimmuunijärjestelmän toiminnan edistäminen. Mekanismi cistanchen jaihon valkaisuunpiilee antioksidanttisessa vaikutuksessacistanche-glykosidit. Ihmisen ihossa oleva melaniini muodostuu tyrosiinin hapettumisesta, jota katalysoityrosinaasi, ja hapetusreaktio vaatii hapen osallistumista, joten kehon happivapaista radikaaleista tulee tärkeä melaniinin tuotantoon vaikuttava tekijä. Cistanche sisältää cistanosidia, joka on antioksidantti ja voi vähentää vapaiden radikaalien muodostumista kehossa, jotenestää melaniinin tuotantoa.

Napsauta Cistanche Supplement for Whitening -linkkiä

Lisätietoja:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Esittely

Ihon ikääntyminen on monimutkainen monitekijäinen etenevä prosessi, joka katalysoi fyysisiä muutoksia ihossa ja sidekudoksessa [1]. Se luokitellaan sisäiseen ja ulkoiseen ikääntymiseen.

Ihon ulkoinen ikääntyminen johtuu pääasiassa ympäristötekijöistä, kuten saasteista, tupakoinnista ja elämän stressistä, tai pääasiassa toistuvasta altistumisesta UV-säteilylle (valokuvaus) [2].

Ylialtistuminen UV-säteilylle stimuloi reaktiivisten happilajien (ROS) ylituotantoa, mikä johtaa endogeeniseen oksidatiiviseen stressiin ihokudoksissa, mikä johtaa ekstrasellulaarisen matriisin (ECM) komponenttien hajoamiseen. ECM:n hajoaminen liittyy suoraan ihon ikääntymiseen ja on vastuussa tiettyjen ihon ikääntymiseen osallistuvien entsyymien, kuten kollagenaasin, elastaasin ja tyrosinaasin, aktiivisuuden lisääntymisestä. Nämä dermaaliset entsyymiaktivaatiot aiheuttavat elastiinin ja kollageenin pitoisuuksien laskua, mikä johtaa ihon kimmoisuuden ja lujuuden menettämiseen ja ryppyjen ilmestymiseen [3]. Myös liiallisen melaniinin tuotannon ja ihon rusketuksen indusoituminen johtaa ihon hyperpigmentaatioon.

Siksi ihon ikääntymistä voidaan ehkäistä antioksidanteilla, joilla on vapaita radikaaleja sieppaava vaikutus, jolla voi olla suuri merkitys ikääntymiseen liittyvien sairauksien, joihin liittyy ROS, puolustus ja hoito [4]. Toinen tapa hidastaa ikääntymistä on käyttää elastaasin, kollagenaasin ja tyrosinaasin estäjiä, jotka ovat erittäin vahvoja ehdokkaita ryppyjä ehkäiseviin ja ihon valkaisuihin, mikä tukee ihon kimmoisuuden säilyttämistä ja voivat olla yleinen lähestymistapa pigmentaatiohäiriöiden hoitoon [5].

On raportoitu, että kasveista eristetyt luonnolliset antioksidantit vähentävät UV-säteilyn aiheuttamaa valovanhenemisen riskiä sekä in vitro että in vivo [6] ja ne ovat edullisempia kosmeettisina ainesosina kuin synteettiset antioksidantit kustannusten ja sivuvaikutusten suhteen. Lisäksi monet in vitro ja in vivo -tutkimukset ovat osoittaneet, että fenoliyhdisteet, kuten fenolihapot, flavonoidit ja tanniinit, voivat poistaa vapaita radikaaleja ja estää elastaasi-, kollagenaasi- ja tyrosinaasientsyymejä [7].

Luonnollisten antioksidanttien käytöstä paikallisissa valmisteissa ihon suojaamiseksi ulkoisten tekijöiden aiheuttamalta oksidatiiviselta stressiltä on raportoitu [8]. Suurin osa antioksidanttimolekyyleistä on kuitenkin luontaisesti epästabiileja ja voivat helposti hapettua muodostaen inaktiivisia yhdisteitä ennen kuin ne saavuttavat vaikutuskohdan, mikä tekee niistä vaikeaksi formuloida sopivan ja stabiilin kosmeettisen tuotteen. Nämä havainnot osoittavat ainutlaatuisten annostelujärjestelmien tarpeen näiden antioksidanttiformulaatioiden tehostamiseksi [9].

Useat tekijät vaikuttavat paikallisesti käytettyjen polyfenolien läpäisevyyteen; fenolialaluokka, sen rakenne, molekyylikoko ja glykosidi- tai aglykonimuoto sekä muut formulaation komponentit. Vuorovaikutus ihon komponenttien kanssa fysikaalisten ja kemiallisten menetelmien yhdistelmällä voisi kuitenkin parantaa läpäisevyyttä sarveiskerroksen kerroksen palautuvan hajoamisen kautta. Kapselointimenetelmät ovat yksi läpäisevyyttä lisäävistä menetelmistä, joita käytetään yleisimmin polyfenolien stabiloimiseen helposti varastoinnin aikana, mikä lisää niiden antioksidanttisia vaikutuksia, ihon kautta imeytymistä ja tunkeutumista kosmeettisissa ja paikallisissa hoidoissa. Äskettäin kehitettyihin kapselointitekniikoihin kuuluvat nanoemulsiot, transferaasit, kiinteät lipidinanohiukkaset, nanokiteet ja ribosomit [10].

Kiinteät lipidinanohiukkaset (SLN:t) ovat vakaa kuljetusjärjestelmä ihotuotteille. SLN:itä pidetään lupaavina lääkekantaja-aineina paikallisiin formulaatioihin niiden fotostabiilisuuden, kontrolloidusti vapautuvien ominaisuuksien, oklusiivisuuden, hajua peittävien vaikutusten ja aktiivisten aineosien ihon läpi tunkeutumisen tehostamisen vuoksi lisäämällä sen kosteutta ilman ihoärsytyksen merkkejä yksinkertaisuuden lisäksi. tuotanto, alhainen myrkyllisyys ja fyysinen stabiilisuus [9,11].

Maailmanlaajuisesti on olemassa noin 2000 persikkalajiketta [12]. Prunus (Rosaceae) on kuuluisa kasvisuku, johon kuuluu runsaasti fenolia sisältäviä lajeja [13–15]. Joitakin tämän suvun lajeja viljellään Egyptissä syötävien hedelmiensä vuoksi tai koristekasveina [16].

Prunus persica (L.) Batch (PP) on pieni puu, jossa on kaljuja oksia ja lyhyt runko, leviävä, pyöreä latvu [12] ja jota viljellään yleisesti Länsi-Aasiassa, Euroopassa, Intiassa ja Pohjois-Afrikassa [17]. Perinteisesti sen lehtiä on käytetty diureetteina, laksatiivina, vermifugeina, hyönteismyrkkyinä, rauhoittavina lääkkeinä, hinkuyskän hoitoon, leukoderman hoitoon ja kuumelääkkeinä [17]. Lisäksi lehtien farmakologiset tutkimukset karakterisoivat niiden in vivo diabetesta estävän, spasmogeenisen vaikutuksen, anti-inflammatorisen, antikoagulantin, maksan suojaavan, malarialääkkeen, astman vastaisen ja in vitro sytotoksisen, antimikrobisen ja typpioksidia estävän vaikutuksen sekä merkittävän antioksidanttivaikutuksen. [18–22].

On tehty monia tutkimuksia PP-seuraajien, hedelmien ja siementen fenoliprofiilin, niiden antioksidanttiaktiivisuuden sekä farmakologisten ja ravintoarvojen tutkimiseksi [13,14,23,24]. Lehdistä oli kuitenkin saatavilla hyvin vähän tietoja. Tähän mennessä on saatavilla yksi raportti, jossa kuvataan viiden flavonoliglykosidin eristäminen etanolin lehtiuutteesta [25]. Lisäksi on karakterisoitu fenoliyhdisteitä, mukaan lukien fenolihapot ja flflavonoidit käyttäen HPLC-MS-analyysiä, jossa flflavonolit ovat hallitsevia aineita kaikkien määritettyjen yhdisteiden joukossa [20,26].

Lisäksi vaikka PP-siemenillä, hedelmillä, seuraajilla ja muilla lajeilla on raportoitu olevan in vivo suojaavaa vaikutusta UV-indusoitua valon ikääntymistä vastaan ​​ja in vitro -ryppyjä ehkäiseviä ja ihoa valkaisevia vaikutuksia [15,23,27–32], tämä ei ole koskaan raportoitu PP-lehtiuutteesta.

Suuret määrät PP-lehtiä ovat persikkapuiden viljelyn ja hedelmien säilyketeollisuuden sivutuotteita [33]. PP-siementen, hedelmien ja muiden lehtilajikkeiden sivutuotteita on arvioitu kosmetiikassa ja ruokavaliossa mahdollisen arvostuksen kannalta [32,34,35]. Kuitenkin parhaan tietomme mukaan lehdet sivutuotteet PP var. Florida Princeä ei ole koskaan tutkittu, ja se voisi olla mielenkiintoinen fytokemikaalien lähde. Muihin teollisuudenaloihin verrattuna kosmetiikkamarkkinat ovat helpommin saavutettavissa ja kasvavat, ja ne voivat olla sivutuotteiden arvostuksen lähde [15]. Ihonhoito- ja ihon ikääntymistuotteet ovat eräitä tärkeimmistä kosmeettisista mahdollisuuksista.

Jatkoa egyptiläisten syötävien kasvien polyfenoleja [36] koskevalle tutkimuksellemme ja koska PP-lehtiä pidetään sivutuotteina ja niillä on raportoitu olevan merkittävää antioksidanttiaktiivisuutta pääasiassa niiden korkean flavonolipitoisuuden vuoksi, tämän tutkimuksen tavoitteena on altistaa PPEE laajalle fytokemikaalille. sen fenoliprofiilin analysointia ja PPEE:n sisällyttämistä ladattuihin SLN:ihin ainutlaatuisena ihonkuljetusjärjestelmänä. Lisäksi ikääntymistä estävää ja ihoa valkaisevaa kosmeettista potentiaalia arvioitiin tutkimalla PPEE:n, PPEE-SLN:ien ja eristettyjen aineosien in vitro antioksidanttiaktiivisuutta sekä arvioimalla niiden ihoon liittyviä entsyymejä estäviä vaikutuksia. Sen lisäksi, että PPEE-SLN:t sisällytetään paikalliseen kosmeceuttiseen ikääntymistä estävään voiteeseen ja testataan tuotteen turvallisuutta sekä PPEE-SLN-voidevalmisteiden mahdollisen in vivo ryppyjä ehkäisevän vaikutuksen arviointi UV-indusoitua valovanhenemista vastaan. hiiren malli. Tämä voisi tarjota tietoja PPEE-SLN-lehtien mahdollisen käytön lisätutkimukseen paikallisissa formulaatioissa, joissa on parannettu ihon läpäisyä.

2. Materiaalit ja menetelmät

2.1. Kenraali

2.2. Kasvimateriaalit

2.3. Kasviuutteen valmistus 

2.4. Kokonaispolyfenolipitoisuuden (TPC) määrittäminen 

Li et al.:n [37] kuvaamaa Folin-Ciocalteu-reagenssia käytettiin arvioimaan PPEE:n fenolin kokonaispitoisuuden määrä mg ekvivalenttina gallushappoa/g kuiva-uutetta.

2.5. Flavonoidin kokonaispitoisuuden (TFC) määrittäminen

Alumiinikloridin kolorimetristä menetelmää, jonka ovat kuvanneet Bahromun et al., [38], käytettiin flavonoidien kokonaispitoisuuden arvioimiseen. Tulokset esitetään mg ekvivalenttina kversetiiniä/g kuivauutetta.

2.6. PPEE:n fraktiointi ja yhdisteen 1 eristäminen

2.7. Kaempferolin 3-O- -4C1-(6"-O-3,4-dihydroksifenyyliasetyyliglukopyranosidin) tunnistetiedot (1)

2.8. In vitro -tutkimukset

Ihmisen keratinosyyttisolulinja saatiin VACSERA CO:lta (The Egyptian Company for the Production of Vaccines, Sera, and Drugs, Giza, Egypti). MTT-määritys tehtiin PPEE:lle ja PPEE-SLN:ille Mostafa et ai. [36].

DPPH-määritys suoritettiin Yardpiroon et ai. [39], ja C-vitamiinia käytettiin positiivisena kontrollina. ABTS-määritys seurasi Re et al.:n [40] menetelmää, C-vitamiinia käytettiin standardina. Karoteenivalkaisumäärityksessä käytettiin Soulefin et ai. [14] kuvaamaa menetelmää positiivisen kontrollin BHT:n läsnä ollessa. Kunkin testinäytteen arvo esitettiin estokäyränä 50 prosentin tai IC50:n kohdalla.

Ikääntymistä estävät ja ihoa valkaisevat vaikutukset arvioitiin Mostafa et al.:n raportoimien menetelmien mukaisesti. [41]. Anti-elastaasimääritystä varten 1 µg/ml ihmisen leukosyyttielastaasia inkuboitiin HEPES-puskurin pH 7,5 ja jokaisen testatun uutteen tai 1,4 mg/ml N-metoksisukkinyyli-Ala-Ala-Pro-kloorimetyyliketonin (standardi-inhibiittori) kanssa. 96-kuoppalevy 20 minuutin ajan huoneenlämpötilassa ennen 100 µl:n 1 mM N-metoksisukkinyyli-Ala-Ala-Pro-Val-p-nitroanilidin lisäämistä substraatiksi. 40 minuutin inkubaation jälkeen absorbanssi mitattiin aallonpituudella 405 nm nollakokeena toimivalla kuoppalla, jossa ei ollut uutetta/inhibiittoria. Testattuja näytteitä käytettiin konsentraatioalueella 25–300 µg/ml.

2.9. PPEE-SLN:ien formulointi ja karakterisointi

Formulaatio tehtiin Choubeyn et ai. [11]. Ensin glyseryylimonostearaatti liuotettiin kloroformi-metanoli-seokseen (1:1) ja sitten etanoliuute dispergoitiin tähän liuokseen. Myöhemmin orgaaniset liuottimet poistettiin käyttämällä pyöröhaihdutinta ja liuosta kuumennettiin. Sitten lisättiin Tween 80 ja seosta sekoitettiin nopeudella 3000 rpm 30 minuuttia ja sitten homogenisoitiin 4 tuntia ennen suodatusta ja kuivaamista. PPEE-SLN:ien karakterisointia tutkittiin arvioimalla muodon ja pinnan morfologiaa, partikkelikokoa, polydispersiteettiindeksiä (PDI), zetapotentiaalianalyysiä, prosenttiosuutta kiinnijäämistehokkuutta (PEE) ja Fourier-muunnosinfrapunaspektroskopiatutkimuksia (FT-IR).

2.10. PPEE:n ajankohtaisten voidekaavojen valmistus

Kaksi kermaformulaatiota (2 prosenttia & 5 prosenttia PPEE-SLN:istä) valmistettiin taulukossa 1 esitetyllä tavalla Mahawar et ai. [42].

Aistinvaraiset ominaisuudet, voiteen pH, levittävyystutkimukset, viskositeettitesti, homogeenisuustesti, patch-testi (Burchard-testi), in vitro ihon läpäisytutkimus ja stabiilisuustutkimukset (ICH-ohjeet) arvioitiin Matangin et al. [43]. Mikrobirajatesti suoritettiin julkaisun Sekar et al. [44].

2.11. In-Vivo ryppyjä ehkäisevä tutkimus PPEE-SLNs -voiteesta

Viisikymmentä uroskarvatonta hiirtä (HR{{0}}) (4-viikon ikäinen), 17–24 g, saatiin VACSERAlta. Kokeilu suoritettiin lokakuun Modernien tieteiden ja taiteiden yliopiston (MSA) eettisen komitean hyväksynnän jälkeen. Protokollan numero (PG1/EC1/2020PD) näytekoko määritettiin (G. Power) ohjelmiston mukaan. Viikkoa ennen in vivo -ryppyjä ehkäisevää tutkimusta hiiret pääsivät vapaasti käsiksi ruokaan ja veteen ja tottuivat ilmastoituun huoneeseen (23 ± 2 ◦C). Hiiret (50) jaettiin viiteen ryhmään, satunnaisesti (n=10) taulukon 2 mukaisesti. Hoito suoritettiin 40 päivän ajan, kolme kertaa viikossa, 0,5 g:lla PPEE-SLNs-voidetta tai mitä tahansa muuta hoitoa ja levitettiin dorsaalihiiren iholle ja altistettiin sen jälkeen UV-säteilylle (365 nm).

Ennen ja jälkeen paikallisia hoitoja, kaksi kertaa viikossa, otettiin selkähiirten ihokuvia. Ihon ryppyjen luokittelu arvioitiin käyttämällä Bissetin visuaalista ryppyasteikkoa [45]. Arviointiasteikon perustana olivat ryppyjen (hieno tai karkea) ja keratoosin rakenne jaettuna viiteen luokkaan: huonompi (−2), hieman huonompi (−1), ei muutosta (0), hieman parantunut ( plus 1) ja parannettu ( plus 2).

Histologinen arviointi tehtiin Elder et ai. [46].

2.11.4. Superoksididismutaasin (SOD) aktiivisuus

SOD-aktiivisuus arvioitiin Ukeda et ai. [47].

2.12. Tilastollinen analyysi

3. Tulokset

3.1. Fenoli- ja flavonoidipitoisuus

TPC määritettiin spektrofotometrisesti PPEE:ssä pitoisuutena 387,5 ± 4,28 mg GAE/g uutetta. Myös TFC:ksi arvioitiin 241,7 ± 3,25 mg QE/g uutetta. PPEE osoitti korkeita fenoli- ja flflavonoidiyhdisteiden pitoisuuksia. Molemmat tulokset ovat PP-lehtiuutteille aiemmin raportoituja arvoja, jotka vahvistavat, että flavonoidit ovat PP-lehtien tärkeimmät kemialliset ainesosat [20].

3.2. Eristäminen ja rakenne Kempferolin selvitys

3-O- - 4C1-(600 -O-3,4-dihydroksifenyyliasetyyliglukopyranosidi), yhdiste 1

Kun kaikki tuon uutteen tunnetut rakenteet oli selvitetty, ainutlaatuisten, mahdollisesti biologisesti aktiivisten yhdisteiden etsiminen tehostui. Saatujen 2-DPC-analyyttisten tietojen mukaan PPEE:n fenolien havaittiin fraktioituvan parhaiten MCI-geelipylväässä, joka eluoitiin MeOH/H2O-seoksilla, joiden polariteetit vähenevät. Prosessi tuotti neljä pääosaa kolonnista. Amorfinen materiaali erotettiin kuumasta fraktion III konsentraatista (desorboitu kolonnista 70-prosenttisella vesipitoisella MeOH:lla) seisottaessa yön yli huoneenlämpötilassa. Tämän materiaalin kiteyttäminen kahdesti kiehuvasta EtOH:sta tuotti kromatografisesti puhtaan ruskeankeltaisen amorfisen jauheen 1. Se osoitti kromatografisia ominaisuuksia (tumma violetti spot-on PC UV-valossa, muuttui sitruunankeltaiseksi, kun se höyrystyy ammoniakkihöyryllä ja liikkui kohtalaisesti vesipitoisissa ja orgaanisissa liuottimissa ) ja värireaktiot (sitruunankeltainen väri Naturstoff-reagenssilla), mikä ehdotti kaempferolijohdannaista, jossa on vapaa 40-hydroksyyliryhmä ja O-substituoitu 3-O-asema. UV-spektrit 1 MeOH:ssa (268 nm, 316 nm, 360 nm) ja diagnostisia siirtoreagensseja lisättäessä [48] olivat tyypillisiä 3-O-glykosyloidun kaempferolin vastaaville (positiivinen siirtymä NaOAc:lla, stabiili muutos NaOMen kanssa). Normaali 1:n happohydrolyysi (2 N vesipitoinen HCl, 3 h, 100 ◦C) tuotti glukoosia (vertailupaperikromatografia, Co-PC), kaempferolia ja 3,4-dihydroksifenyylietikkahappoa (UV) absorptio- ja 1H-NMR-spektrit yksittäisille näytteille, jotka on eristetty hydrolysaatin etyyliasetaattiuutteen preparatiivisilla paperikromatogrammeilla). Näin ollen 1 on kaempferoli-3-O-(3,4-dihydroksifenyyliasetyyliglukosidi). Yhdiste otetaan talteen muuttumattomana sen jälkeen, kun sitä on inkuboitu -glukosidaasientsyymin kanssa 24 tuntia, mikä osoittaa, että glukosyyliosa on asyloitunut. Molekyylikaavan 1 pääteltiin olevan C29H26O14 sen negatiivisen HRESI-massaspektrin perusteella, joka osoitti [MH]−-ionin m/z:llä=597,5302 (lask. C29H25O14, 597,5015). ESI-MS-koe (negatiivinen ionimoodi) antoi kvasimolekyylisen ionihuipun [MH]− arvolla m/z: 597, mikä osoitti molekyylipainon 598 yhdelle. Muita fragmentti-ionipiikkejä ESI-MS-MS-spektrissä olivat havaittu m/z:ssä: [MH]−: 447, 167 ja 285, mikä vastaa dihydroksifenyyliasetaatin häviämistä lähtöyhdisteestä 1, kun taas fragmentti-ionit m/z:ssä 285 ja m/z 167 johtuivat kaempferolista ja dihydroksifenyylietikkahappoosat, vastaavasti. 1:n molekyylin kaikkien osien kiinnittymiskohdan määrittämiseksi ja kaikkien hiili- ja protoniresonanssien täyden osoittamisen mahdollistamiseksi 1:n NMR-spektroskooppinen analyysi, mukaan lukien 1D- 1H ja 13C sekä 2D-HSQC ja HMBC , suoritettiin sitten. Viidestä signaalista sokerialueella välillä δ ppm 62,25 - 76,9 ja anomeerisesta hiilisignaalista, joka sijaitsee 99,13 ppm:ssä, osoitettiin, että sokeriosan täytyy olla kiinnittynyt kaempferolin kohtaan 3, koska tämä C-3-hiilisignaali siirrettiin ylöspäin ja vastaavat orto- ja para-hiilisignaalit siirrettiin alaspäin (katso kokeellinen). Samanlaiset muutokset ovat hyvin tunnettuja Nawwarin et al. [48]. Tämän vahvistivat edelleen HMBC-spektrissä tunnistetut 3 J pitkän kantaman korrelaatiot, jolloin löydettiin yksi ristisignaali, joka korreloi anomeerisen glukoosiprotonin H-100 signaalin δ 5,42:ssa flavonoli C-3-hiilen kanssa. signaali δ 133,5. Glukoosiosan -konfiguraatio johdettiin C-100:n kemiallisesta siirtymästä 99,13 ppm:ssä. Sokerihiilen kemialliset siirtymäarvot vahvistivat tämän osan pyranoosimuodon [48]. Myös 1:n1H-NMR-spektri oli ehdotetun rakenteen mukainen. Anomeerisen protonisignaalin kemiallinen siirtymä arvolla δ 5,42 ppm (d, J=8 Hz) osoitti, että anomeerinen hiili on kiinnittynyt kaempferoliosaan C-3:ssa (δppm 133,5) ja määritetty kytkentävakio 8 Hz, todista glukoosiosan -konfiguraatio. Sokeriosan konformaatio on 4C1, jota seuraavat edellä käsitellyt -konfiguraatiot.

Myös 3,4-dihydroksifenyylietikkahappoosan kiinnittyminen C-600-metyleeniglukopyranoosiosaan seurasi tämän hiilen signaalin alaskentän siirtymisestä arvoon 8 ppm 62,2513C-NMR-spektrissä. Tämän vahvisti edelleen HMBC-spektrin ristipiikki, joka korreloi metyleeniglukoosiprotonien signaalit δ 4,04 (H-600 a) ja δ 4,2 ppm (H-600 b) karbonyylihiileen. 3,4-dihydroksifenyylietikkahappoosa δ 176,26 ppm:ssä. Nämä ja yllä annetut tiedot vahvistivat lopulta yhdisteen 1 rakenteen olevan uusi kaempferoli 3-O- - 4C1-(600 -O-3,{ {24}}dihydroksifenyyliasetyyliglukopyranosidi) (KDPAG), raportoitu ensimmäistä kertaa luonnossa, koska se edustaa ensimmäistä asylaatiota 3,4-hydroksifenyylietikkahapolla yhdessä flflavonoidikemian kanssa (kuva 1).

Lisätietoja: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501